刺五加葉亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)研究

張晶瑩，宋昕恬，孫蘭，孟令儀，白雪松（.吉林省疾病預(yù)防控制中心，吉林長春30062；2.吉林醫(yī)藥學(xué)院營養(yǎng)教研室，吉林吉林3203）

刺五加葉亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)研究

張晶瑩1，宋昕恬1，孫蘭1，孟令儀1，白雪松2，*
（1.吉林省疾病預(yù)防控制中心，吉林長春130062；2.吉林醫(yī)藥學(xué)院營養(yǎng)教研室，吉林吉林132013）

摘要：評價刺五加葉的食用安全性。根據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法》對刺五加葉進(jìn)行90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)。Wistar大鼠80只，分為4組，雌雄各半，分別給予實(shí)驗(yàn)組刺五加葉8.0、6.0、4.0 g/kg BW，對照組給予正常飼料。90 d后各組動物生長發(fā)育情況良好，給予刺五加葉對大鼠體重、食物利用率無明顯影響，血常規(guī)、肝功能、腎功能、臟器系數(shù)等指標(biāo)未見異常。刺五加葉對大鼠血液生化、血液學(xué)等指標(biāo)無明顯影響，未引起大鼠肝臟、腎臟等主要器官組織形態(tài)學(xué)改變。

關(guān)鍵詞：刺五加葉；亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)；大鼠

刺五加[Acanthopanax senticocus（Rupr：et Maxim.）Harms]系五加科植物[1]，是我國北方地區(qū)常用的藥材之一，主要入藥部位為干燥根及根莖，其莖、葉也具有藥理活性[2-3]作用。隨著人們對于刺五加研究不斷的深入，刺五加葉中的多種有效活性成分不斷被開發(fā)出來，具有深入研究的價值。為了滿足新資源食品評審的要求，根據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法》對大鼠進(jìn)行了90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)。

1　材料和方法

1.1試劑與儀器

刺五加葉，粉末狀：由五常北秀健康產(chǎn)業(yè)有限公司提供；SYSMEX-XT1800i型五分類血球計數(shù)儀：日本產(chǎn)；五分類試劑盒：由上?？迫A東菱診斷用品有限公司提供；TBA-120FR全自動生化分析儀：日本東芝；生化試劑盒：由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供。

1.2實(shí)驗(yàn)動物

健康Wistar大鼠，雌雄各40只，體重（70～85）g，由長春市億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK-（吉）2011-0004。本實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境設(shè)施合格證，吉動設(shè)字10-1005，溫度20℃～22℃、濕度55%～65%。

1.3方法

動物購入后飼養(yǎng)3 d，隨機(jī)分為對照組及3個受試物組，每組雌雄各10只。人體推薦量為每日3.0 g，即3.0 g/60 kg BW，相當(dāng)于0.05 g/kg BW。最高劑量組以成人日攝入量的160倍計，即8.0 g/kg BW，中劑量組6.0 g/kg BW相當(dāng)于成人攝入量的120倍，低劑量組4.0 g/kg BW，相當(dāng)于成人攝入量的80倍。將3個試驗(yàn)組受試物均勻摻入基礎(chǔ)飼料中（采用逐漸擴(kuò)大、充分混勻、反復(fù)過篩的方法），含量依次為10.0%、8.0%、6.0%。對照組喂飼正?；A(chǔ)飼料。大鼠飼料攝入量按體重8%計算，由于高、中、低劑量組受試物的比例均大于5%，故飼料中補(bǔ)充酪蛋白（由甘肅省臨夏州華安生物制品有限公司生產(chǎn)），具體方法如下：基礎(chǔ)飼料蛋白含量為18.94%，高劑量組樣品占飼料比例10.0%，超出最大規(guī)定量5.0%，則高劑量組飼料按0.947%比例加入酪蛋白。中劑量組樣品占飼料比例8.0%，超出最大規(guī)定量3.0%，則中劑量組飼料按0.568%比例加入酪蛋白；低劑量組樣品占飼料比例6.0%，超出最大規(guī)定量1.0%，則低劑量組飼料按0.189%的比例加入酪蛋白。大鼠單籠喂養(yǎng)90 d，自由飲食。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1一般觀察指標(biāo)

每天觀察動物的表現(xiàn)、行為活動、中毒狀況、死亡情況。每周稱一次體重、兩次食物攝入量，計算食物周利用率及總利用率。

1.4.2血液學(xué)指標(biāo)及血液生化指標(biāo)

于試驗(yàn)中期尾靜脈采血，進(jìn)行血液學(xué)及血液生化指標(biāo)檢測。血液學(xué)指標(biāo)采用SYSMEX-XT1800i進(jìn)行檢測；血液生化指標(biāo)采用TBA-120FR全自動生化分析儀進(jìn)行檢測：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿素（UREA）、肌酐（Cr）、血糖（Glu）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）。禁食16 h后，于試驗(yàn)第91天稱重，用1%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液，按5.0 mL/kg BW腹腔注射麻醉后，下腔靜脈采血，進(jìn)行血液學(xué)及血液生化指標(biāo)檢測。

1.4.3病理檢查

第91天進(jìn)行大體解剖，組織病理檢查（肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸或卵巢）。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用單因素方差分析，方差齊時，各組間兩兩比較用LSD方法，不齊時，各組間兩兩比較采用Tamhane’s方法。所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理均采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行。

2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1一般觀察情況

整個實(shí)驗(yàn)過程中動物無死亡，無異常行為表現(xiàn)。3個劑量組所有試驗(yàn)組動物在實(shí)驗(yàn)期內(nèi)毛發(fā)光澤、黏膜紅潤，活動自如，排泄物無異常，生長發(fā)育正常，體重、進(jìn)食量、食物利用率與對照組相比均無差異（P>0.05）。

2.2血液學(xué)指標(biāo)

90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)中期和末期大鼠血常規(guī)檢驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量組動物的白細(xì)胞（WBC）、淋巴細(xì)胞（LY）、單核細(xì)胞（MO）和分葉細(xì)胞（GR）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（Hgb）各項指標(biāo)結(jié)果均在正常范圍內(nèi)，與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

2.3生化指標(biāo)

由表1、2可見，試驗(yàn)?zāi)┢谛坌愿邉┝拷MALb與對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；雄性中劑量組TG與對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；雌性中劑量組ALT與對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），但在本實(shí)驗(yàn)室歷史正常值范圍內(nèi)，其余各劑量組各項血液生化指標(biāo)試驗(yàn)中期及末期ALT、AST、BUN、CR、GLU、TP、ALB、CHO、TG與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

表1　刺五加葉90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)中期生化檢測結(jié)果Table 1　Acanthopanax leaves mid 90 d feeding study biochemical test results

表2　刺五加葉90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)?zāi)┢谏瘷z測結(jié)果Table 2　Acanthopanax leaves end 90 d feeding study biochemical test results

2.4病理學(xué)檢查

刺五加葉90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)病理學(xué)檢查結(jié)果見圖1。

圖1　刺五加葉90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)病理學(xué)檢查結(jié)果Fig.1　Acanthopanax leaves 90 d feeding study pathology results

切片鏡檢，肝臟：呈暗紅色，質(zhì)軟，表面光滑、平整，未見隆起及包塊。鏡下所見：對照組雌性2例，雄性1例，高劑量組雌性1例，雄性1例可見肝小葉點(diǎn)狀壞死；對照組雌性2例，雄性3例，高劑量組雌性1例，雄性3例可見肝小葉炎細(xì)胞浸潤；其余被膜完整，無明顯異常病理改變。脾：鏡下所見：高劑量組脾臟與對照組比較，無明顯差異。可清楚看到脾臟實(shí)質(zhì)的紅髓、白髓及邊緣區(qū)三部分，被膜及脾小梁未見纖維結(jié)締組織增生，淋巴濾泡未見反應(yīng)性增生。腎臟：高劑量組與對照組雙側(cè)腎臟等大似豆形，表面光滑平整，未見明顯增大與縮小。鏡下觀察：腎被膜光滑，腎小球在切片上呈圓形，腎皮質(zhì)區(qū)腎小球未見明顯增大或萎縮、纖維化、變性等，毛細(xì)血管袢未見壞死，腎小球毛細(xì)血管未見擴(kuò)張充血、管壁未見增厚。小管上皮完好，間質(zhì)無炎細(xì)胞浸潤，為正常腎臟組織結(jié)構(gòu)。其余動物腎臟一般結(jié)構(gòu)均未發(fā)現(xiàn)異常改變。胃：鏡下主要觀察胃黏膜。對照組雌性1例，雄性2例，高劑量組雌性2例，雄性1例可見胃固有層內(nèi)少量嗜酸粒細(xì)胞浸潤；余為正常胃黏膜結(jié)構(gòu)。十二指腸：鏡下主要觀察黏膜，高劑量組與對照組十二指腸黏膜表面可見大小不一的腸黏膜，呈葉片狀，黏膜上皮呈高柱狀，可見十二指腸腸腺，各層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞未見異常，高劑量的十二指腸結(jié)構(gòu)與對照組比較無明顯差異。睪丸：鏡下觀察：高劑量組與對照組睪丸曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)清晰，各級生精細(xì)胞形態(tài)正常，精子細(xì)胞清晰可見，支持細(xì)胞未見異常。睪丸間質(zhì)未見出血、壞死、鈣化或精子肉芽腫形成。曲細(xì)精管內(nèi)可見精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子，為正常睪丸組織結(jié)構(gòu)。卵巢：鏡下觀察：高劑量組與對照組卵巢表面為扁平或立方細(xì)胞，皮質(zhì)層內(nèi)可見許多發(fā)育不同階段的卵泡，卵泡間為結(jié)締組織，髓質(zhì)區(qū)由結(jié)締組織組成，含較多血管，高劑量組的卵巢與對照組相似，未見異常。

3　結(jié)論與討論

近年來，隨著刺五加葉的相關(guān)報道不斷增多，對刺五加葉中的化學(xué)成分和藥理活性具有了較好的研究[4-5]，但對其安全性評價方面較少。本次研究，給予不同劑量的刺五加葉進(jìn)行90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)，期間動物的全身情況良好，活動正常，無口鼻出血情況、拒食和其它異常行為，生長發(fā)育良好。對體重、食物利用率均未見明顯影響。在實(shí)驗(yàn)中期、末期對大鼠血液學(xué)、肝腎功能等指標(biāo)進(jìn)行了檢測，均無明顯影響。組織病理學(xué)檢查顯示，除有少許常見自發(fā)病變，肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢等主要器官無組織形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷，均未觀察到與喂養(yǎng)刺五加葉有關(guān)的組織病理學(xué)改變。為刺五加葉進(jìn)入新資源食品提供理論依據(jù)和參考品。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:192-193

[2]李志峰,楊金義,張武崗,等.刺五加的化學(xué)成分研究[J].中草藥, 2011,42(5):852-855

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[4]劉建華,呂寧,李敬芬.刺五加莖葉果實(shí)的生藥學(xué)研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2007,18(5):1193-1194

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.011

收稿日期：2014-07-18

作者簡介：張晶瑩（1978—），女（漢），主管醫(yī)師，碩士，主要從事食品毒理學(xué)研究。

*通信作者：白雪松（1978—），男（滿），副教授，碩士，主要從事預(yù)防醫(yī)學(xué)。

Study on the Toxicity of Subchronic Oral of Acanthopanax Leaves

ZHANG Jing-ying1，SONG Xin-tian1，SUN Lan1，MENG Ling-yi1，BAI Xue-song2，*
（1.Jilin Provincial Center for Disease Control and Prevention，Changchun 130062，Jilin，China；2.Department of Nutrition，Jilin Medical College，Jilin 132013，Jilin，China）

Abstract：To investigate the toxicity of Acanthopanax leaves on rats，on the basis of Technical Standards for Testing﹠Assessments of Food，a ninety days feeding study of Acanthopanax leaves was conducted，80 rats were randomly divided into 4 groups，and each group consisted of 10 males and 10 females.The experimental group were given Acanthopanax leaves 8.0，6.0，4.0 g/kg BW for 90-days，control group received normal feed. The result showed that，after the challenge of Acanthopanax leaves，for 90-days，we detect no abnormality of animal growth and development，weight，and food efficiency.Also Acanthopanax leaves，there was no adverse effect of liver function，kidney function，and organ coefficients.Acanthopanax leaves at above mentioned doses causes no pathological changed in rats liver and kidney，and no changes in serum biological indexes.

Key words：Acanthopanax leaves；subchronic oral toxicity test；rats