黃芪多糖和三七總皂苷配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織Ⅳ型膠原及層黏連蛋白表達(dá)的影響

蔣 賽,彭曉珊,黃志華,王碩輝，謝 月,唐映紅，2*（.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 40208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長沙 40208）

黃芪多糖和三七總皂苷配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織Ⅳ型膠原及層黏連蛋白表達(dá)的影響

蔣 賽1,彭曉珊1,黃志華1,王碩輝1，謝 月1,唐映紅1，2*
（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長沙 410208）

目的探討黃芪多糖（APS）和三七總皂苷(PNS)配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織Ⅳ型膠原及層黏連蛋白的影響。方法通過腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，將糖尿病模型大鼠隨機(jī)分為模型組、APS組、PNS組、APS組+PNS組和貝那普利組，除模型組外，每天給藥1次，連續(xù)給藥 8周。8周后測定大鼠24 h尿總蛋白、血糖、血肌酐和尿素氮；采用免疫組化法測定糖尿病大鼠腎組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、血小板源性生長因子（PDGF-BB）、Ⅳ型膠原蛋白（Col-Ⅳ）和層粘連蛋白（LN）的表達(dá)。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠24 h尿總蛋白、血糖、血肌酐和尿素氮含量顯著升高（P＜0.01），腎組織中TGF-β1、PDGF-BB、Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)（P＜0.01）；與模型組比較，APS、PNS、APS與PNS配伍組大鼠的24 h尿總蛋白、血糖、血肌酐和尿素氮顯著降低(P＜0.01），腎組織中TGF-β1、PDGF-BB、Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)顯著減少（P＜0.01），APS與PNS配伍組的作用優(yōu)于APS、PNS單用組（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠的腎臟具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與其下調(diào)TGF-β1、PDGF-BB、Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)，從而抑制細(xì)胞外基質(zhì)合成有關(guān)。

黃芪多糖；三七總皂苷；配伍研究；糖尿病大鼠；轉(zhuǎn)化生長因子β1；血小板源性生長因子；Ⅳ型膠原蛋白；層粘連蛋白

黃芪多糖 (Astragalus Polysaccharidde，APS)是黃芪的有效組分之一，研究表明：APS可改善糖尿病腎病患者的臨床癥狀[1]，對(duì)糖尿病大鼠腎臟具有保護(hù)作用[2]APS可降低腎臟水通道蛋白2 mRNA的過度表達(dá)，使糖尿病腎病大鼠腎足細(xì)胞nephrin和podocin蛋白表達(dá)增加[3-4]。三七總皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）是三七的活性組分，研究表明：在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用PNS治療早期糖尿病腎病療效顯著[5]，PNS可減少糖尿病大鼠腎組織丙二醛、糖基化終產(chǎn)物含量、降低糖尿病大鼠腎組織血管內(nèi)皮生長因子及轉(zhuǎn)化生長因子-β的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)在腎小球的聚積[6-7]。APS 和PNS對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用及其作用機(jī)制有較多報(bào)道研究，但二者對(duì)糖尿病大鼠腎組織Ⅳ型膠原蛋白（Col-Ⅳ）和層粘連蛋白（LN）的影響如何，二者配伍后對(duì)糖尿病大鼠腎臟是否具有協(xié)同保護(hù)作用，目前尚未見實(shí)驗(yàn)報(bào)道。本研究旨在觀察APS 和PNS對(duì)糖尿病大鼠腎組織Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)的影響以及二者合用后對(duì)糖尿病大鼠腎臟是否具有協(xié)同保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)SD雄性大鼠80只，體質(zhì)量（200±20）g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(湘)2011-0003。大鼠飼以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，12 h交替光線照明，室內(nèi)通風(fēng)良好，室溫20～25℃，相對(duì)濕度40%～50%。

1.2 試劑及藥品

黃芪多糖（APS）：批號(hào)UD130927，含量77%，由陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司提供；三七總皂苷（PNS）：批號(hào) 130628，含量93.8%，由自廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司提供；鹽酸貝那普利片：批號(hào)AE20130902，深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；鏈脲佐菌素（STZ）:批號(hào)9058035，北京 Solarbio科技有限公司生產(chǎn)；總蛋白試劑盒（批號(hào)131181），血糖試劑盒 （批號(hào)133161），肌酐試劑盒 （批號(hào)132831），尿素氮試劑盒（批號(hào)131071）：均由中生北控生物科技股份有限公司提供；兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗體：批號(hào)20140103，規(guī)格0.2于mL/支，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；兔抗大鼠PDGF-BB多克隆抗體（批號(hào)20140218），兔抗大鼠CoL-Ⅳ多克隆抗體（批號(hào)20140706），山羊抗兔二抗（批號(hào)20130706）：均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；兔抗大鼠LN多克隆抗體：（批號(hào)20140920）武漢博士德生物工程公司。

1.3 儀器

ONETOUCH血糖測量儀及血糖試紙 （強(qiáng)生公司）；PUS-2018G半自動(dòng)生化分析儀 （北京普朗新技術(shù)有限公司）；Shandon325石蠟切片機(jī) （英國Shandon公司）；Motic B5型顯微攝像系統(tǒng) （麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司）；MIAS醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng) （北航公司生產(chǎn)）。

1.4 動(dòng)物模型的建立

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食16 h，大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）60 mg/kg（用 0.1 mol/L、pH 4.4檸檬酸緩沖液在冰浴上配制 1%STZ），剩余大鼠作為正常對(duì)照組，注射等體積的檸檬酸緩沖液。STZ注射 72 h后，以尿糖+++，血糖高于16.7 mmol/L者確定為糖尿病大鼠[8]。造模成功后，將成模大鼠分為模型組、APS組、PNS組、APS+PNS組和貝那普利組，并設(shè)正常對(duì)照組，APS組灌胃給予APS 300 mg/(kg·d)，PNS組灌胃給予PNS 100 mg/ (kg·d)，APS+PNS組灌胃給予PNS 100 mg/(kg·d)+ APS 300 mg/(kg·d)，貝那普利組灌胃給予貝那普利0.9 mg/(kg·d)，給藥體積為10 ml/kg,模型組和正常對(duì)照組大鼠灌胃給予等體積蒸餾水，每天給藥 1次，連續(xù)給藥 8周。

1.5 指標(biāo)檢測

第 8周末次給藥后，將大鼠置于代謝籠中，收集大鼠 24 h尿液，測定尿量后離心，取上清液用雙縮脲法測定大鼠尿液中總蛋白的含量。大鼠稱體重后，用 10% 水合氯醛 0.35 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血約 10 mL，分離血清，采用葡萄糖氧化酶法測定大鼠血清中葡萄糖的含量；采用苦味酸法測定大鼠血清中血肌酐的含量；采用酶偶聯(lián)速率法測定大鼠血清中尿素氮的含量。取左腎用pH 7.4、10%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片后進(jìn)行免疫組化檢測。腎組織切片4 μm，二甲苯、酒精脫蠟，蒸餾水沖洗；磷酸緩沖液組織抗原修復(fù)，3%雙氧水室溫避光封閉 5-10 min；分別滴加一抗兔抗大鼠TGF-β1、PDGF-BB、CoL-Ⅳ、LN多克隆抗體(稀釋度l∶100)。4℃冰箱過夜，PBS液沖洗；滴加二抗，室溫30 min，PBS液沖洗，室溫 DAB顯色5～10 min，出現(xiàn)陽性反應(yīng)，蒸餾水沖洗終止反應(yīng)；蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。每張切片在高倍鏡下(× 400)拍攝5個(gè)視野，采用MIAS顯微圖像分析系統(tǒng)測定每個(gè)腎小球視野的光密度值，計(jì)算平均光密度值（AOD），將AOD作為蛋白表達(dá)的定量標(biāo)準(zhǔn)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況比較

正常對(duì)照組大鼠精神狀況良好，皮毛有光澤，活動(dòng)自如，反應(yīng)靈敏；糖尿病模型組大鼠精神萎靡、明顯消瘦、多尿、多飲，毛色發(fā)黃無光澤，反應(yīng)遲鈍；各給藥組大鼠存活大鼠精神狀況、反應(yīng)靈敏度均比模型組大鼠要有明顯的改善。

2.2 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠血糖、肌酐和尿素氮的影響

與正常對(duì)照組比較，糖尿病模型組大鼠血糖、肌酐、尿素氮含量均顯著增加（P＜0.01）；與模型組比較，APS、PNS組及APS與PNS配伍組大鼠血糖、肌酐、尿素氮含量明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），APS與PNS配伍組的作用優(yōu)于各APS、PNS單用組 （P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果見表 1。

表1 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠血糖、肌酐和尿素氮的影響 （±s）

表1 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠血糖、肌酐和尿素氮的影響 （±s）

注：與正常對(duì)照組比較**P＜0.01；與模型組比較 △P＜0.05，△△P＜0.01，與APS組比較，▲▲P＜0.01；與PNS組比較，▽P＜0.05,▽▽P＜0.01。

?

2.3 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織 TGF-β1蛋白表達(dá)的影響

正常對(duì)照組大鼠腎小球系膜有少量的 TGF-β1表達(dá)，模型組大鼠腎小球系膜和基底膜 TGF-β1蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)，AOD顯著升高，與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；APS單用組、PNS單用組、APS與PNS配伍組大鼠腎組織TGF-β1蛋白表達(dá)顯著減少，AOD顯著降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），APS與PNS配伍組的作用優(yōu)于APS與PNS單用藥組（P＜0.01）。結(jié)果見圖1與表2。

圖1 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織TGF-β1蛋白表達(dá)的影響（×400）

表2 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織TGF-β1和PDGF-BB蛋白表達(dá)的影響 （±s）

表2 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織TGF-β1和PDGF-BB蛋白表達(dá)的影響 （±s）

注：與正常對(duì)照組比較，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△△P＜0.01；與APS比較，▲▲P＜0.01；與PNS組比較，▽▽P＜0.01。

?

2.4 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織PDGFBB蛋白表達(dá)的影響

正常對(duì)照組大鼠腎小球系膜和基膜有少量的PDGF-BB蛋白表達(dá)，模型組大鼠腎小球系膜和腎小球基底膜PDGF-BB蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)，AOD升高，與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），與模型組比較，APS單用組、PNS單用組、APS與PNS配伍組腎組織PDGF-BB蛋白表達(dá)均顯著減弱，AOD值顯著升高，與模型組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。APS與PNS配伍組的作用優(yōu)于APS組、PNS單用組（P＜0.01）。結(jié)果見圖2與表2。

2.5 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織Col-Ⅳ蛋白表達(dá)的影響

圖2 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織PDGF-BB蛋白表達(dá)的影響（×400）

正常對(duì)照組大鼠腎組織中 Col-Ⅳ 蛋白少有表達(dá)；模型組大鼠腎組織中 Col-Ⅳ 蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)，Col-Ⅳ 蛋白表達(dá)主要位于腎小球系膜、腎間質(zhì)以及腎小管上皮細(xì)胞的胞漿中，模型組AOD 升高，與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），APS組、PNS組、APS與PNS配伍組大鼠腎組織Col-Ⅳ蛋白表達(dá)顯著減少，AOD顯著降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），APS與 PNS配伍組的作用優(yōu)于 APS、PNS單用組（P＜0.01）。結(jié)果見圖 3和表 3。

圖3 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織Col-Ⅳ蛋白表達(dá)的影響（×400）

2.6 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織 LN蛋白表達(dá)的影響

正常對(duì)照組大鼠腎小球系膜有少量的LN蛋白表達(dá)，模型組大鼠腎組織LN蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)，LN蛋白表達(dá)主要在腎小球系膜和腎小管上皮細(xì)胞，模型組AOD升高，與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），APS組、PNS組大鼠腎組織 LN蛋白表達(dá)減少，AOD降低，但與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）,APS與PNS配伍組腎組織LN蛋白表達(dá)顯著減少，AOD顯著降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），APS與PNS配伍組的作用優(yōu)于PNS、APS單用組（P＜0.05，P＜0.01）。

表3 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)的影響 （±s）

表3 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)的影響 （±s）

注：與正常對(duì)照組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01；與APS組比較，▲▲P＜0.01；與PNS組比較，▽P＜0.05，▽▽P＜0.01。

?

圖4 APS和PNS配伍對(duì)糖尿病大鼠腎組織LN蛋白表達(dá)的影響（×400）

3 討論

轉(zhuǎn)移生長因子-β1(TGF-β1)是最重要的促纖維化因子，可促進(jìn)系膜細(xì)胞的合成和抑制細(xì)胞基底膜的降解，加速系膜細(xì)胞外基質(zhì)的積聚；可增大細(xì)胞直徑造成腎小球的肥大[9]。STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠在出現(xiàn)高血糖24 h后，腎小球TGF-β1表達(dá)顯著增高[10]，并隨著糖尿病病程的進(jìn)展，腎臟TGF-β1的表達(dá)量不斷增加[11]。說明通過抑制TGF-β1在腎臟的過度表達(dá)可以有效控制腎小球硬化進(jìn)展，防治糖尿病腎病的發(fā)生。

血小板源性生長因子 （Platelet-derived growth factor,PDGF-BB）是多肽類生長因子中對(duì)系膜細(xì)胞促有絲分裂作用最強(qiáng)的一種，它能與PDGF-α受體結(jié)合誘導(dǎo)TGF-β1的合成導(dǎo)致系膜增生；與PDGF-β受體結(jié)合誘導(dǎo)系膜細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，促進(jìn)ECM合成，并且能夠收縮血管，影響腎臟的功能[12]。通過PDGF-BB拮抗劑的治療，能夠減少腎小球系膜細(xì)胞的增殖和腎小球硬化[13]，而用TGF-β1抗體阻斷了TGF-β1的表達(dá)，PDGF-BB的表達(dá)也不再升高[14]，可見TGF-β1與PDGF-BB共同促進(jìn)腎臟的損害。

Ⅳ型膠原蛋白（Collagen Type，Col-Ⅳ）和層粘連蛋白 （Laminin,LN）主要存在于細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），是腎小球基底膜的主要構(gòu)成成分。文獻(xiàn)證實(shí)糖尿病患者Col-Ⅳ，LN升高與腎臟 ECM生成增加有密切關(guān)系[15-16]。在長期處于 DM 時(shí)，多種細(xì)胞因子的上調(diào)使Col-Ⅳ的合成增加，促進(jìn)ECM的聚集，從而改變腎小球基底膜的結(jié)構(gòu)，影響腎小球的濾過作用，導(dǎo)致腎小球硬化[17]。臨床研究表明在蛋白尿增多之前，糖尿病患者體內(nèi)的Col-Ⅳ的蛋白表達(dá)就已增多，并隨病變的加重而增加[18-19]。實(shí)驗(yàn)研究也表明糖尿病大鼠腎臟腎小球系膜基質(zhì)分?jǐn)?shù)增大，Col-Ⅳ蛋白表達(dá)增多，出現(xiàn)明顯的腎小球硬化[20]。LN是一組糖蛋白，由通過二硫鍵結(jié)合的3條多肽鏈α、β和γ組成，是基底膜的重要組成成分，位于基底膜透明層，能夠影響基底膜的電荷選擇性，并與Col-Ⅳ一起形成基底膜骨架[21]。有研究證實(shí)，比起微量白蛋白排泄率，在糖尿病腎病患者體內(nèi)，LN出現(xiàn)的更早，且更加準(zhǔn)確，更能作為糖尿病腎病早期的診斷指標(biāo)[22]。由此可見，Col-Ⅳ，LN可以反映腎臟病變情況[23]。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，采用STZ建立糖尿病大鼠模型，8周后糖尿病大鼠腎臟TGF-β1和PDGF-BB蛋白表達(dá)水平顯著升高，腎組織內(nèi)Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)同樣顯著增加，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致，證明DM大鼠確實(shí)存在著基底膜增厚，系膜增生的情況。而給予APS、PNS后，糖尿病大鼠腎組織的TGF-β1、PDGF-BB、Col-Ⅳ和LN蛋白表達(dá)較模型組降低。APS與PNS配伍組的作用優(yōu)于APS、PNS單用組，提示APS與PNS配伍后對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用增強(qiáng)，其對(duì)糖尿病腎臟的保護(hù)作用可能與其抑制TGF-β1、PDGF-BB、LN和Col-Ⅳ蛋白表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)合成有關(guān)。

[1]曹 聞,張瑩雯.黃芪多糖沖劑治療糖尿病腎病的臨床觀察[J].湖北中醫(yī)雜志,2007，29(4):12-13.

[2]王巖巖，康 白，李廣宙，等.黃芪多糖對(duì)糖尿病大鼠腎小管的保護(hù)作用[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2009，21(5):445-447.

[3]毛淑梅,李承德,王 琳,等.黃芪多糖對(duì)糖尿病大鼠腎臟水通道蛋白2表達(dá)的影響[J].中國糖尿病雜志,2010，18（9）：701-703

[4]李志杰,張 悅，劉煜敏，等.黃芪多糖對(duì)早期糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞nephrin和podocin表達(dá)的影響 [J].中國病理生理雜志，2011,27（9）：1 772-1 776.

[5]李忠亮，常冰玲.血塞通治療糖尿病腎病的療效觀察[J].中國誤診學(xué)雜志，2005，5（11）：2 031-2 032.

[6]徐 剛，劉茂林，傅珍春,等.三七總皂苷對(duì)糖尿病腎病大鼠的腎臟保護(hù)作用及機(jī)制[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2012，28（9）：665-666.

[7]杜月光,柴可夫,楊明華,等.三七皂苷對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2010,17(1):40-41.

[8]戴 冰，吳沁璇，肖子曾，等.六味地黃湯水提醇溶部位對(duì)2型糖尿病大鼠胰島及腎臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，35（4）：20-23.

[9] Choi ME,Kim EG, Huang Q, et al. Rat mesangial cell hypertrophy in respones to transforming growth factor-beta1 [J].Kidney Int,1993,44(5):948-58.

[10]Shankland SJ,Scholey JW,Ly H,et al.Expression of transforming growth factor-beta 1 during diabetic renal hypertrophy [J].Kidney Int,1994,46(2):430-442.

[11]徐 靜,李忠誠,易蘭蘭,等.蛋白激酶C和TGF-β1在糖尿病大鼠腎臟中的表達(dá)[J].中國老年學(xué)雜志,2006,3(26):343-345.

[12]Young BA,Johnson RJ,Alpers CE,et al.Cellular events in the evolution of experimental diabetic nephropathy [J].Kidney lnt,1995,47(3):935-44.

[13]Kurogi Y.Mesangial cell proliferation inhibitors for the treatment of proliferative glomerular disease[J].Med Res Rev, 2003,23(1):15-31.

[14]Wang SN,Hirschberg R.Growth factor ultrafiltration in experimental diabetic nephropathy contributes to interstitial fibrosis [J].Am J Physiol Renal Physiol,2000,278(4):554-60.

[15]于 平，段惠軍.細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成成份在糖屎病腎病中的變化[J].河北醫(yī)藥，1999，21(4)：209.

[16]馮文煥，汪太望，葉 真，等.血和尿?qū)诱尺B蛋白與2型糖尿病患者尿白蛋白關(guān)系的研究[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志，2003，23(7)：412-414.

[17]Sumida Y,Ura H,Yano Y,et al.Abnormal metabolism of type-Ⅳ collagen in normotensive non insulin-dependent diabetes mellitus patients[J].Horm Res,1997,48(1):23-28.

[18]李振江,雷 潔,鐘芳紅,等.糖尿病腎病TGF-β1,Ⅳ型膠原水平變化的臨床意義及辛伐他汀的治療作用 [J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2004,25(10):942-944.

[19]杜正馳,趙 妍.血清TGF-β1，Ⅳ型膠原，層粘連蛋白與糖尿病腎病的關(guān)系[J].黑龍江醫(yī)藥,2013,26(3):402-406.

[20]李文從,馬博清,高林輝,等.1型糖尿病大鼠腎臟Ⅳ型膠原的表達(dá)及坎地沙坦的干預(yù)作用[J].中國老年學(xué)雜志,2011,31:286-287.

[21]陳東暉,黃海云.層粘連蛋白-5結(jié)構(gòu)及功能的研究進(jìn)展[J].國際口腔醫(yī)學(xué)雜志,2007,34(3):181-184.

[22]張永祥.層粘連蛋白測定在糖尿病腎病中的意義[J].青海醫(yī)藥雜志,2001,31(12):23-24.

[23]劉偉芳,許美倫,吳偉瓊.糖尿病腎病與血清Ⅳ膠原、層黏連蛋白的相關(guān)性[J].廣東醫(yī)學(xué),2004,25(4)：404-405.

（本文編輯 蘇 維）

Effect of Astragalus Polysaccharides Combined with Panax Notoginseng Saponins on the Expression of Col-Ⅳ and LN in Renal Tissues of Diabetic Rats

JIANG Sai1,PENG Xiaoshan1,HUANG Zhihua1,WANG Shuohui1，XIE Yue1，TANG Yinghong1,2*
(1.Department of Pharmacology,College of Pharmacy,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Huna 410208,China; 2.Key Lab of Modernization of Chinese Medicine,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China)

ObjectiveTo investigate the effect of astragalus polysaccharides (APS)combined with panax notoginseng saponins (PNS)on the expression of Col-IV and LN in renal tissues of diabetic rats.MethodsDiabetic rat model was induced by injecting streptozotocin intraperitoneally.The diabetic rats were randomly divided into the model,APS,PNS,APS +PNS,benazepril groups.The rats were administered medicine intragastrically one time a day for 8 weeks.Urinary protein level in 24h,blood sugar,blood creatinine and urea nitrogen were determined.The protein expression of transforming growth factor beta 1(TGF-β1),platelet-derived growth factor(PDGF-BB),type IV collagen(Col-IV)and laminin(LN)in the renal tissue were determined by immunohistochemistry.ResultsCompared with the normal control group,unrinary protein level in 24 h,blood glucose,creatinine and urea nitrogen level in rats in the model group were significantly higher than those in normal control group (P＜0.01);The protein expression of TGF-β1,PDGF-BB,Col-IV and LN in the renal tissue were enhanced (P＜0.01).Compared with the modelgroup,unrinary protein levelin 24 h,blood glucose,creatinine and urea nitrogen level were reduced (P＜0.01);The protein expression of TGF-β1,PDGF-BB,Col-IV and LN in the renal tissue in rats were decreased significantly (P＜0.01);The effects of APS combined with PNS were better than those of APS and PNS alone groups(P＜0.05,P＜0.01).ConclusionThe combination between APS and PNS had protective effect on kidney of diabetic rats.Its mechanism may be related to inhibiting extracellular matrix synthesis by downregulating the protein expression of TGF-β1,PDGF-BB,Col-IV and LN.

astragalus polysaccharides;panax notoginseng saponins；compatibility study;diabetic rats;transforming growth factor beta 1;platelet-derived growth factor;collagen typeⅣ;laminin

R285.5

A

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.12.005

2015－11－23

湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目 （湘教通 [2012]402-187）；2012地方高校國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201210541005）。

蔣 賽，男，學(xué)士，研究方向：中藥藥理。

*唐映紅，女，教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：tyhong62@qq.com。