免疫組化指標(biāo)在乳腺癌組織中的表達及其應(yīng)用價值

王開昕　劉少雄　張金芳等

[摘要] 目的 探討免疫組化指標(biāo)Ki67、VEGF、p53與C-erbB-2在乳腺癌組織中的表達與意義。 方法 將本院2012年4月～2014年4月收治的70例乳腺癌患者作為研究對象，術(shù)后取病理組織，采用免疫組化法檢測乳腺癌組織中Ki67、VEGF、p53與C-erbB-2的表達水平，分析其與乳腺癌病理因素的相關(guān)性。 結(jié)果 Ki67在乳腺癌組織中表達陽性率最高（75.71%），其次為C-erbB-2（67.14%）；腺癌組織Ki67表達水平與乳腺癌患者腫瘤分期有顯著相關(guān)性，癌癥分期越高，乳腺組織Ki67陽性率越高，C-erbB-2表達陽性率與乳腺癌患者年齡相關(guān)，年齡越輕者，乳腺C-erbB-2陽性率越高，p53與VEFG陽性率與患者年齡、腫瘤直徑、腫瘤分期均未體現(xiàn)明顯相關(guān)性。 結(jié)論 乳腺癌患者乳腺組織中Ki67表達的陽性率與癌癥分期呈正相關(guān)，C-erbB-2的表達水平與患者年齡有密切聯(lián)系，且Ki67陽性表達與C-erbB-2及p53表達呈正相關(guān)，可將Ki67指標(biāo)作為評估乳腺癌患者病情進展的重要標(biāo)志。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；免疫組化指標(biāo)；表達；相關(guān)性

[中圖分類號] R737.9 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）05（c）-0008-03

[Abstract] Objective To explore the expressions and significance of immunohistochemical indexes including Ki67，VEGF，p53 and C-erbB-2 in breast cancer tissue. Methods 70 patients with breast cancer admitted into our hospital from April 2012 to April 2014 were selected as research objects. Pathological tissue was taken after surgery and expression levels of Ki67，VEGF，p53 and C-erbB-2 in breast cancer tissue were detected by immunohistochemical method and correlations of pathological factors in breast cancer were analyzed. Results The highest positive expression rate in breast cancer tissue was Ki67 accounting for 75.71%，and then C-erbB-2 for 67.14%.Expression level of Ki67 had an obvious correlation with neoplasm staging in breast cancer patients. The higher cancer staging was，the higher positive rate of Ki67 became in mammary tissue，expression of C-erbB-2 positive rate of breast cancer patients related to age，the younger，breast C-erbB-2 positive rate was higher，p53 and positive rate of VEFG had no embodied obvious correlation with patient age，tumor size，tumor staging. Conclusion Positive rate of Ki67 expression in mammary tissue in breast cancer patients has a positive correlation with cancer staging. C-erbB-2 expression level has a close relation with the age of patient. The positive expression of Ki67 is positively correlated with the expression of C-erbB-2 and p53，and the Ki67 can be used as an important marker for evaluating the progression of breast cancer.

[Key words] Breast cancer；Immunohistochemical index；Expression；Correlation

乳腺癌是臨床常見女性惡性腫瘤之一，有較高的發(fā)病率[1]，且統(tǒng)計資料顯示，全球范圍內(nèi)每年新增乳腺癌病例超過100萬，超過15%的惡性腫瘤患者死于乳腺癌。當(dāng)前乳腺癌已成為威脅女性身體健康的關(guān)鍵疾病。有報道顯示，腫瘤的產(chǎn)生、進展均與細胞的增殖存在一定的相關(guān)性[2]。Ki67是增殖細胞相關(guān)核抗原中的一種，近年來，有大量研究證實可將Ki67作為評估乳腺癌腫瘤增殖活性的相關(guān)標(biāo)志物，其有較好的靈敏度與特異度[3-4]?；诖?，本組采用免疫組化法對乳腺癌組織中Ki67、VEGF、p53、C-erbB-3表達水平進行檢測分析，旨在證實其在乳腺癌組織中的表達及應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將本院自2012年4月～2014年4月收治的70例乳腺癌患者作為研究對象。取患者乳腺癌術(shù)后病理組織標(biāo)本作為研究標(biāo)本。所有納入研究患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為乳腺癌，均為女性，術(shù)前均未接受化療、放射治療等抗癌治療手段，納入前均接受血常規(guī)、肝腎功能常規(guī)、胸片、腹部超聲及盆腔超聲檢查，排除癌癥遠端轉(zhuǎn)移患者。年齡29～83歲，平均（48.2±1.6）歲；乳腺癌分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期39例，Ⅲ期11例；腫瘤分類：導(dǎo)管內(nèi)癌1例，浸潤性導(dǎo)管癌64例，黏液腺癌4例，浸潤小葉癌1例。

1.2 試劑與方法

免疫組化染色一抗Ki67、VEGF、P53與C-erbB-2工作液。將所有納入研究組織標(biāo)本均給予甲醛液固定1 d，作石蠟包埋，連續(xù)切片，貼于含APES的載玻片上，在60℃條件下烘烤2 h。隨后作免疫組化染色。常規(guī)石蠟切片后脫蠟，在濃度為3%的雙氧水室溫下孵育10 min左右，清除過氧化物酶活性，行蒸餾水沖洗，PBS洗滌，浸泡，時間為5 min。后作抗原修復(fù)，血清封閉，在室溫條件下孵育10 min，棄血清，加入四種一抗工作液，在37℃溫度環(huán)境下孵育2 h，作PBS洗滌，重復(fù)3次，5 min/次，滴入二抗，加入辣根酶標(biāo)記物，孵育0.5 h后，作PBS洗滌，重復(fù)3次。作DAB顯色處理，隨后采用清水沖洗，復(fù)染，最后作封面處理。并將陽性標(biāo)本作為對照標(biāo)準(zhǔn)，以PBS作為陰性對照。每張切片均至少取3個高倍視野，觀察細胞顏色及比例。

1.3 陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

①Ki67細胞陽性：細胞多數(shù)呈棕黃色，核著色表現(xiàn)，少數(shù)呈弱細胞質(zhì)染色；p53細胞陽性：呈棕黃色、核著色表現(xiàn)，少部分呈現(xiàn)較弱細胞質(zhì)染色表現(xiàn)；VEGF陽性：胞漿著色；陰性：不著色。陰性（-）：陽性細胞數(shù)低于10%。②Ki67、p53及VEGF陽性程度標(biāo)準(zhǔn)：弱陽性（+）：陽性細胞數(shù)10%～25%；陽性（++）：陽性細胞數(shù)>25%～50%；強陽性（+++）：陽性細胞數(shù)超過50%。③C-erbB-2陽性：膜著色，著色細胞數(shù)超過10%。陰性：不著色；弱陽性：著色弱，不連續(xù)；陽性：著色中等，部分不連續(xù)；強陽性：著色強，且呈連續(xù)性表現(xiàn)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。等級資料用非參數(shù)秩和檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki67、VEGF、p53與C-erbB-2在乳腺癌組織中的表達情況

Ki67在乳腺癌組織中表達陽性率最高，為75.71%，其次為C-erbB-2，為67.14%（表1）。

2.2 Ki67、VEGF、p53與C-erbB-2的表達與病理因素的關(guān)系

乳腺癌組織Ki67表達水平與乳腺癌患者年齡、腫瘤直徑無明顯聯(lián)系，但與乳腺癌患者腫瘤分期有顯著相關(guān)性，癌癥分期越高，乳腺組織Ki67陽性率越高，C-erbB-2表達陽性率與乳腺癌患者年齡有相關(guān)性，年齡越輕，乳腺C-erbB-2陽性率越高，p53與VEGF陽性率與患者年齡、腫瘤直徑、腫瘤分期均未體現(xiàn)明顯相關(guān)性（表2）。

3 討論

Ki67核抗原在細胞增殖中的表達作用最早由國外學(xué)者提出，當(dāng)前已被臨床上認定為核增殖的特異性標(biāo)志物，主要存在于人體細胞周期中除G0期外的不同階段，最初表達于G1期，在G2期與S期增殖明顯，到M期則達到峰值[5-6]。且于細胞分裂晚期消失，其半衰期相對較短，在脫離細胞周期后可快速降解，因此可將其作為測定腫瘤細胞增殖活性的重要標(biāo)志[7]。當(dāng)前臨床上已有大量研究報道均證實，Ki67可反饋乳腺癌患者腫瘤增殖率，可將其作為評估腫瘤進展、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后水平的重要標(biāo)志[8-9]。

本組研究結(jié)果證實，所有乳腺癌患者乳腺組織中Ki67表達陽性率達到75.71%，與早期研究學(xué)者報道的77.9%較為相近[10]。同時本組研究證實，患者乳腺組織Ki67表達水平同樣與乳腺癌臨床分期存在一定的相關(guān)性，晚期腫瘤患者陽性率明顯高于早中期患者，提示乳腺組織Ki67水平與癌癥組織的生長與浸潤存在關(guān)聯(lián)[11]。當(dāng)前國內(nèi)外尚無較多報道對Ki67表達與乳腺癌分期進行研究，僅有部分文獻提示可將Ki67指標(biāo)作為評估乳腺癌患者化療敏感性的重要標(biāo)志[12]。同時本組研究證實，患者乳腺組織Ki67表達水平與其是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性，與早期研究報道意見尚未統(tǒng)一，有待下一步探究。

當(dāng)前也有部分研究報道提示，腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移同樣與新生血管的形成存在一定的相關(guān)性[13]。而VEGF屬于調(diào)控血管生成的關(guān)鍵因子，可作用于血管內(nèi)皮細胞，在細胞有絲分裂中起到重要的作用，可增加毛細血管通透性，進而達到促進腫瘤生長的目的[14]。且有報道證實，VEGF與Ki67在乳腺腫瘤的進展過程中有顯著的協(xié)同作用，癌癥細胞增殖活性提升，同樣可促進新生血管的形成[15]。而本組研究結(jié)果證實，乳腺組織中VEGF與Ki67的共同表達與患者腫瘤直徑、癌癥分期有明顯的相關(guān)性，因此認為惡性腫瘤的進展與腫瘤細胞的增殖活性及新生血管等不同的生物學(xué)因素相關(guān)。而p53位于17號染色體短臂上，其中野生型p53基因可限制細胞轉(zhuǎn)化，抑制癌細胞活動，突變型p53基因則可引起細胞的癌變及轉(zhuǎn)化，促進癌細胞無限增生，是引起乳腺癌患者病情進展及惡化的相關(guān)因子。有研究者表示，超過50%的腫瘤均存在p53基因突變表現(xiàn)，而統(tǒng)計顯示乳腺癌患者p53蛋白陽性率在20%～60%，本組p53陽性率為62.86%，稍高于早期報道，且其與Ki67的表達呈正相關(guān)，提示兩者均在乳腺癌腫瘤生長過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)與協(xié)同作用。此外，p53基因突變在一定程度上可調(diào)節(jié)促進血管增生的內(nèi)皮生長因子，調(diào)控腫瘤血管生長。且p53表達陽性的腫瘤其侵襲性高，需引起重視。C-erbB-2則為來源于細胞的癌基因，一般情況下處于未激活狀態(tài)，參與細胞的分化與生長調(diào)節(jié)構(gòu)成，具備腫瘤轉(zhuǎn)化活性。當(dāng)前已公認其為與乳腺癌發(fā)生與進展相關(guān)密切的腫瘤基因。其過度表達通常提示乳腺癌腫瘤程度高，患者預(yù)后水平差。本組結(jié)果證實，乳腺癌患者C-erbB-2表達水平與患者年齡呈明顯相關(guān)性，年齡越輕，其乳腺癌陽性表達率越高。進一步證實，腫瘤的發(fā)生與進展與多種基因變異及協(xié)同作用相關(guān)。

綜上，乳腺癌患者乳腺組織中Ki67表達的陽性率與癌癥分期呈正相關(guān)，C-erbB-2的表達水平與患者年齡有密切聯(lián)系，且Ki67陽性表達與C-erbB-2及p53表達呈正相關(guān)，可將Ki67指標(biāo)作為評估乳腺癌患者病情進展的重要標(biāo)志。

[參考文獻]

[1] 黃玉鈿，譚云山，曾海英，等.乳腺癌組織Livin和PTEN表達與腫瘤血管生成的相關(guān)性[J].中國免疫學(xué)雜志，2012， 28（10）：886-889.

[2] 李文婷，王瑩，張銀華，等.年輕女性乳腺癌中ER、PR、HER-2和Ki67的表達與臨床病理意義[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，37（9）：783-786.

[3] 杜璟，張曉麗，蔣麗娜，等.雌、孕激素受體和表皮生長因子受體在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國老年學(xué)雜志，2014，34（19）：5405-5407.

[4] 陳穎，李睿，劉源，等.免疫組化和PCR檢測乳腺癌Her-2、EGFRt和CK5/6過表達水平用于乳腺癌療效的評估[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，47（1）：56-59.

[5] 李惠蘭.乳腺癌組織中Ki-67與C-erbB-2的表達及其臨床意義[J].中國老年學(xué)雜志，2012，32（19）：4307-4308.

[6] 徐東旭，徐璐，李彥君，等.SPARC蛋白在乳腺癌組織中的表達及臨床意義[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，43（6）：493-498.

[7] 王蓓莉，應(yīng)明真，蔣馬偉，等.核心組蛋白H2A與乳腺癌預(yù)后相關(guān)因素的生存分析[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2014，43（9）：17-21.

[8] 葉珊，吳正升，王曉楠，等.乳腺癌及乳腺良性病變中BCL-6 mRNA和蛋白表達及生物學(xué)意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2012，28（1）：7-10.

[9] 劉紅艷，宋豐舉，雷蕾，等.1267例乳腺癌臨床與免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性分析[J].中國腫瘤臨床，2011，38（11）：656-659.

[10] 劉向真，王如美.乳腺癌組織中E2F-1和Skp2的表達及意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，20（11）：2286-2288.

[11] 郎志強，姜蕾，吳艷秋，等.乳腺癌組織中DLL4、VEGF的表達變化及意義[J].山東醫(yī)藥，2013，53（3）：55-57.

[12] 劉更，連文靜，周鴻鷹，等.BMP6在乳腺癌組織的表達及意義[J].四川大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2014，45（2）：249-253.

[13] 趙亞男，孫冬霞，王蕾，等.三陰乳腺癌組織中p57和ki67的表達意義及相關(guān)性研究[J].西部醫(yī)學(xué)，2013，25（5）：654-656.

[14] 馮云，張練，李振宇，等.Bmi-1和P16蛋白在乳腺癌組織中的表達及意義[J].廣東醫(yī)學(xué)，2012，33（17）：2616-2618.

[15] 張剛，李中，林曉萌，等.乳腺癌組織中PTEN、p-AKT蛋白表達變化及相關(guān)性分析[J].山東醫(yī)藥，2014，52（19）：48-49.

（收稿日期：2015-01-15 本文編輯：衛(wèi) 軻）