燮理糖腎顆粒降糖作用的實驗研究

趙 蓬，指導:張柏林

(天津市第一醫(yī)院中醫(yī)科，張柏林名中醫(yī)工作室，天津300232)

2型糖尿病是由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用導致的慢性、進展性疾病。研究顯示，高血糖毒性作用是心血管疾病的獨立危險因素，隨著疾病的進展，患者微血管和大血管并發(fā)癥風險都相應增加，是中、老年致殘、致死不可忽視的原因。臨床研究［1-2］認為，糖尿病是冠心病的急危癥，冠心病是2型糖尿病主要死亡原因之一，糖尿病患者80%死于心血管事件，心肌梗死更是糖尿病患者死亡的主要原因，急性心肌梗死中糖尿病患者達20%以上。本研究以中醫(yī)腎主藏經(jīng)瀉濁理論為基礎，配制燮理糖腎顆粒，觀察該方藥的降糖效果。

1 材料與方法

1.1 動物 自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠、C57BL/6小鼠:均由北京華阜康生物科技股份有限公司提供〔許可證編號:SCXK(京)2009-004〕;Wibtat種大鼠、昆明種小鼠:均由天津藥物研究院動物實驗室提供(合格證號:津實動質(zhì)R字第001號)。

1.2 藥物

1.2.1 燮理糖腎顆粒 源于全國名老中醫(yī)張柏林教授多年來治療糖尿病腎病的經(jīng)驗方，采用廣東一方制藥有限公司提供的顆粒制劑，組方為淫羊藿20 g，熟地黃 10 g，黃柏 10 g，知母10 g，澤瀉10 g，黃連10 g，丹參20 g，益母草20 g。

1.2.2 鹽酸二甲雙胍 天津中新藥業(yè)集團有限公司(批號:D3813004);四氧嘧啶，Sigma產(chǎn)品(批號:122H33211)，臨用前用生理鹽水配成2%的液體;鹽酸苯乙雙胍，浙江亞太藥業(yè)股份有限公司(批號:031101);優(yōu)降糖(格列本脲片)，天津力生制藥股份有限公司(批號:0309019)。

1.3 試劑及儀器 血糖試紙:ARKRAY，F(xiàn)actoryic生產(chǎn)(批號:9B5B4S);日本京都血糖儀:日本ARKRAY，inc株式會社產(chǎn)品。

1.4 模型方法

1.4.1 對自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響 選用健康雄性KKAy小鼠，體質(zhì)量25～35 g，非進食狀態(tài)取血測血糖，選取血糖值在14.5～28.3 mmol/L區(qū)間的小鼠，按血糖高低，隨機均衡分為模型對照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，鹽酸二甲雙胍260 mg/kg，每組12只，另用10只C57BL/6小鼠做正常對照組，灌胃給藥，給藥容積為20 mL/kg，正常及模型對照組給予等容量0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，同時喂KKAy小鼠高糖高脂飼料，喂食C57BL/6小鼠正常飼料，每周尾靜脈采血用血糖試紙測定血糖(給藥后1 h)1次，連續(xù)4周。

1.4.2 對四氧嘧啶致大鼠高血糖的影響 選用健康Wibtat種大鼠，體質(zhì)量180～220 g，雌雄兼用，禁食不禁水18 h后，尾靜脈注射2%四氧嘧啶50 mg/kg，72 h后禁食4 h，眼眶取血測血糖，選取血糖值＞11 mmol/L的大鼠，隨機分為模型對照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，鹽酸苯乙雙胍50 mg/kg組，每組10只(雌性4只，雄性6只)，另取正常大鼠做為正常對照組。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)2周，灌胃容積均為10 mL/kg，正常及模型對照組給予等劑量0.5%CMC-Na，分別于給藥后第1、2周測定禁食4 h后的大鼠血糖［3］。

1.4.3 對四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響 選用健康昆明種小鼠，體質(zhì)量20～22 g，雌雄兼用，禁食不禁水18 h后，尾靜脈注射2%四氧嘧啶60 mg/kg，72 h后禁食4 h，眼眶取血測定血糖，選血糖值＞11 mmol/L的小鼠，隨機分為模型對照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，鹽酸苯乙雙胍100 mg/kg組，每組12只，雌雄各半，另取10只正常小鼠做為正常對照組。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)1周，灌胃容積均為20 mL/kg，正常及模型對照組均灌胃給予等容量0.5%CMC-Na，末次給藥后測定大鼠血糖［3］。

1.4.4 對正常大鼠血糖的影響 選用健康Wibter種大鼠，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，禁食4 h后，眼眶取血測血糖，根據(jù)血糖值，隨機分為正常對照組，燮理糖腎顆粒4、8、16 g生藥/kg劑量組，優(yōu)降糖50 mg/kg組，每組10只，雌雄各半。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)2周，灌胃容積為10 mL/kg，正常對照組給予等容量0.5%CMC-Na，分別于末次給藥后4 h測定血糖。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0軟件，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示，2組數(shù)據(jù)比較采用t值法，有等級關系的采用等級序值法，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 實驗結果

2.1 對自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響 見表1。

2.2 對四氧嘧啶致高血糖大鼠血糖的影響 見表2。

2.3 對四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響 見表3。

2.4 對正常大鼠血糖的影響 見表4。

表1 對自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

表1 對自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01;與模型組比較，△P ＜0．05，△△P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) n 給藥前 給藥1周 給藥2周 給藥3周 給藥4周正常組 — 10 5．82 ±0．46 6．00±0．57 6．21±0．45 6．09±0．42 6．25 ±0．42模型組 — 12 20．79±4．01## 21．58 ±3．89## 22．18±3．84## 22．58±4．10## 22．97±3．80##燮理糖腎組 4 12 20．92 ±4．17 20．46 ±3．85 19．94 ±4．04 19．59 ±4．21 19．33 ±5．12燮理糖腎組 8 12 20．83 ±4．11 19．88 ±4．06 19．09 ±3．74 17．98 ±3．95△ 16．53 ±3．48△△燮理糖腎組 16 12 20．88 ±4．15 19．01 ±4．48 17．94 ±4．15△△ 16．38 ±4．23△△ 15．56 ±3．64△△二甲雙胍組 0．26 12 20．94 ±4．14 20．00 ±3．46 17．80 ±3．61△△ 16．79 ±3．49△△ 15．40 ±3．05△△

表2 對四氧嘧啶致大鼠高血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

表2 對四氧嘧啶致大鼠高血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01;與模型組比較，△△P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) 給藥前 給藥1周 給藥2周正常組 — 5．88±0．61 6．00±1．08 6．58 ±0．59模型組 — 22．61±2．82## 20．31±1．83## 20．08 ±2．50##燮理糖腎組 4 22．21 ±2．81 16．47 ±5．77 16．50 ±4．98燮理糖腎組 8 22．69 ±2．58 17．54 ±3．81 13．75 ±4．92△△燮理糖腎組 16 22．78±2．01 16．08±3．79△△ 12．18±2．93△△苯乙雙胍組 0．05 22．44±4．19 11．74±4．86△△ 10．93±3．63△△

表3 對四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

表3 對四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的影響(±s)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01，與模型組比較，△P ＜0．05，△△P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) n 給藥前 給藥1周正常組 — 10 6．43±1．33 6．95±1．25模型組 — 12 18．97±5．07 16．46±4．38##燮理糖腎組 4 12 18．84 ±5．49 13．02 ±3．93燮理糖腎組 8 12 19．26 ±5．11 11．87 ±3．50△燮理糖腎組 1 6 12 19．06 ±4．96 11．55 ±2．78△苯乙雙胍組 0.10 12 19．03 ±5．24 10．01 ±2．45△△

表4 對正常大鼠血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

表4 對正常大鼠血糖的影響(±s，n=10)mmol/L

注:與正常組比較，##P ＜0．01

組 別 劑量/(g生藥/kg) 給藥前 給藥1周 給藥2周正常組組 — 6．18±0．54 6．20±0．50 6．49±0．67燮理糖腎組 4 6．35 ±0．55 6．44 ±0．61 6．58 ±0．71燮理糖腎組 8 6．46 ±0．60 6．37 ±0．61 6．59 ±0．71燮理糖腎組 16 6．32 ±0．57 6．57 ±0．59 6．65 ±0．62優(yōu)降糖組 0．05 6．43 ±0．70 4．38 ±0．77## 4．55 ±0．70##

3 討論

慢性持續(xù)性高血糖造成的糖毒性可使糖尿病并發(fā)癥風險增高，包括大血管及微血管病變［4］，糖尿病與早期心血管疾病間的關系也得到確認［5］，降糖是減少糖尿病患者心血管并發(fā)癥的重要前提。本實驗顯示，燮理糖腎顆粒各劑量組對自發(fā)性糖尿病KKAy小鼠、四氧嘧啶致大鼠、小鼠的高血糖有明顯的降低作用;并呈現(xiàn)出劑量、時間依賴性，提示燮理糖腎顆粒具有良好的降糖治療效果。同時，對正常大鼠的血糖無明顯影響。

歷代醫(yī)家多以為消渴病的發(fā)生與陰虛密切相關，多年來滋補陰液一直是治療的重要法則。筆者通過臨床觀察認為，陽氣不足在消渴病的發(fā)生發(fā)展中同樣發(fā)揮了重要作用，臨床中統(tǒng)計氣陰兩虛和陰陽俱虛型患者占92.74%［6］。消渴總因稟賦不足，或過食肥甘厚味，情志失調(diào)，勞逸失度，日久化成痰、濁、熱、瘀，以氣陰兩虛為本，濁毒內(nèi)停為標，病程遷延發(fā)展，至終末期的心、脾、腎俱衰，濁毒肆虐，毒損腎絡，病情危篤［7-9］，故在治療上要陰陽虛實并重。

中醫(yī)認為，腎的主要功能是藏精和瀉濁，柯琴云“精者，屬癸，陰水也，靜而不走，為腎之體;溺者，屬壬，陽水也，動而不居，為腎之用。是以腎主五液，若陰水不守，則真水不足;陽水不流，則水邪逆行?！彼?，藏精與瀉濁是“一陰一陽，天地之道;一開一合，動靜之機”(清·羅美《古今名醫(yī)方論》)在腎的具體體現(xiàn)。血糖本是水谷精微，是人體化生氣血津液的物質(zhì)基礎，藏于腎則為精，而使人有生長壯老已的生命現(xiàn)象。但是，如果血糖過高則為浸淫人體的致病之邪，其道理有如《金匱要略·臟腑經(jīng)絡先后病脈證第一》所言:“風氣雖能生萬物，亦能害萬物，如水能行舟，亦能覆舟?！焙蛣t化，乖則變，變則眚［10］。血糖超過了腎糖閾則從尿中排出而出現(xiàn)尿糖，2型糖尿病隨著病程的發(fā)展，腎失封藏，精微下瀉，腎臟的“藏精瀉濁”功能受損?！皾彡幊鱿赂[”，排出的尿糖，尿蛋白則為病理的敗濁之氣。中醫(yī)治療強調(diào)因勢利導，要取邪氣易于祛除之法，使邪有出路［11］。

近年來，鈉-葡萄糖協(xié)同共轉體(SGLTs)的發(fā)現(xiàn)及其抑制劑的應用，強調(diào)了腎臟在糖代謝中的重要作用。SGLTs參與轉運葡萄糖，SGLT1主要在胃腸表達，完成葡萄糖吸收;SGLT2在腎近曲小管SI段表達，以鈉-葡萄糖1∶1比率轉運葡萄糖，介導了90%腎小球濾過葡萄糖的重吸收，促進腎小管上皮細胞SGLT 對葡萄糖轉運［12-13］。研究［14］表明，選擇性抑制SGLT2減少葡萄糖的重吸收，增加尿糖排泄，有助于糖尿病的血糖控制。SGLTs抑制劑抑制了近端腎小管對糖的重吸收，降低血糖，為中醫(yī)從腎論治糖尿病提供了現(xiàn)代醫(yī)學依據(jù)。補腎即補益腎元，泄?jié)峒赐ǜ節(jié)?，治病者平治于權衡，補腎泄?jié)峒词窃谔搶嵵g探求平衡之態(tài)［15］，補腎泄?jié)岱苊黠@改善腎功能指標［16］，以循證醫(yī)學Meta分析為依據(jù)，有改善整體臨床癥候和降低血尿素氮和血肌酐的良好作用［17-18］。

消渴之疾，治一則偏，陰陽兼調(diào)則全［19］。張柏林主任針對其虛實并見、氣陰兩虛、瘀阻腎絡的特點，以補腎泄?jié)釣橹委煼▌t，從中醫(yī)“腎藏精、瀉濁”理論出發(fā)，配制燮理糖腎顆粒。該方以淫羊藿配合熟地黃為君，益陰養(yǎng)血與補氣溫陽兩法合用，填補腎精、補腎益陰;知母、澤瀉、黃柏、黃連等為臣以清熱泄?jié)幔瑵櫾飯砸?因血瘀貫穿于糖尿病的始終，丹參活血祛瘀，益母草活血行水，故選丹參和益母草相配疏瘀泄?jié)釣樽?。全方虛實兼顧、標本兼治，使腎精得固，瘀濁得去。本實驗證實了燮理糖腎顆粒各劑量組對不同造模的糖尿病鼠有明顯的降低血糖的作用，但對正常大鼠的血糖無明顯影響，有助于2型糖尿病的治療。本實驗為今后進一步研究補腎泄?jié)岱ㄖ委熖悄虿〉呐R床應用提供了實驗依據(jù)。

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