健脾和胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

趙 丹，許紹蘭，李 蔚，朱詩竟，毛峻琴

·論 著·

健脾和胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

趙 丹1，許紹蘭1，李 蔚2，朱詩竟1，毛峻琴1

目的 研究并建立健脾和胃顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用TLC法對健脾和胃顆粒中的丹參、山楂和黨參三味藥進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測定健脾和胃顆粒丹參中的丹酚酸B含量，Agilent Eclipse Plus C18柱（4．6×250 mm，5 μm），以甲醇?乙腈?1．67%甲酸水溶液（27∶9∶64）為流動(dòng)相；檢測波長為286 nm，柱溫25℃，流速1．0 mL／min，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果 試驗(yàn)采用TLC定性鑒別的三味藥色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對照無干擾；以HPLC法測定健脾和胃顆粒丹參中的丹酚酸B，丹酚酸B濃度在12．1856～389．94 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為Y＝6．5459X－3．7811（r＝0．9999，n＝6），回收率為99．97%，RSD為1．07%。結(jié)論 本試驗(yàn)確定的方法操作簡單、靈敏、準(zhǔn)確，可用于健脾和胃顆粒的質(zhì)量控制。

健脾和胃顆粒；丹參；山楂；黨參；丹酚酸B；鑒別；含量測定

健脾和胃顆粒為解放軍105醫(yī)院自制制劑，是由丹參、黨參、山楂等12味組成的復(fù)方制劑，具有健脾利濕、疏肝理氣、清熱活血等功效。為了提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文使用TLC法對丹參、山楂和黨參進(jìn)行了定性鑒別，并采用HPLC法測定健脾和胃顆粒丹參中丹酚酸B含量，提高并完善了健脾和胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1?3］。

1 儀器與試藥

1．1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀（安捷倫公司，四元泵，DAD檢測器）、BT25S型電子分析天平（德國Sartorius）、KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、WD?9403型紫外分析儀（北京市六一儀器廠）、硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）。

1．2 試藥 健脾和胃顆粒（規(guī)格∶15g／袋，盒／10袋，解放軍105醫(yī)院制劑室，批號(hào)140721、140919、141205）、丹酚酸B對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)∶111562?201313，含量為97．0%）、丹參對照藥材（120923?201414）、山楂對照藥材（121138?200905）和黨參對照藥材（121057?201206）均購自中國食品藥品檢定研究院，陰性對照品由本院自制，水為純化水，甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 TLC鑒別

2．1 健脾和胃顆粒丹參鑒別 取健脾和胃顆粒與陰性對照樣品各2．0 g，研細(xì)，分別加無水乙醚10 mL，振搖放置1 h，過濾并將濾液揮干，殘?jiān)? mL乙酸乙酯溶解，作為供試品溶液和陰性樣品溶液；另取丹參藥材、對照藥材各1 g，同法制成藥材、對照藥材溶液。照文獻(xiàn)［4］薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（4∶1）為展開劑展開，然后取出晾干。健脾和胃顆粒供試品在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)［5］。見圖1。

圖1 丹參薄層色譜圖

2．2 健脾和胃顆粒山楂鑒別 取健脾和胃顆粒與本品陰性對照樣品各3 g，研粉，分別加乙酸乙酯10 mL，超聲處理15 min，濾過后取濾液濃縮成1 mL，作為供試品溶液和陰性樣品溶液；另取山楂對照藥材1 g，加乙酸乙酯4 mL，同法制成對照藥材溶液。照文獻(xiàn)［4］薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯?乙酸乙酯?甲酸（20∶4∶0．5）為展開劑［6］，展開，取出，晾干。噴以硫酸乙醇溶液（3→10），在80℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。健脾和胃顆粒供試品，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖2。

圖2 山楂薄層色譜圖

2．3 健脾和胃顆粒黨參鑒別 取健脾和胃顆粒與本品陰性對照樣品各20 g，研細(xì)，分別加甲醇超聲提取兩次（每次50 mL）每次30 min，濾過并將濾液濃縮至干，加水20 mL使溶解，加三氯甲烷50 mL提取，棄去三氯甲烷液，水溶液用水飽和正丁醇提取2次，每次25 mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)雍?%硫酸的45%乙醇溶液20 mL，加熱回流1 h，取出，水浴蒸取乙醇，加三氯甲烷提取兩次，每次25 mL，合并三氯甲烷液，用水50 mL振搖洗滌，棄去水洗液，三氯甲烷液蒸干，殘?jiān)右掖? mL，分別作為健脾和胃顆粒供試品溶液和陰性樣品溶液。再取黨參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照文獻(xiàn)［4］薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷?乙酸乙酯（1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干后噴以10%硫酸乙醇溶液［7］，加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖3。

圖3 黨參薄層色譜圖

3 含量測定

3．1 色譜條件 色譜柱∶Agilent eclipse plus C18柱（4．6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相∶甲醇?乙腈?1．67%甲酸水溶液（27∶9∶64）；檢測波長為286 nm。柱溫25℃；流速1．0 mL／min；進(jìn)樣量10 μL。

3．2 溶液的配制 ①對照品溶液的制備∶精密稱取丹酚酸B對照品4．02 mg，置于10 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。②供試品溶液的制備∶取健脾和胃顆粒粉末2 g，置于錐形瓶中，加75%甲醇20 mL，稱重，超聲45 min，放冷，甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取濾液即得。

3．3 專屬性（空白對照試驗(yàn)） 按照上述色譜條件，精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測定丹酚酸B含量。結(jié)果顯示，對照品溶液中丹酚酸B的保留時(shí)間為18．0 min，健脾和胃顆粒樣品溶液中丹酚酸B的保留時(shí)間為17．8 min，陰性制劑供試品溶液在丹酚酸B對照品色譜的相應(yīng)位置上無干擾。見圖2。

3．4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品儲(chǔ)備溶液1 mL，逐級稀釋，搖勻。制得濃度分別為389．94 μg／mL，194．97μg／mL，97．485μg／mL，48．7425 μg／mL，24．3713 μg／mL，12．1856 μg／mL的對照品溶液系列，各取10 μL進(jìn)行測定，進(jìn)行回歸分析。橫坐標(biāo)∶對照品濃度X（μg／mL），縱坐標(biāo)∶峰面積Y，回歸方程為∶

Y＝6．5459X－3．7811（r＝0．9999，n＝6）

結(jié)果表明∶丹酚酸B含量在12．1856～389．94 μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3．5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取丹酚酸B對照品溶液10 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0．47%。

圖2 專屬性試驗(yàn)

3．6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)供試品溶液（批號(hào)∶140922），分別于配制后0、2、4、6、8 h測定峰面積，丹酚酸B RSD為0．86%（n＝5）。結(jié)果表明，供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3．7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（批號(hào)∶140721）的健脾和胃顆粒6份，按“3．2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并進(jìn)行色譜測定。結(jié)果樣品中丹酚酸B的平均含量為0．9552 mg／g，RSD為1．07%，表明此法重復(fù)性良好。

3．8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的同一批樣品（批號(hào)∶140721）約0．5 g（9份），精密稱定，分別置量瓶中，于①②③號(hào)量瓶中各精密加入丹酚酸B對照品溶液3 mL（每mL中含丹酚酸B 0．2328 mg），④⑤⑥號(hào)量瓶中各精密加入5 mL，⑦⑧⑨號(hào)量瓶中各精密加入7 mL，按“3．2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，依色譜條件測定，記錄峰面積，結(jié)果見表1。

3．9 樣品含量測定 按“3．2”項(xiàng)下方法制備不同批號(hào)共3批健脾和胃顆粒供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液10 μL進(jìn)樣，以峰面積計(jì)算樣品中丹酚酸B的含量，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 丹酚酸B含量測定結(jié)果

3．10 提取方法的選擇 精密稱定同一批號(hào)（140721）的樣品1．0 g若干份，分別加入10 mL 75%甲醇進(jìn)行回流至不同的時(shí)間及超聲提取不同時(shí)間的試驗(yàn)，按照前法處理制備供試品溶液后測定。試驗(yàn)結(jié)果（表3）表明∶超聲提取要比回流提取效率高，因此選擇超聲提取，且超聲45 min時(shí)的提取效率最高。

表3 提取方法的選擇

4 討 論

本試驗(yàn)中健脾和胃顆粒提取溶劑選用甲醇，因甲醇提取的效率最高［8］。經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)超聲提取要比回流提取效率高［9］，且超聲45 min時(shí)的提取效率最高。本文參照《中國藥典》2010版一部骨碎補(bǔ)中丹酚酸B的含量測定方法，選擇甲醇?乙腈?1．67%甲酸水溶液（27∶9∶64）作為流動(dòng)相，目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰分離效果亦較好。

［1］ 王 閏，孟 慧，許 勇．復(fù)方甘草軟膏的制備及含量測定法的建立［J］．東南國防醫(yī)藥，2015，17（4）∶389?391．

［2］ 申 欣，查婭妮．風(fēng)熱感冒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］．中國藥業(yè)，2008，17（9）∶25．

Study on the quality standard of Jianpihewei Granules

ZHAO Dan1，XU Shao?lan1，LI Wei1，ZHU Shi?jing1，MAO Jun?qin1． 1．Department of Pharmacy，85 Hospital of PLA，Shanghai 200052，China；2．Department of Pharmacy，105 Hospital of PLA，Hefei，Anhui 361000，China

Objective To study and establish the quality standard for Jianpihewei Granules．Methods TLC was used to i?dentify salvia miltiorrhizae，crataegus pinnatifida and codonopsis pilosula in Jianpihewei Granules．The content of salvianolic acid B in salvia miltiorrhizae was determined by HPLC．Methanol?acetonitrile?1．67%formic acid solution（27∶9∶64）was used for mobil phase of Agilent Eclipse Plus C18（4．6×250 mm，5 μm）．The detection wavelength was 286 nm，flow rate was 1．0 mL／min and the temperature of column was 25℃．The injection volume was 10 μL．Results The spots on TLC are clear without negative sample interfrence．The concentration of salvianolic acid B in salvia miltiorrhizae determined by HPLC showed a good linear relationship withpeak area in the range of 12．1856－389．94 μg／mL of salvianolic acid B．The linear regression equation was Y＝6．5459X－3．7811（r＝0．9999，n＝6）．The recovery was 99．97%and RSD was 1．07%．Conclusion The method is simple，sensibility and accuracy，which can be used in quality control of Jianpihewei Granules．

Jianpihewei Granules；salvia miltiorrhizae；crataegus pinnatifida；codonopsis pilosula；salvianolic acid B

R286

A

10．3969／j．issn．1672?271X．2015．06．011

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題（14ZJZ03?1）

1．200052上海，解放軍85醫(yī)院藥劑科；2．361000安徽合肥，解放軍105醫(yī)院藥劑科

毛峻琴，E?mail∶xushaolan＠126．com