赤霉素類植物激素分析方法研究進展

張曉娜， 盧明華*， 徐林芳， 校 瑞， 蔡宗葦

（1.河南大學化學化工學院，河南 開封475004；2.香港浸會大學化學系，香港999077）

植物激素作為植物體內(nèi)廣泛存在的一類痕量信號分子，對于調(diào)節(jié)植物的各種生長發(fā)育過程和環(huán)境應答具有非常重要的意義，根據(jù)其化合物結(jié)構(gòu)和作用不同可以分為植物生長素、細胞分裂素（CK）、脫落酸（ABA）、乙烯、赤霉素（GAs）、聚胺類、茉莉酸、水楊酸和油菜素甾醇等［1］。GAs是植物體內(nèi)一種四環(huán)雙萜類化合物，1934年由日本植物病理學家Teijiro Yabuta等在惡苗病菌的發(fā)酵濾液中得到［2］，隨后人們便開始對其進行研究。GA3是第一個被鑒定的赤霉素，至今已鑒定出 136 種赤霉素［3，4］。這些化合物在化學結(jié)構(gòu)上均含有赤霉素烷骨架（即4個環(huán)），僅環(huán)上雙鍵、羥基數(shù)目和位置不同。目前發(fā)現(xiàn)僅GA1、GA3、GA4和 GA7等少數(shù) GAs具有生物活性，其余均為活性GAs分子的代謝物或中間產(chǎn)物［5，6］。GAs亦可根據(jù)其分子內(nèi)所含碳原子數(shù)的不同分為兩類：分別是C20-赤霉素（C20-GAs）和C19-赤霉素（C19-GAs）。C19-GAs由 C20-GAs在代謝反應過程中丟失第20位碳，10位碳又與19位碳上的羧基形成一個內(nèi)酯橋鍵（其結(jié)構(gòu)如圖1所示），C19-GAs所包含的種類較多，生理活性也比C20-GAs 要高［7，8］。

圖1 C－19和C－20赤霉素的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of C－19 and C－20 gibberellins

作為內(nèi)源性的植物激素，GAs在植物體內(nèi)的含量通常很低（一般為ng／g，甚至為pg／g水平），且共存的基體成分繁雜，在植物體內(nèi)各器官中其濃度表現(xiàn)出一定的波動。另一方面，由于GAs在促進植物種子萌發(fā)、表皮細胞分裂增長、莖葉擴大伸長以及花蕾發(fā)育等方面具有良好的生理作用，近年來在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領域中得到廣泛應用，但食品中GAs的殘留也成為食品安全的隱患，其安全性也備受關注［9，10］。由于該類化合物沒有特征生色基團，沒有強的紫外、熒光和顯著的化學反應［11］。因此，如何準確可靠的實現(xiàn)痕量GAs的定性和定量分析成為植物科學研究領域的發(fā)展瓶頸。

隨著高效、快速的分離技術(shù)（如超高效液相色譜、毛細管電泳／電色譜）及高選擇性和高靈敏檢測技術(shù)（如軟電離生物質(zhì)譜）的出現(xiàn)，近年來痕量GAs的分析檢測實現(xiàn)了重大突破。本文對近年來發(fā)表的基于色譜-質(zhì)譜技術(shù)的GAs的分析檢測方法（含樣品前處理技術(shù)）進行綜述，以期對GAs相關的研究提供幫助。

1 赤霉素樣品前處理技術(shù)

樣品前處理步驟作為色譜分析中最為重要的環(huán)節(jié)之一，其好壞不僅決定著整個分析過程的長短，同時也關系到分析結(jié)果的準確與否。由于GAs在植物體內(nèi)不僅含量極低，而且所處的樣品基質(zhì)非常復雜，因此開發(fā)高效、快速的樣品前處理技術(shù)對實際樣品進行純化或富集成為GAs分析的關鍵步驟。目前GAs分析過程中常用的樣品前處理技術(shù)主要有固相萃?。⊿PE）、液相萃取（LPE）、液相微萃?。↙PME）以及分子印跡萃?。∕IE）等，中國科學院大連化物所關亞風研究員課題組［12］對植物激素樣品的前處理方法進行了詳細綜述，下面僅針對GAs樣品的前處理技術(shù)進行簡單總結(jié)。

1.1 固相萃取

SPE具有操作簡單、重現(xiàn)性好，易于實現(xiàn)自動化等優(yōu)點，也是目前應用最為廣泛的樣品除雜純化方法之一。目前，C18-SPE法是GAs樣品前處理的常用方法，陳小鵬等［13］將成熟黃瓜樣品經(jīng)100%冷乙腈處理抽濾，去除色素和雜質(zhì)后，用乙酸乙酯提取激素，以甲醇-水（含5%冰乙酸）作為流動相，在μ-Band pak C18柱上分離后，通過高效液相色譜實現(xiàn)了黃瓜樣品中 GA3含量的測定，回收率達到80.12%。Bastiá等［14］用乙酸乙酯提取樣品中游離的赤霉素（GA1和GA3），用10%甲醇進行稀釋后注入反相C18色譜柱內(nèi)萃取，并與HPLC聯(lián)用對固氮醋酸菌和草螺菌中的GA1和GA3的含量進行了測定。Yu等［15］建立了在線固相萃取與 LC-MS／MS的聯(lián)用技術(shù)，對葡萄中ABA、GA3、吲哚乙酸等5種酸性內(nèi)源性植物激素進行檢測，采用3 mm×4 mm的C18萃取柱，將樣品富集在柱上以后，采用10%（v／v）的甲醇水溶液以0.6 mL／min流速清洗5 min，樣品提純后經(jīng)HPLC-MS檢測，GA3的 LOD和 LOQ分別為0.39 μg／kg 和1.32 μg／kg。黃紅林等［16］以丙酮水溶液（丙酮和水的體積比為5∶1）作提取液，分別研究了C18萃取柱、硅膠、β-環(huán)糊精鍵合固定相、50目碳納米管等4種固相萃取材料對番茄中GA3的富集行為，研究發(fā)現(xiàn)C18-SPE的凈化效果最好，可以去除提取液中可溶性的酯、糖等雜質(zhì)，該方法的LOD 為0.011 mg／L （S／N=3）。當植物體中含有大量的非極性基質(zhì)時，會產(chǎn)生較強的基質(zhì)干擾峰，因此C18柱常常用于基質(zhì)不太復雜的樣品。

1.2 液相萃取

傳統(tǒng)的LPE是利用混合各組分對某一溶劑的不同溶解度而使各組分得到分離和提純的操作過程，王豐莉等［17］建立了異丙醇／硫酸銨-水溶液組成的醇鹽-水雙液相萃取體系，對GA3進行了提取。研究表明：體系酸度pH=4.0，醇鹽比（異丙醇／硫酸銨）為 1.5 mL／4.3 g，在 GA3質(zhì)量濃度小于0.064 g／L時，提取率達到 93.47%，富集倍數(shù)11.36，提取液經(jīng)由氣相色譜檢測，在最佳條件下，以0.06 g／L的GA3樣品做回收試驗，回收率可達到93.5%，RSD為4.0%。選擇恰當溶劑對樣品液中的GAs進行提取和純化，進一步提高富集倍數(shù)的雙液相萃取技術(shù)，有著廣闊的發(fā)展空間。

1.3 液相微萃取

常規(guī)的LPE，不僅樣品需求量大，而且需要消耗大量有機溶劑，容易造成環(huán)境污染，從“綠色”化學的角度出發(fā)，LPME越來越受到重視。Li等［18］通過分散液相微萃?。―LLME）對水果樣品進行富集凈化，實驗裝置簡單，原料廉價，僅需少量有機溶劑便可達到良好的富集效果，實驗以1.2 mL丙酮作為分散劑、100 μL的CHCl3作為萃取劑，混合后迅速注入樣品溶液，以2-（5-苯并吖啶）對甲苯磺酸乙酯（BAETS）作為熒光標記試劑，通過HPLC-FLD進行檢測，單次實驗檢測出了茉莉酸、吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸、吲哚丙酸、GA3等8種植物激素。Wu等［19］采用中空纖維基質(zhì)液-液-液微萃取（HF-LLLME）技術(shù)，選擇環(huán)己醇和辛醇（1∶3，v／v）作為有機膜，在30℃的溫度下萃取90 min，通過高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜技術(shù)對大米樣品中的GA1、GA3、GA4等8種GAs進行了分析，獲得了較好的檢測結(jié)果。

LPME從萃取方法上可分為單滴微萃取、室溫離子液體萃取、濁點萃取等。單滴微萃取是通過一滴萃取液滴實現(xiàn)，整個萃取過程僅需微升級甚至更少的有機溶劑，是目前有機溶劑使用量最少的一種液相微萃取方式。北京大學劉虎威教授課題組［20］開發(fā)了一種單滴液-液-液微萃?。⊿D-LLLME）與實時直接分析質(zhì)譜（DART-MS）聯(lián)用技術(shù)，對果汁樣品中的吲哚乙酸、茉莉酸、GA3、脫落酸等6種植物激素實現(xiàn)了在線檢測。

1.4 分子印跡萃取

MIE是通過制備一種具有分子特異識別功能的印跡聚合物，將其作為SPE填料或SPME涂層應用于食品、環(huán)境、生物樣品中目標物的凈化與富集的技術(shù)，具有選擇性高等優(yōu)點。中山大學李攻科教授課題組［21］通過微波輻射合成了一種新型磁性GA3分子印跡聚合物（GA3-Mag-MIP），研究發(fā)現(xiàn)GA3與丙烯酰胺（AM）的結(jié)合強度要比GA3與其他功能單體的結(jié)合強度高出許多，而且GA3-Mag-MIP對目標化合物有較高的選擇性和萃取能力（～708.4 pmol GA3），作者將 GA3磁性丙烯酸分子印跡聚合物（GA3-Mag-AM-MIP）作為萃取填料，對大米和黃瓜樣品中的 GA1、GA3、GA4、GA7提純富集，通過 HPLCMS進行分析，結(jié)果顯示4種目標化合物的LOD在1.9～4.4 μg／L（S／N=3）之間，RSD 為2.6% ～7.0%，大米和黃瓜樣品的加標回收率分別為76.0%～109.1%和79.9%～93.6%，RSD為2.8%～8.8%和3.1%～7.7%，該方法在實際大米樣品中檢測出了GA4，其含量為（121.5 ±1.4）μg／kg。

2 赤霉素類植物激素的分析方法

傳統(tǒng)的植物激素檢測方法主要有生物鑒定法和理化測定法兩種，生物鑒定法是最早采用的植物激素測定方法，通過植物的組織和器官對赤霉素產(chǎn)生的特異性反應進行測定，生物鑒定法雖然操作簡單，但對樣品的純度要求很高，需要多重的樣品前處理步驟來實現(xiàn)，而且它的重復性和專一性較差，因此該方法的應用逐漸減少。植物激素檢測中運用較多的還有免疫測定法，它是基于抗原和抗體的特異性結(jié)合而建立起的一種檢測方法，具有良好的專一性，但是易受到交叉反應的干擾，同時抗體制備時間較長，使得整個實驗周期延長，因此用這種方法對赤霉素進行檢測的報道較少。理化法中除了常見的色譜法以外，還有電化學法［22］和光譜法［23］等，如 Murillo Pulgarín 等［24］利用光化學誘導熒光法，通過化學衍生對西紅柿中的GA3進行檢測，在50～150 ng／mL范圍內(nèi)表現(xiàn)出良好的線性關系，GA3的LOD為1.7 ng／mL，但該方法需多步提取凈化，操作繁瑣且專一性較差，目前將其與色譜方法結(jié)合進行光譜測定成為GAs檢測的主流方法之一。

色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)，特別是隨著軟電離質(zhì)譜的發(fā)展，使得多種結(jié)構(gòu)類似的GAs同時分離分析成為可能，本文著重介紹了近年來色譜-質(zhì)譜技術(shù)在赤霉素檢測方面的應用。

2.1 GC－MS 聯(lián)用技術(shù)

由于單次檢測可以同時鑒定出400多種化合物，GC-MS聯(lián)用技術(shù)用于GAs分析的研究工作開始于19 世紀 60 年代［25］。Yang 等［26］采用 GC-MS技術(shù)對蘋果樣品中的7種內(nèi)源性GAs（GA12、GA15、GA53、GA44、GA19、GA20和 GA3）進行了檢測，實驗結(jié)果表明GA20含量最多，GA19和GA14次之，GA3含量為 GA20含量的 1／3。黃紅林等［27］通過固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜（SPE-GC-MS）技術(shù)對果品中的赤霉酸（GA3）殘留進行研究，實驗通過選擇離子監(jiān)測（SIM）模式消除樣品中基體的干擾，提高檢測靈敏度，方法的線性范圍為0.11～3300 mg／L，LOD為0.11 mg／kg，回收率在75.3% ～101.3%之間。Nakayama等［28］運用GC-MS技術(shù)在未成熟的碧桃種子中檢測到11種已知的內(nèi)源性赤霉素（GA3、GA9、GA17、GA19、GA30、GA44、GA61、GA63、GA87、GA95和GA97），同時還發(fā)現(xiàn)了未知的GAs，并通過已知的GAs證實了他們所預測的結(jié)構(gòu)，其中GA118和GA119是在高等植物中首次檢測到的含有 1α-羥基的GAs，從而豐富和完善了赤霉素類植物激素的種類。Taylor等［29］采用GC-MS分析了草莓葉片在短日照的條件下分泌物中GAs的含量：調(diào)節(jié)pH為8.0，實驗樣品用乙酸乙酯溶解后，經(jīng)C18柱分離提純，通過全掃描質(zhì)譜圖譜和Kovats保留指數(shù)與標準圖譜比對，發(fā)現(xiàn)其中含有 GA1、3-epi GA1、GA3和 GA3-異內(nèi)酯。

2.2 HPLC 技術(shù)

赤霉素類植物激素對溫度十分敏感，溫度超過40℃就會發(fā)生快速分解，避免了高溫試驗條件的HPLC技術(shù)近年來被廣泛應用于GAs的分析研究［12］。但由于GAs沒有特征生色基團，沒有強的紫外吸收、熒光和顯著的化學反應，常規(guī)的HPLC技術(shù)難以實現(xiàn)對該類化合物的靈敏分析，往往需要特定的檢測器或?qū)ζ溥M行衍生化處理。Li等［30］建立了 HPLC-FLD 測定方法，以 2-（11H-苯［a］咔唑）乙基氯甲酸酯（BCETS）為標記試劑進行柱前熒光標記，同時檢測出7種植物激素，包括吲哚乙酸、茉莉酸、GA3等，該方法中7種植物激素的LOD均在0.34 ～0.73 ng／mL 之間。Li等［18］以 2-（5-苯并吖啶）對甲苯磺酸乙酯（BAETS）作為熒光標記試劑進行HPLC-FLD分析，在最佳實驗條件下，茉莉酸、吲哚-3-醋酸、吲哚丁酸、吲哚丙酸、GA3等8種植物激素的 LOD 為 0.19 ～0.44 ng／mL （S／N=3），其中GA3在荔枝樣品中的LOD為21.71 ng／g，在櫻桃樣品中的 LOD為1.34 ng／g。該方法的準確度在92.32%～103.10%之間，日內(nèi)保留時間和峰面積的RSD分別小于0.04%和3.8%，日間保留時間和峰面積的RSD分別小于0.97%和5.4%，從實驗結(jié)果可以看出，與FLD聯(lián)用的HPLC檢測技術(shù)適用于復雜基質(zhì)中目標植物激素的痕量分析。

2.3 LC－MS 聯(lián)用技術(shù)

由于克服了GC-MS需要衍生的缺點，LC-MS聯(lián)用技術(shù)近年來在GAs的檢測、發(fā)現(xiàn)及生物活性研究方面發(fā)揮了巨大作用［31］。Pan 等［32，33］采用高效液相色譜-電噴霧電離質(zhì)譜（HPLC-ESI／MS）技術(shù)對新鮮擬南芥組織中的植物激素（生長素、GAs、分裂素等）進行了分析，經(jīng)過一級提取后，樣品回收率達到95%之上，在S／N＞10的情況下，赤霉素的LOQ為0.1～1 pg／g（鮮重）。中國科學院大連化物所關亞風研究員課題組［34］將擬南芥樣品與C18混合研磨制成基質(zhì)固相分散（MSPD）萃取柱，開發(fā)了基質(zhì)固相分散萃取-液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（MSPD-HPLC-MS／MS）技術(shù)，在負離子電噴霧電離（ESI-）和多反應監(jiān)測（MRM）模式下，同時測定了擬南芥組織中的3種赤霉素（GA1、GA3和 GA4）；實驗選用 Merck RPC18色譜柱，柱溫25 ℃，單次進樣5 μL，結(jié)果表明，3種GAs在10～300 ng／g的范圍內(nèi)均呈現(xiàn)出良好的線性關系（R2為0.984 2～0.996 2），LOD在1.1～4.1 ng／g之間（S／N=3），LOQ 在 3.7 ～10.3 ng／g之間（S／N=10），在 10 ～50 ng／g 的添加水平下回收率在54.7%～102.6%范圍內(nèi)，RSD為3.2%～12.8%；進一步分析檢測數(shù)據(jù)得出，在3份不同的擬南芥樣品中GA1的含量最高，GA4次之，GA3最少。該方法將MSPD樣品前處理技術(shù)與色譜技術(shù)相結(jié)合，實現(xiàn)了擬南芥中3種GAs的痕量測定，同時也為植物樣品中痕量生物激素的分析檢測提供了參考。

張軍等［35］在 ESI-和 MRM 模式下，建立起HPLC-ESI／MS檢測葡萄中吡效隆和赤霉素的方法，采用Strata-X小柱萃取提純樣品，一次進樣5 μL，選擇 Agilent SB-C18色譜柱，調(diào)節(jié)流速為 0.3 mL／min，柱溫40℃進行檢測，結(jié)果表明兩種化合物在2.0～100.0 μg／L范圍內(nèi)相關系數(shù)（r）＞0.999，赤霉素的 LOD 為0.3 μg／L（S／N=3），LOQ 為1.0 μg／L （S／N=10），回收率為90.3% ～94.2%，RSD為3.2% ～6.9%，均達到了檢測要求。Flores等［36］建立了一種基于快速、簡單、便宜、有效、堅固、安全（quick，easy，cheap，effective，rugged and safe，QuEChERS）的萃取方法，結(jié)合超高效液相色譜-質(zhì)譜（UPLC-MS）技術(shù)成功測定了西葫蘆樣品中的3種植物激素（生長素、CK、GA3），其中GA3的線性范圍在10～250 μg／kg之間（R2=0.998 5），LOD（S／N=3）和 LOQ（S／N=10）分別為 5 μg／kg 和 10 μg／kg。黃何何等［37］采用同樣方法將植物樣品經(jīng)QuEChERS法處理后，選取 Agilent XDB-C18色譜柱，采用基質(zhì)匹配標準溶液外標法定量。在最優(yōu)的色譜條件和檢測環(huán)境下，成功檢測了水果中矮壯素、助壯素、GA3、ABA等在內(nèi)的21種植物生長調(diào)節(jié)劑的殘留量，其中GA3在蘋果、梨、草莓、葡萄和橘子5種水果樣品中的 LOD均為6 μg／kg，LOQ為15 μg／kg，樣品平均回收率在73.0% ～111.0%之間，RSD 為3.0% ～17.2%。在10.0～1 000 μg／L范圍內(nèi)，R2均大于0.99，表現(xiàn)出良好的線性關系。從數(shù)據(jù)來看，該方法能夠?qū)崿F(xiàn)多種水果樣品中21種植物生長殘留劑的檢測，有效地提高了檢測通量和檢測速度。

Sun等［38］利用穩(wěn)定同位素稀釋法（SIDA）測定了番茄醬中赤霉素的殘留，通過LC-MS技術(shù)同時檢測出番茄醬樣品中的3種GAs（GA3、GA4和GA7），結(jié)果顯示，GA3和 GA4的 LOD 為2 ng／g，GA7的LOD為0.3 ng／g，GA3和 GA4的線性范圍為5～500 ng／g，GA7的線性范圍為 1 ～100 ng／g，日內(nèi)和日間實驗的RSD分別為4.8%～9.4%和3.5%～11.9%，3種GAs外標法（ESM）和內(nèi)標法（ISM）的回收率分別為42.6%～75.0%和91.1%～103.8%。Xie等［39］建立了在多反應監(jiān)測模式下的LC-MS檢測水果（蘋果、桃子、葡萄等）中GA3含量的分析方法，實驗表明，該方法具有良好的線性和選擇性，LOQ 為10 μg／kg，在 3 個不同水平（10、20 和 200 μg／kg）的加標樣品中，平均回收率達到77.8% ～96.2%，RSD小于13.7%，該方法操作簡單，可用作水果中GA3的常規(guī)分析，此方法已運用于百余種水果中GA3的檢測。武漢大學馮鈺锜教授課題組［40］制備了一種陰離子交換／疏水聚合物整體柱，開發(fā)了一種基于該整體柱的毛細管液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（cLC-MS）方法，實現(xiàn)了對多種目標GAs的分離，LOD 在0.62 ～0.90 fmol之間（S／N=3）。

Zhao等［41］建立了一種快速、高效、靈敏地檢測水果和蔬菜中GA3含量的方法，將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)到3～4，用乙酸乙酯提取后經(jīng)SPE-PAK-C18分離提純，提純后的溶液經(jīng)HPLC-MS／MS檢測，采用外 標 法 定 量，LOD 為 0.01 μg／mL。Urbanová等［42］采用UPLC-MS技術(shù)實現(xiàn)了對20種GAs的分析，方法的LOD在0.08～10 fmol之間，線性范圍超過 4個數(shù)量級。Chiwocha等［43］采用 LC-ESIMS／MS技術(shù)實現(xiàn)了對休眠狀態(tài)下種子中 GA1、GA3、GA4和GA7含量的測定，發(fā)現(xiàn)在種子發(fā)芽之后GA1含量明顯降低。中國科學院大連化物所關亞風研究員課題組［19］采用中空纖維液-液-液微萃?。℉F-LLLME）技術(shù)對樣品進行前處理，通過高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜檢測出大米樣品中的8 種 GAs （GA1、GA3、GA4、GA7、GA8、GA9、GA19和GA20），在最佳條件下，此方法表現(xiàn)出良好的線性關系，R2在0.995 52～0.999 91之間，LOD在0.001 6～0.061 ng／mL 的范圍內(nèi)。Liu 等［44］采用反相陽離子（Oasis MCX）和反相陰離子（Oasis MAX）交換混合機制柱對24種植物激素進行兩級SPE，單次進樣可以同時檢測出植物組織中24種甚至更多的微量植物激素，包括生長素、11種分裂素以及10種GAs（GA1、GA3、GA4、GA9、GA12、GA19、GA20、GA34、GA44和GA53），由實驗數(shù)據(jù)可得，GAs的 LOD在0.2 ng／g左右，分裂素的 LOD 為 0.01 ng／g，脫落酸的LOD為0.1 ng／g，且均表現(xiàn)出較好的線性關系（R2為0.990 3～0.999 7），該方法已成功運用于數(shù)百種植物中不同組織的植物激素測定，包括草本類、藤本類以及木本類植物。

Kojima等［45］開發(fā)了一種基于質(zhì)譜探針（MS-probe）的高效和高通量的LC-MS／MS技術(shù)用于分析檢測植物激素，通過被分析物（植物激素）與2-溴乙基-三甲基溴化銨（BETAB）反應，使得植物激素含有一個帶正電荷的基團，在質(zhì)譜正離子模式下對分裂素、生長素、脫落酸和GAs等43種植物激素進行了分離檢測，相對于常規(guī)的負離子模式LOD提高了50倍。武漢大學馮鈺锜教授課題組［46］采用SPE與液液萃?。↙LE）串聯(lián)方法提純酸性植物激素（含10種 GAs），通過化學修飾 3-溴丙酮基溴化胺（BTA）來提高酸性植物激素在ESI-MS正離子模式下的離子化效率，從而提高方法的檢測靈敏度，使得方法的 LOD 達到 1.05 ～122.4 pg／mL（S／N=3），RSD低于11.9%，大米加標樣品中目標分析物的回收率達到88.3%～104.3%，該方法可從5 mg大米樣中定量檢測出11種內(nèi)源酸性植物激素。

Izumi等［47］發(fā)展了一種納升液相色譜-電噴霧-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用（LC-ESI-IT-MS／MS）測定植物激素（CK、ABA以及 GAs）的方法，比毛細管流 LCESI-IT-MS／MS的靈敏度要高出5～10倍，部分GAs的 LOD 低至飛摩爾級別（≤10-15mol，S／N=3），結(jié)果顯示所有目標化合物的線性相關系數(shù)（R2）在0.9937～1.0000之間，保留時間RSD小于1.1%，峰面積RSD低于10.7%，該分析方法為復雜痕量植物激素樣品的深入研究提供了一種解決方案。

2.4 CE－MS 聯(lián)用技術(shù)

CE-MS由于具有樣品需求量小，溶劑消耗量少等優(yōu)點，近年來也被應用到赤霉素類植物激素的分析檢測中。Ge等［48］開發(fā)了一種基于C18固相萃取柱的CE-MS方法，在25 min內(nèi)從椰汁樣品中分離鑒定出 11 種 GAs（GA1、GA3、GA4、GA5、GA6、GA7、GA13、GA19、GA20、GA24和 GA53），方法的 LOD 在0.31 ～ 1.02 μmol／L 之間。隨后該課題組［49］發(fā)展了膠束電動色譜-質(zhì)譜（MEKC-MS）分析GAs的技術(shù)，在 25 min 內(nèi)實現(xiàn)了對 GA1、GA3、GA5、GA6、GA7、GA9、GA12和 GA13等 8 種 GAs 的分離和檢測，并將該方法結(jié)合SPE應用到椰汁樣品的分析，成功檢測并定量了椰汁樣品中的GA1和GA3。

武漢大學馮鈺锜教授課題組［50］合成了3-溴丙酮基溴化銨（BTA）作為一種新的質(zhì)譜探針，開發(fā)了基于BTA化學修飾的毛細管電泳-電噴霧電離-飛行時間質(zhì)譜（CE-ESI-TOF-MS）技術(shù)，實現(xiàn)了對15種酸性植物激素（含 10 種 GAs：GA1、GA3、GA4、GA20、GA7、GA9、GA12、GA19、GA24、GA53）的快速靈敏分析，方法的 LOD為0.34～4.59 ng／mL，LOQ為1.12～15.3 ng／mL，標準樣品液中目標化合物的回收率為84.6%～112.2%，日內(nèi)和日間精密度試驗的RSD分別低于6.7%和9.9%，顯示了較好的重現(xiàn)性。

3 總結(jié)和展望

目前，赤霉素類植物激素的分析檢測仍是生物化學和農(nóng)業(yè)化學研究的熱點，以高效液相色譜法為代表的理化檢測仍是GAs檢測的主流方法。在色譜技術(shù)發(fā)展的同時，GAs殘留的生物盒檢測也是一個重要的發(fā)展方向，將化學技術(shù)和生物技術(shù)做到有效結(jié)合，降低檢測成本，實現(xiàn)實時快速測定。

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