不同方法提取馬齒莧多糖的抗氧活性比較

陳凌，陳召桂，駱盧佳，賈艷（嘉興職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)業(yè)與環(huán)境分院，浙江嘉興314036）

不同方法提取馬齒莧多糖的抗氧活性比較

陳凌，陳召桂，駱盧佳，賈艷
（嘉興職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)業(yè)與環(huán)境分院，浙江嘉興314036）

摘要：用不同方法提取馬齒莧多糖，并測(cè)定多糖含量及其粗多糖中蛋白質(zhì)含量。采用體外試驗(yàn)研究馬齒莧多糖對(duì)Fe3+、Ce4+的還原能力以及對(duì)超氧陰離子（O2-·）和羥自由基（·OH）的清除作用。結(jié)果表明，不同方法提取多糖的得率為：熱水浸提>木瓜蛋白酶>纖維素酶>果膠酶>超聲波輔助提取。其粗多糖中蛋白質(zhì)含量是：果膠酶>纖維素酶>超聲波輔助提取>熱水提取>木瓜蛋白酶。在試驗(yàn)濃度范圍，不同方法提取的馬齒莧粗多糖對(duì)Fe3+和Ce4+的還原能力，熱水提取最強(qiáng)，其次是果膠酶；用果膠酶提取的粗多糖對(duì)超氧陰離子自由基清除能力最強(qiáng)，其次是纖維素酶；對(duì)羥基清除能力，添加量為2.0m L時(shí)，纖維素酶最好，添加量為1.2mL時(shí)，果膠酶最好。從這4個(gè)方面綜合來(lái)評(píng)價(jià)，果膠酶提取的馬齒莧粗多糖抗氧化性最好。

關(guān)鍵詞：馬齒莧多糖；提取方法；氧自由基；抗氧化

馬齒莧（Portolaca oleracea L．）為馬齒莧科一年生肉質(zhì)草本植物，馬齒莧多糖具有殺菌、抗氧化和延緩衰老的作用。馬齒莧對(duì)O2-·和·OH均有較強(qiáng)的清除能力[1]，馬齒莧能增加兔血清超氧化物歧化酶（SOD）活力，降低血清脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量。雖然大量文獻(xiàn)報(bào)道了馬齒莧多糖具有抗氧化活性[2-5]，其抗氧化作用與馬齒莧多糖的含量、貯存時(shí)間及溫度[6]有關(guān)，而馬齒莧多糖的提取方法對(duì)其抗氧化活性的影響還鮮為人知。因此，分別采用熱水浸提、乙醇浸提、超聲波輔助提取、酶法提取馬齒莧多糖，比較不同方法提取馬齒莧多糖的得率、粗多糖中蛋白質(zhì)含量及其抗氧化性，為高效利用馬齒莧多糖的抗氧化活性提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

野生馬齒莧：采自嘉興職業(yè)技術(shù)學(xué)院校園內(nèi)，經(jīng)本院園藝教研室陳玉琴副教授鑒定。石油醚、氫氧化鈉、無(wú)水乙醇、95%乙醇、濃硫酸、濃磷酸、濃鹽酸、水楊酸、雙氧水、硫酸亞鐵、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉，鐵氰化鉀，三氯乙酸，三氯化鐵：上海聯(lián)試化工試劑有限公司；Ce（SO4）2·4H2O：北京康普匯科技有限公司；抗壞血酸：天津博迪化工股份有限公司；三羥甲基氨基甲烷（Tris）：上海伯奧生物科技有限公司；鄰苯三酚：遵義林源醫(yī)藥化工有限責(zé)任公司；等均為分析純?？捡R斯亮藍(lán)G-250：廣州蘇喏化工有限公司；牛血清白蛋白BR：上海展云化工有限公司；木瓜蛋白酶（酶活力≧6 000 IU）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；纖維素酶（酶活力≧6 000 IU）、果膠酶（含量99%）：無(wú)錫百瑞多化工產(chǎn)品有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

CP225D型1/10萬(wàn)電子分析天平：德國(guó)SATORIOS公司；KQ-100B型超聲波清洗機(jī)：昆山市超聲儀器有限公司；RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：鞏義市英峪高科儀器廠；JP-500B-2型多功能粉碎機(jī)：上海市久品工貿(mào)有限公司；721N型分光光度計(jì)：上海海爭(zhēng)電子科技有限公司；DK-S24型恒溫水浴鍋、DGG-9240BD型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；Millipore超純水儀、Smartpark DQ3純水柱：美國(guó)等。

1.3馬齒莧多糖的提取

新鮮馬齒莧→洗凈→50℃烘干→粉碎→石油醚脫脂→不同方法提取→離心分離→上清液濃縮→乙醇沉淀→過(guò)濾→多糖

1.3.1熱水提取

稱取馬齒莧粉末5.002 1g，加入超純水100.00mL，在80℃下浸提1.5 h，離心分離得上清液，將上清液減壓濃縮至一定體積，加入3倍體積無(wú)水乙醇，置于4℃冰箱過(guò)夜。次日，離心（3 500 r/min，20min）得多糖沉淀，用超純水復(fù)溶得馬齒莧多糖溶液B。

1.3.2超聲法提取

稱取馬齒莧粉末5.002 0 g，按1∶20（g/mL）料液比加入超純水，在功率100W下置50℃水浴中超聲30min，再在50℃熱水中浸提1 h。離心分離得上清液，將上清液減壓濃縮至一定體積，加入3倍體積無(wú)水乙醇，置于4℃冰箱過(guò)夜。次日，離心（3500 r/min，20min）得多糖沉淀，用超純水復(fù)溶得馬齒莧多糖溶液C。

1.3.3酶法提取

1.3.3.1木瓜蛋白酶

稱取馬齒莧粉末5.007 8 g，加入超純水100.00m L，調(diào)pH=6.5，加入0.124 9 g木瓜蛋白酶，混勻，置50℃水中浸提1.5h[7]，升溫至100℃滅活，離心分離得上清液，將上清液減壓濃縮至一定體積，加入3倍體積無(wú)水乙醇，置于4℃冰箱過(guò)夜。次日，離心（3500 r/min，20min）得多糖沉淀，用超純水復(fù)溶得馬齒莧多糖溶液D。

1.3.3.2纖維素酶

稱取馬齒莧粉末5.0085 g，加入超純水100.00m L，調(diào)pH為6.0，加纖維素酶0.100 1 g，40℃酶解2 h[8]，升溫至100℃滅活，離心分離得上清液，將上清液減壓濃縮至一定體積，加入3倍體積無(wú)水乙醇，置于4℃冰箱過(guò)夜。次日，離心（3 500 r/min，20min）得多糖沉淀，用超純水復(fù)溶得馬齒莧多糖溶液E。

1.3.3.3果膠酶

稱取馬齒莧粉末5.0004 g，加入超純水100.00mL，調(diào)pH=4.5，加果膠酶0.050 97 g，40℃酶解1.5 h，升溫至100℃滅活，離心分離得上清液，將上清液減壓濃縮至一定體積，加入3倍體積無(wú)水乙醇，置于4℃冰箱過(guò)夜。次日，離心（3 500 r/min，20min）得多糖沉淀，用超純水復(fù)溶得馬齒莧多糖溶液F。

1.4測(cè)定方法

1.4.1馬齒莧多糖含量測(cè)定

采用苯酚一硫酸法，以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，分光光度計(jì)測(cè)定溶液A、B、C、D、E、F的多糖含量[9]。

1.4.2蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

蛋白質(zhì)分子均具有酰胺基團(tuán)，棕紅色的考馬斯亮藍(lán)G-250染料上的陰離子與蛋白質(zhì)的酰胺結(jié)合，使溶液變?yōu)樗{(lán)色，其最大吸收峰為595 nm，蛋白質(zhì)在1μg/m L～1 000μg/mL其吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比 （符合朗伯比爾定律），故可以用于測(cè)定蛋白質(zhì)含量[10-11]。

1.4.2.1蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取牛血清白蛋白50mg用少量蒸餾水溶解，定容于500.00mL容量瓶，即為100mg/L蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃冰箱中保存。

考馬斯亮藍(lán)儲(chǔ)備液：精密稱取100mg考馬斯亮藍(lán)G-250，加入95%乙醇50mL（藍(lán)色），再加入濃H3PO4100mL（血紅色），加水定容于200.00mL（褐色），4℃放置?？捡R斯亮藍(lán)工作液：1份上述儲(chǔ)備液，加4份水，混勻，過(guò)濾，臨用前配制。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：在試管中分別精確移取牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0．2、0．4、0．6、0．8、1.0mL，各管補(bǔ)加超純水至1.0mL，配制成濃度為0、20、40、60、80、100mg/L的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后在各支試管中分別加入5.00mL考馬斯亮藍(lán)G-250溶液，搖勻，在室溫下反應(yīng)5min。在595 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程。

1.4.2.2粗多糖中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

取溶液A、B、C、D、E、F各0.6mL，以空白試劑為參比，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定法，分別測(cè)定其吸光度值，做3個(gè)重復(fù)，根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品中蛋白質(zhì)的含量。

1.4.3抗氧化性能的測(cè)定

1.4.3.1Fe3+總還原力的測(cè)定

采用鐵氰化鉀還原法，測(cè)對(duì)Fe3+的還原能力。取不同濃度的樣品溶液各2.0 m L于一系列10m L的比色管中，加入pH 6.6的磷酸緩沖液2.5mL、1%鐵氰化鉀2.5mL，混勻后密封，50℃水浴20min，然后迅速冷卻，加入10%的三氯乙酸2.5 m L，混勻并離心10 min （4 000 r/min）。取上清液5.0mL，再依次加入超純水4.00mL和0.1%三氯化鐵溶液1.0mL，充分混勻，37℃水浴靜置10min，以超純水為參比，在700 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，吸光值大表明還原力強(qiáng)。

1.4.3.2Ce（Ⅳ）還原力的測(cè)定

采用Cerac法利用Ce（Ⅳ）/Ce（Ⅲ）之間的轉(zhuǎn)化度，評(píng)價(jià)化合物的總還原能力。用分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度，吸光度越小還原能力越強(qiáng)。

檢測(cè)試劑的配制[12]：稱取0.0809gCe（SO4）2·4H2O，加入25mL超純水，17mL濃H2SO4，攪拌直至完全溶解，定容于100m L容量瓶中，得濃度為2.0×10-3mol/L Ce（SO4）2溶液。稱取35.5 gNa2SO4于100mL燒杯中，加超純水溶解，定容于250mL容量瓶后，緩慢加入54.64m L的濃硫酸，搖勻，冷卻，得到Na2SO4溶液。檢測(cè)試劑由1 706μLNa2SO4溶液、94μLH2O及0.2mL Ce（Ⅳ）溶液組成。

檢測(cè)時(shí)，以超純水為參比，波長(zhǎng)320 nm，在比色管中加入Ce（SO4）210.00mL，分別加入不同濃度的系列樣品0.1mL，混勻，37℃水浴靜置10min后，測(cè)定吸收光譜。所有樣品測(cè)試過(guò)程重復(fù)3次。試驗(yàn)中，將Ce（Ⅳ）吸光度下降程度（A0-A）/A0定義為還原率。

1.4.3.3羥自由基（·OH）消除率的測(cè)定

本試驗(yàn)采用了水楊酸捕獲法，其原理是利用H2O2和Fe2+在水溶液中發(fā)生Fenton反應(yīng)，生成羥自由基（·OH），反應(yīng)方程式：H2O2+Fe2+→Fe3++·OH。水楊酸能夠高效地捕捉·OH并生成有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510 nm處有最大吸收峰，通過(guò)吸光度的變化可以衡量試樣清除羥自由基的能力。以·OH氧化水楊酸所得產(chǎn)物的吸光值表示·OH的多少，吸光值越大，·OH越多。

羥自由基清除率的測(cè)定方法是依次加2mmol/L FeSO4和6 mmol/L H2O2各2.0 m L，混勻后再加入6 mmol/L水楊酸2.0mL，37℃水浴15min。然后分別加入不同濃度的樣品溶液2.0mL搖勻，繼續(xù)于37℃水浴加熱15min加熱完畢后以超純水調(diào)零，于510 nm處測(cè)得其吸光度Ai，A0為用水代替樣品時(shí)測(cè)得空白對(duì)照吸光度；Aj為用超純水代替過(guò)氧化氫時(shí)的吸光度。并以VC對(duì)照。按以下公式計(jì)算各試樣對(duì)羥基自由基（·OH）的清除率：

羥自由基清除率/%=[1-（Ai-Aj）/A0]×100

1.4.3.4清除超氧陰離子（O2-·）能力的測(cè)定

鄰苯三酚在堿性條件下發(fā)生自氧化釋放O2-·，并生成有色中間產(chǎn)物，該有色中間產(chǎn)物在325 nm波長(zhǎng)處有一特征吸收峰，當(dāng)有抑制劑存在時(shí)，可清除O2-·，從而阻止中間產(chǎn)物的積累，所以，可通過(guò)比色法來(lái)檢測(cè)有色中間產(chǎn)物的含量，以檢測(cè)物質(zhì)清除O2-·的能力。吸光度越低，清除超氧陰離子自由基效果越好。

采用鄰苯三酚自氧化法測(cè)O2-·的清除率：移取50mmol/L（pH8.2）的Tris-HCl緩沖溶液5.0mL于一系列比色管中，分別加入同一濃度馬齒莧多糖液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL，再加水補(bǔ)充至5.8mL，搖勻，置于37℃水浴中預(yù)熱20 min，再加入37℃預(yù)熱的3mmol/L鄰苯三酚0.20mL，立即混勻，4min時(shí)以空白（不加樣品和鄰苯三酚）作對(duì)照測(cè)定樣品在325 nm處的吸光值A(chǔ)i，A0為用超純水代替樣品時(shí)吸光值，各管對(duì)O2-·的清除率按下列公式計(jì)算。

超氧陰離子的清除率/%=[（A0-Ai）/A0]×100

2　結(jié)果

2.1不同方法提取馬齒莧多糖的提取率

選擇490 nm為馬齒莧多糖含量測(cè)定波長(zhǎng)，葡萄糖濃度在1.45mg/mL～10.15mg/mL范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=0.070 4x+0.018 3（R2=0.992 7），按此方程計(jì)算馬齒莧多糖含量見(jiàn)表1。

表1　不同方法提取馬齒莧多糖的提取率比較Table1　Differentextractionmethodsof purslane polysaccharide extraction rate

由表1可知，不同方法提取多糖的得率為：熱水浸提＞木瓜蛋白酶＞纖維素酶＞果膠酶＞超聲波輔助提取。

2.2不同方法提取馬齒莧粗多糖中蛋白質(zhì)含量

選擇595 nm為蛋白質(zhì)含量的測(cè)定波長(zhǎng)，牛血清白蛋白濃度在20mg/L～100mg/L范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=0.007 1x+0.100 8（R2=0.990 7），根據(jù)此方程計(jì)算馬齒莧粗多糖中蛋白質(zhì)含量見(jiàn)表2。

表2　不同方法提取的馬齒莧粗多糖中蛋白質(zhì)含量Table 2　Different extractionmethodsof purslane in crudepolysaccharide protein content

由表2可知，木瓜蛋白酶提取的粗多糖中蛋白質(zhì)的含量最少，這是因?yàn)槟竟系鞍酌阜纸饬说鞍踪|(zhì)；其次為熱水，這是因?yàn)闊崴沟鞍踪|(zhì)變性，在醇沉?xí)r去掉了一部分蛋白質(zhì)；第三少的是超聲波輔助提取，超聲波也可使蛋白質(zhì)變性，在浸提過(guò)程中除掉了一部分蛋白質(zhì)。粗多糖中蛋白質(zhì)含量為：果膠酶>纖維素酶>超聲波輔助提取>熱水提取>木瓜蛋白酶。

2.3對(duì)Fe3+還原能力

將這5種方法提取的多糖分別用超純水定容于100mL容量瓶中，每一溶液依次在6支10mL比色管中加入0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用超純水補(bǔ)充到2.0mL，并按照1.4.3.1的方法對(duì)Fe3+還原能力進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如圖1所示。

圖1　不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)Fe3+還原能力Fig.1　Reducing ability of Portulaca oleracea L polysaccharidesby by differentm ethodson Fe3+

由圖1得知，在所試濃度范圍，馬齒莧多糖對(duì)Fe3+具有顯著的還原作用，且隨著劑量的增加對(duì)Fe3+的還原能力也逐漸增強(qiáng)，呈量效關(guān)系。不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)Fe3+還原能力為：熱水提取>果膠酶>纖維素酶>木瓜蛋白酶>超聲波輔助提取。

2.4對(duì)Ce（Ⅳ）還原能力

將提取的多糖用超純水定容于100mL容量瓶，依次取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL加入10mL比色管中，加超純水至刻度，搖勻后取此稀釋液0.1mL，再按照

1.4.3.2的方法進(jìn)行Ce（Ⅳ）還原能力的測(cè)定，結(jié)果如圖2所示。

圖2　不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)Ce4+還原能力Fig.2　Reducing ability of Portulaca oleracea L polysaccharidesby by differentmethods on Ce4+

從圖2可知，在所試濃度范圍，馬齒莧多糖對(duì)Ce4+具有顯著的還原作用，且隨著劑量的增加對(duì)Ce4+的還原能力也逐漸增強(qiáng)，呈良好的線性關(guān)系。不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)Ce4+還原能力為：熱水提取最高，其次是果膠酶，再其次是超聲波和木瓜蛋白酶，最低的是纖維素，在添加量小于0.4mL時(shí)超聲波輔助提取>木瓜蛋白酶，添加量大于0.4mL時(shí)超聲波輔助提取<木瓜蛋白酶。

不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)Fe3+和Ce4+的還原能力，熱水提取最強(qiáng)，其次是果膠酶。熱水提取的多糖含量最高，其蛋白質(zhì)含量排第四；果膠酶提取的多糖含量為第四，其粗多糖中蛋白質(zhì)含量最高。木瓜蛋白酶的還原能力為第四，其多糖含量為第二，其蛋白質(zhì)含量為最少。因此不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)Fe3+和Ce4+的還原能力不但與多糖含量有關(guān)，還與不同方法提取的多糖的結(jié)構(gòu)和組成有關(guān)，與蛋白質(zhì)的含量似乎無(wú)關(guān)（因?yàn)槔w維素酶解法提取的多糖含量比果膠酶高0.02%，而其中蛋白質(zhì)含量比其低0.03%，其多糖對(duì)Fe3+和Ce4+的還原能力比果膠酶低很多）。

2.5對(duì)羥自由基（·OH）清除能力

將提取的多糖用超純水定容于100mL容量瓶，依次取0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL加入10mL比色管中，用超純水補(bǔ)充到2.0 m L作為不同濃度的樣品溶液，按照1.4.3.3的方法進(jìn)行·OH清除率的測(cè)定，結(jié)果如圖3所示。

從圖3看出，不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)·OH清除能力隨添加量的增加而增強(qiáng)。在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，變化幅度最大的是纖維素酶。添加量為2.0mL時(shí)，不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)·OH清除能力都強(qiáng)于VC，此時(shí)的清除率為：纖維素酶>木瓜蛋白酶>超聲波輔助提取>熱水提取>果膠酶>VC。添加量為1.2m L時(shí)，果膠酶對(duì)·OH的清除率最大；添加量大于1.2mL時(shí)，木瓜蛋白酶對(duì)·OH的清除率最大。

圖3　不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)·OH的清除率Fig.3　Radical scavenging actⅣities of Portulaca oleracea L polysaccharidesby by differentm ethodson hydroxyl radicals

2.6對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）清除能力

將這5種方法提取的多糖分別用超純水定容于100mL容量瓶中，按照1.4.3.4的方法對(duì)O2-·清除率進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如圖4所示。

圖4　不同方法提取的馬齒莧多糖對(duì)O2-·的清除率Fig.4　Radicalscavenging actⅣitiesof Portulaca oleracea L polysaccharidesby by differentmethodson superoxidenegatⅣe ion free radicals

馬齒莧多糖對(duì)O2-·具有顯著的清除作用，且隨著劑量的增加對(duì)O2-·的清除作用也逐漸增強(qiáng)，呈量效關(guān)系。在所試濃度范圍，果膠酶提取的多糖對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）清除能力最強(qiáng)，其次是纖維素酶，在添加劑量小于0.3mL時(shí)超聲波輔助提取>熱水提取>木瓜蛋白酶。木瓜蛋白酶提取的多糖對(duì)O2-·的清除作用量效關(guān)系最顯著（見(jiàn)圖4）。雖然熱水提取的多糖含量最高，但清除O2-·和·OH自由基的能力并不是最好，這可能與不同提取方法提取的多糖的組成和結(jié)果有關(guān)，這有待今后進(jìn)一步研究。

3　結(jié)論

1）不同方法提取的馬齒莧多糖的得率為：熱水浸提>木瓜蛋白酶>纖維素酶>果膠酶>超聲波輔助提取。不同方法提取的粗多糖中蛋白質(zhì)含量：果膠酶>纖維素酶>超聲波輔助提取>熱水提取。

2）不同方法提取的馬齒莧粗多糖對(duì)Fe3+和Ce4+的還原能力：熱水提取最強(qiáng)，其次是果膠酶；果膠酶提取的粗多糖對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）清除能力最強(qiáng)，其次是纖維素酶；對(duì)羥基（·OH）清除能力，添加量為2.0mL時(shí)，纖維素酶最好，添加量為1.2m L時(shí)，果膠酶最好。

3）在所試濃度范圍，從馬齒莧粗多糖對(duì)Fe3+和Ce4+的還原能力、對(duì)羥基和超氧陰離子自由基的抗氧化能力這4個(gè)方面來(lái)看，果膠酶提取的馬齒莧粗多糖抗氧化性最好。馬齒莧粗多糖的抗氧化性與其多糖的含量及提取方法有關(guān)，提取方法不同多糖的結(jié)構(gòu)和組成可能不同，從而影響其抗氧化性，這有待今后進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]余慶皋,王曉春,熊志青.馬齒莧的不同部位在體內(nèi)外抗氧自由基作用的比較研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2007,14(2):346-348

[2]李玉萍,劉志勇,謝國(guó)秀,等.馬齒莧多糖抗糖尿病作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2008,20(5):813-815,865

[3]王曉波,劉殿武,丁月新,等.馬齒莧多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞免疫功能作用[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2005,21(4):462-463

[4]朱曉宦,吳向陽(yáng),仰榴青,等.馬齒莧粗多糖的提取及清除羥自由基活性作用[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,17(1):57-60

[5]張海艷,鄭玲.馬齒莧多糖的提取及體外抗菌活性[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(5):413-415

[6]皮小芳,李玉萍,吳光杰,等.貯存時(shí)間及溫度對(duì)馬齒莧多糖體外抗氧化活性的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥.2012,23(1):164-165

[7]李海燕,王旭深.馬齒莧多糖提取方法的比較[J].第一軍醫(yī)大學(xué)分校學(xué)報(bào),2005,28(2):186-187

[8]錢(qián)志偉,王會(huì)曉,楊海蛟.酶法提取馬齒莧多糖[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2011,27(5):475-478

[9]陳凌,賀偉強(qiáng),陶昆,等.不同采收期馬齒莧活性成分含量及抗氧化性的變化[J].北方園藝,2015(8):157-160

[10]王文平,郭祀遠(yuǎn),李琳,等.考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定野木瓜多糖中蛋白質(zhì)的含量[J].食品研究與開(kāi)發(fā),2008,29(1):115

[11]趙英永,戴云,崔秀明,等.考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測(cè)定草烏中可溶性蛋白質(zhì)含量[J].云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006,15 (3):235

[12]李曉波,馮欣艷,趙儒銘,等.基于Ce(Ⅳ)分光光度法的天然產(chǎn)物抗氧化活性的評(píng)價(jià)[J].化學(xué)研究與應(yīng)用,2012,24(1):42-47

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.22.004

收稿日期：2015-08-24

基金項(xiàng)目：化工資源有效利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（CRE-2014-C-302）；嘉興市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015AY21004）

作者簡(jiǎn)介：陳凌（1962—），女（漢），副教授，學(xué)士，研究方向：植物源食品抗氧化劑。

The Comparison of Antioxidant Activity of Polysaccharides Extracted from Purslane by Different W ays

CHENLing，CHEN Zhao-gui，LUO Lu-jia，JIA Yan
（Agriculture and EnvironmentalBranch，Jiaxing Vocational TechnicalCollege，Jiaxing314036，Zhejiang，China）

Abstract：Purslane polysaccharide extracted by different methods，and determination of the content of polysaccharide and protein content.Using in vitro experimental study of purslane polysaccharide on Fe3+，Ce4+reduction ability and the superoxide anion（O2-·）and hydroxyl radical（·OH）scavenging effect.The results showed that，for the rate of polysaccharide extracted with differentmethods：hotwater extraction>papain> cellulase>pectinase>ultrasonic-assisted extraction.Theprotein contentof the crudepolysaccharide：pectinase> cellulase>ultrasonic extraction>hotwater extraction>papain.In the experimental concentration range，the reduction capabilityofpurslane polysaccharide on Fe3+and Ce4+：hotwater extractionwas strongest，followed by pectinase.The crude polysaccharide scavenging superoxide anion free radical by pectinase extraction had the strongest ability，followed by cellulose.Adding amountwas 2.0 m L，cellulase on hydroxyl scavenging ability was the best，adding amountwas1.2mL，the bestof pectinase.From these four aspects to evaluate，pectinase extraction ofpurslane crudepolysaccharideantioxidationwas thebest.

Keywords：Portulaca oleracea L.polysaccharide；extractionmethod；oxygen free radicals；antioxidaion