近紅外漫反射法檢測(cè)降壓類中成藥中非法添加尼莫地平

張 勛，林 曉，徐 偉，林 羽*（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

·藥物分析·

近紅外漫反射法檢測(cè)降壓類中成藥中非法添加尼莫地平

張 勛，林 曉，徐 偉，林 羽*
（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

目的運(yùn)用近紅外光譜法快速檢測(cè)降壓類中成藥中非法添加尼莫地平。方法采用近紅外漫反射光譜法，以尼莫地平化學(xué)對(duì)照品的近紅外光譜為參照光譜，采用二階導(dǎo)數(shù)進(jìn)行光譜預(yù)處理，選定6 103-5 972 cm-1特定譜段，閾值為80%。結(jié)果采用近紅外透射定性模型分析735批樣品，結(jié)果與液質(zhì)聯(lián)用結(jié)果一致，準(zhǔn)確率達(dá)100%。結(jié)論建立的定性模型可行，該法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高，可用于降壓類中成藥非法添加尼莫地平的快速篩查。

近紅外；尼莫地平；漫反射；降壓類中成藥

近紅外光譜技術(shù) (Near Infeared Spectra，NIRS)具有簡(jiǎn)單、快速、無損等特點(diǎn)，適合于在廣大區(qū)域內(nèi)大規(guī)模地對(duì)藥品的質(zhì)量進(jìn)行快速評(píng)價(jià)分析和監(jiān)控?fù)郊偎幤?。尼莫地平和尼群地平均為二氫吡啶類抗高血壓化學(xué)物質(zhì)，化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，在透射采集模式中具有相同的特征性，筆者曾利用該性質(zhì)采用透射法同時(shí)檢測(cè)降壓類中成藥中非法添加尼莫地平和尼群地平。相同的物質(zhì)在不同采集模式下特質(zhì)性有差異，本文采用近紅外漫反射采集模式，確定尼莫地平單一成分特征譜段，評(píng)價(jià)降壓類中成藥光譜圖與尼莫地平對(duì)照品光譜圖的相似程度，快速判斷降壓類中成藥中是否含有尼莫地平[1-4]。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Bruker-MPA近紅外光譜儀 (OPUS 6.5光譜分析軟件)，Aglient 1200 Series-6410 Triple Quad高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀 (安捷倫公司)，分析天平XS205DU、AL204-IC（上海梅特勒公司）。

1.2 試藥

實(shí)驗(yàn)用樣品來源于2009年福建省食品藥品檢定研究院抽樣品種中的735批檢品，涉及26個(gè)品種。氫氯噻嗪對(duì)照品、尼莫地平對(duì)照品、尼群地平對(duì)照品、硝苯地平對(duì)照品、卡托普利對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100309-200702,100270-200002，100585-200602，100338-200502，100318-200602），鹽酸普萘洛爾原料藥（江蘇省句容市興源化工廠，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.6%，批號(hào)：20090826），維C銀翹片（福建省食品藥品檢定研究院2008年全國(guó)評(píng)價(jià)性抽樣），金牡感冒片（漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司，批號(hào):0906014），羚羊感冒膠囊（漳州市生物化學(xué)制藥廠，批號(hào):09302），腸炎寧片（江西天施康中藥股份有限公司，批號(hào):20080627），鹽酸苯海拉明片（臨汾寶珠制藥有限公司，批號(hào)：080201）。

2 NIR光譜采集

2.1 光譜采集條件

光譜采集范圍：12 500-3 600 cm-1，掃描次數(shù)64，分辨率8 cm-1，方式：積分球漫反射。

2.2 采集對(duì)照品光譜圖

取尼莫地平對(duì)照品，放在積分球檢測(cè)口處檢測(cè)。按光譜采集條件采集光譜圖。

2.3 采集樣品光譜圖

樣品取用量為一次服用劑量。片劑和丸劑直接研細(xì)，膠囊劑去除囊殼，直接取內(nèi)容物。將樣品粉末裝入石英樣品杯中，按光譜采集條件采集原始光譜圖。每批樣品重復(fù)掃描3次，取平均光譜進(jìn)行測(cè)試。26個(gè)品種樣品各取一批，共26批樣品原始光譜圖如圖1所示。

圖1 26個(gè)品種近紅外漫反射原始光譜圖

3 LC-MS/MS法檢測(cè)降壓類中成藥尼莫地平成分

3.1 色譜條件

色譜柱：Welch XB-C18分析柱 （4.6× 250 mm，5 μm）；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈-水（70∶30），等度洗脫；流速：0.5 mL/min；進(jìn)樣體積：5 μL。

3.2 質(zhì)譜條件

電離方式：ESI負(fù)離子檢測(cè)模式；掃描模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；毛細(xì)管電壓：4 000 V；氣體流速: 6 L/min；霧化器壓力:30 psi;其他質(zhì)譜條件參數(shù)詳見表1。

表1 質(zhì)譜MRM參數(shù)

3.3 對(duì)照品溶液的配制

精密稱取尼莫地平對(duì)照品10 mg,置于25 mL棕色容量瓶中，加乙腈溶解，稀釋至刻度，搖勻，使用時(shí)用乙腈稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

3.4 供試品溶液的配制

片劑、丸劑，取一次服用劑量，研細(xì)，精密稱定；膠囊劑，取一次服用劑量，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，并剪碎囊殼，精密稱定；將樣品粉末置于50 mL棕色量瓶中，加入45 mL乙腈超聲10 min，放冷至室溫，乙腈定容至刻度，搖勻；離心機(jī)離心15 min（4 000 r/min）；精密吸取上清液100 μL至250 mL棕色容量瓶中，乙腈稀釋至刻度，0.2 μm濾膜濾過，即得。

4 結(jié)果

4.1 LC-MS/MS結(jié)果

對(duì)樣品進(jìn)行分析，樣品均未檢出含有尼莫地平。

4.2 NIR結(jié)果

以尼莫地平對(duì)照品光譜圖為參考光譜，采用二階導(dǎo)數(shù)光譜預(yù)處理方式，選取6 103-5 972 cm-1為特征吸收譜段，閾值設(shè)定為80%，對(duì)735批樣品進(jìn)行測(cè)試并與液質(zhì)聯(lián)用結(jié)果進(jìn)行比較，未有樣品含有尼莫地平成分，與液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)結(jié)果一致。

4.2.1 NIR特征譜段選擇 將清腦降壓片 （吉林省通化博祥藥業(yè)股份有限公司），添加了尼莫地平原料藥的清腦降壓片和尼莫地平原料藥的NIR圖譜經(jīng)二階導(dǎo)數(shù)（平滑點(diǎn)13）預(yù)處理后，分段比較各譜段相似性 （如圖2所示），發(fā)現(xiàn)在6 103-5 972 cm-1譜段，樣品B、C、D與A具有相同的四重特征峰位，特征性明顯，樣品E與A的峰形有差異。隨著樣品中尼莫地平量的增多（B＞C＞D）,峰高和峰谷越接近A，信號(hào)越強(qiáng)。

圖2 尼莫地平、清腦降壓片及清腦降壓片模擬樣品的NIR譜圖

4.2.3 NIR特征譜段驗(yàn)證 稱取清腦降壓片粉末約2 g，逐加尼莫地平原料藥，混勻，研細(xì)，制備實(shí)驗(yàn)室模擬樣品0-6號(hào)；稱取降壓片粉末約2 g，制備實(shí)驗(yàn)室模擬樣品7-10號(hào)，測(cè)試相關(guān)系數(shù)，測(cè)試結(jié)果如表2所示。

尼莫地平臨床最低初始劑量為40 mg,根據(jù)最次低始劑量及清腦降壓片、降壓片的用法用量，要保證添加的尼莫地平具有藥效，在樣品中非法添加的尼莫地平的量應(yīng)在1.3%～2% 范圍。從表2可知，模擬樣品相關(guān)系數(shù)隨著尼莫地平添加量的增多而增大，進(jìn)一步證明6 103-5 972 cm-1是尼莫地平的特征譜段。在兩種處方差異大的基質(zhì)中添加尼莫地平，制備模擬樣品，達(dá)到閾值的尼莫地平量均小于最低初始劑量，表明選取6 103～5 972 cm-1譜段可以排除清腦降壓片和降壓片基質(zhì)的干擾，所建立的方法可以滿足快速篩查尼莫地平的需要[5]。

4.3 NIR模型驗(yàn)證結(jié)果

4.3.1 模型適用性 在26個(gè)樣品 (如表3所示)中添加尼莫地平原料藥40 mg，混勻，研細(xì)，制備26種模擬樣品。以尼莫地平對(duì)照品光譜圖為參考光譜，采用建立的相關(guān)系數(shù)模型測(cè)試樣品，模擬樣品相關(guān)系數(shù)均大于閾值80%，表明6 103～5 972 cm-1譜段可以排除基質(zhì)的干擾，所建立的方法適用性強(qiáng)，可以滿足快速篩查尼莫地平的需要。

4.3.2 專屬性試驗(yàn) 采用建立的尼莫地平相關(guān)系數(shù)模型測(cè)試氫氯噻嗪對(duì)照品、尼群地平對(duì)照品、硝苯地平對(duì)照品、卡托普利對(duì)照品、鹽酸普萘洛爾原料藥、維C銀翹片、金牡感冒片、腸炎寧片、鹽酸苯海拉明片和羚羊感冒膠囊，相關(guān)系數(shù)均小于80%，未被識(shí)別為含有尼莫地平，表明此模型專屬性強(qiáng)。

表2 近紅外相關(guān)系數(shù)法對(duì)清腦降壓片和降壓片模擬樣品預(yù)測(cè)結(jié)果

5 討論

5.1 分辨率的選擇

在掃描累加次數(shù)保持64不變的情況下，將分辨率設(shè)置為4、8、16、32、64 cm-1掃描尼莫地平原料藥。從理論上說分辨率越高，對(duì)樣品的信息掌握越細(xì)致，也就越容易進(jìn)行光譜分析，但是所攜帶的與樣品無關(guān)的信息就越多。從圖3可以得出尼莫地平在分辨率為 4 cm-1，顯示出更為精細(xì)的信息，但是由于噪聲大，導(dǎo)致6 103-5 972 cm-1處峰的形狀變形，無用信息干擾尼莫地平特征性。當(dāng)分辨率為8 cm-1時(shí)，6 103-5 972 cm-1特征峰的峰形明顯優(yōu)于分辨率為4 cm-1、16 cm-1和32 cm-1，故將樣品光譜采集條件的分辨率設(shè)置為8 cm-1。[6]

5.2 選擇和優(yōu)化特征譜段

在近紅外光譜區(qū)域內(nèi)一般在9 000-4 000 cm-1內(nèi)的信息量最為豐富，此波段區(qū)域主要是O-H、N-H和C-H化學(xué)鍵一級(jí)倍頻、二級(jí)倍頻和組合頻吸收，選取特征譜段是一般從該譜段區(qū)域開始。尼莫地平原料藥的近紅外二階倒數(shù)光譜圖可知，在6 200-4 000 cm-1波段下，譜圖的信息量豐富，首先考慮在信息量豐富和吸收強(qiáng)度大的6 200-4 000 cm-1波段下尋找特征譜段，通過對(duì)比尼莫地平原料藥、樣品及模擬樣品的近紅外二階導(dǎo)數(shù)光譜，選取6 103-5 972 cm-1作為特征譜段。

6 結(jié)論

建立的近紅外漫反射模型，無需樣品預(yù)處理，利用近紅外儀器配置的OPUS軟件計(jì)算樣品與尼莫地平純品近紅外光譜局部區(qū)域之間相關(guān)系數(shù)，即可對(duì)樣品中所含降壓類中成藥中是否含有尼莫地平進(jìn)行判別，實(shí)現(xiàn)對(duì)非法添加尼莫地平的快速檢測(cè)。與傳統(tǒng)的分析方法相比，該方法快速、有效，可用于現(xiàn)場(chǎng)的篩查，對(duì)于藥品質(zhì)量突發(fā)事件的檢測(cè)有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

表3 26個(gè)品種信息

圖3 不同分辨率二階導(dǎo)數(shù)光譜圖

[1]陸婉珍.現(xiàn)代近紅外光譜技術(shù)[M].2版.北京：中國(guó)石化出版社, 2007:1.

[2]Y.J.Wu,Y.Jin,Y.R.Li,et al.NIR spectroscopy as a process analytical technology（PAT）tool for on-line monitoring of an extraciton process[J].Vibrational Spetroscopy,2012,58:109-118.

[3]金 葉,吳永江,劉雪松,等.蟾皮提取液濃縮過程中吲哚類生物堿等多指標(biāo)近紅外快速檢測(cè)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2012,47(9):712-717.

[4]Sylvie B,David R,Maryse R,et al.Rapid and non-destructive analysis of apricot fruit quality using FT-near-infrared spectroscopy[J].Food Chemistry,2009,113(4):1 323-1 328.

[5]金 鳴，吳春敏，張 勛.近紅外光譜法鑒別維C銀翹片中L-抗壞血酸[J].藥物分析雜志，2010,30(12):2 412-2 417.

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（本文編輯 賀慧娥）

Detection of Nimodipine Illegally Added into Antihypertensive Chinese Medicine by Near Infrared Reflectance Spectra

ZHANG Xun，LIN Xiao,XU Wei，LIN Yu*
(School of Pharmacy,Fujian University of Chinese Medicine,Fujian,Fuzhou 350122,China)

ObjectiveTo rapid detect nimodipine illegally added into antihypertensive Chinese medicines by near infrared reflectance spectra (NIRS).MethodsEstablished the model to detect nimodipine by NIRS with the second derivative spectra prêtreatment (13 smooth points),6103-5972 cm-1 as the characteristic spectral bands and thresholed was 80%.Results735 baches of samples were analyzed by NIRS model.The result with 100%accuracy rate was in accordance with that by HPLCMS.ConclusionThe qualitative model was viable,fast,simple and accurate and could be used to screen amtihypertensive Chinese medicines added substances illegally.

near infrared reflectance spectra;nimodipine;diffuse reflection

R28

A

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.12.018

2015-11-25

福建省中青年教師教育科研項(xiàng)目資助（JA13158）。

張 勛，女，講師，研究方向：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

*林 羽，男，教授，E-mail:yulam@163.com。