HPLC 法測定婦炎舒膠囊中紅景天苷的含量

申旭霽，杜杉，夏傳濤，張寒，張彥，汪興軍

(1.西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，陜西 西安 710021;2.陜西東科制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710043)

婦炎舒膠囊為忍冬藤、大血藤、甘草、大黃(酒制)、虎杖、川楝子(制)等十一味藥材組成的中藥復(fù)方膠囊劑，功在清熱涼血，活血止痛。用于治療因女性盆腔炎癥所引起的帶下量多、腹痛等癥［1］。目前現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對綠原酸進行了含量控制，但處方中忍冬藤和大血藤中均含綠原酸。那么單純控制綠原酸的含量不能有效實現(xiàn)控制大血藤用量的目標(biāo)。大血藤為方中君藥，主含酚類、黃酮、有機酸、蒽醌、木脂素、三萜皂苷等成分［2］，但2010 版《中華人民共和國藥典》未對大血藤作含量限度的要求。而文獻報道紅景天苷在大血藤中含量穩(wěn)定，雖不同產(chǎn)地含量略有差異，但測定方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好［3-6］。因此，選擇紅景天苷作為含量測定指標(biāo)建立高效液相色譜方法，擬在已對綠原酸進行含量控制的基礎(chǔ)上，增加紅景天苷的含量控制，進一步完善該產(chǎn)品的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

紅景天苷對照品，中國藥品生物制品檢定所，(批號:110818-201005);婦炎舒膠囊，陜西東科制藥有限責(zé)任公司(批號:141101，141102，141103，141104，141105，141106);乙腈，色譜純;水，純化水;甲醇等其余試劑均為分析純。

安捷倫1200 系列高效液相色譜儀。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 Welchrom XDB-C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)色譜柱，0.1%甲酸水溶液-乙腈(83∶17)為流動相，檢測波長為275 nm，流速為1 mL/min，柱溫30 ℃，進樣體積10 μL。

1.2.2 對照品溶液制備 精密稱取0.2 mg 紅景天苷對照品，加流動相定容至10 mL，即得。

1.2.3 供試品溶液制備 取20 粒婦炎舒膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，精密稱取0.4 g，置于具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入甲醇20 mL，密封，稱定質(zhì)量，超聲提取2 次(超聲功率250 W，頻率40 kHz)，每次30 min，放至室溫，加甲醇補足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，精密移取續(xù)濾液10 mL，濃縮至約2 mL，經(jīng)非極性大孔樹脂柱(4 g，內(nèi)徑1.5 cm)分離，先水洗至無色，再用30%甲醇10 mL洗脫，最后用75%甲醇50 mL 洗脫，收集75%甲醇洗脫液，水浴蒸干，蒸發(fā)皿內(nèi)殘留物以流動相溶解，定量轉(zhuǎn)移至10 mL 量瓶中定容，搖勻，即得。

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性實驗

依本品處方量，按1.2.3 節(jié)方法制成不含紅景天苷的陰性供試品溶液。分別精密吸取陰性供試品溶液、供試品溶液及對照品溶液各10 μL，依次注入液相色譜儀。按1.2.1 節(jié)色譜條件完成測定，記錄譜圖，結(jié)果見圖1。

圖1 婦炎舒膠囊HPLCFig.1 HPLC graphs of Fuyanshu capsules

由圖1 可知，在陰性供試品溶液色譜圖中，紅景天苷對照品色譜峰相應(yīng)位置上未出現(xiàn)色譜峰，說明陰性樣品無干擾。

2.2 線性實驗

精密稱取紅景天苷對照品適量，加流動相制成濃度為0.152 1 mg/mL 的對照品貯備液。精密吸取上述對照品貯備液5 mL，量瓶中定容至10 mL，搖勻，得濃度為76. 0 μg/mL 的溶液;再吸取該溶液5 mL，量瓶中定容至10 mL，搖勻，得濃度為38.0 μg/mL的溶液，逐級稀釋制備成含量分別為19.0，9.5 μg/mL 的系列對照品溶液。精密吸取上述各濃度對照品溶液和對照品貯備液各10 μL，按濃度梯度由低到高依次注入液相色譜儀，按1.2.1節(jié)色譜條件完成測定，以測得的峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:y =318.6x－1.223，相關(guān)系數(shù)r =0.999 9。結(jié)果顯示，紅景天苷濃度在9.5 ～152.1 μg/mL 之間與其對應(yīng)峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.3 精密度實驗

精密吸取濃度為19.0 μg/mL 的紅景天苷對照品溶液重復(fù)進樣6 次，每次進樣10 μL，測定峰面積，計算RSD=0.82%。

2.4 穩(wěn)定性實驗

依1.2.3 節(jié)方法配制供試品溶液，將供試品溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室(4 ℃)中，分別在第0，1，2，3，5，7 d 平行測定2 次紅景天苷的含量，2次測定結(jié)果的平均值為該時間點紅景天苷含量。含量分別為:室溫條件下0.572，0.571，0.574，0.569，0. 573，0. 577 mg/g;低 溫 條 件 下0. 572，0. 574，0.576，0.575，0.573，0.570 mg/g。結(jié)果顯示紅景天苷各時間點測定的含量值均未超過0 天含量值±5.0%，說明供試品溶液貯存7 d 內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性實驗

取同一批號的婦炎舒膠囊樣品6 份，按1.2.3節(jié)方法制備供試品溶液，進行測定，得紅景天苷的含量分 別 為0. 574，0. 569，0. 572，0. 578，0. 563，0.569 mg/g，平均含量為0.571 mg/g，RSD=0.90%(n=6)。

2.6 加樣回收率實驗

精密稱取已知含量為0.571 mg/g 的樣品6 份，每份約0.4 g，分別精密加入濃度為0.112 1 mg/mL紅景天苷對照品溶液1 mL，依1.2.3 節(jié)方法制備供試品溶液，測定樣品含量，進行回收率計算，結(jié)果見表1。

由表1 可知，平均回收率為100.66%，RSD =1.84%(n=6)。

表1 紅景天苷加樣回收率實驗結(jié)果(n=6)Table 1 Results of recovery test for salidroside

2.7 樣品測定

取連續(xù)6 批婦炎舒膠囊(批號:141101，141102，141103，141104，141105，141106)樣品適量，依1.2.3 節(jié)方法分別制備供試品溶液，按上述擬定的含量測定方法測定6 批樣品中紅景天苷的含量。含量分別為0. 230，0. 228，0. 233，0. 225，0. 227，0. 232 mg/粒。

3 結(jié)論

在運用文獻中的流動相進行測定時，發(fā)現(xiàn)紅景天苷樣品峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度＜1.5，不能實現(xiàn)有效分離。在對流動相中的有機相乙腈的比例進行調(diào)整后，紅景天苷樣品峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度可達(dá)15 以上，紅景天苷樣品峰與相鄰雜質(zhì)峰均可有效分離，且紅景天苷保留時間適中，色譜峰對稱性好，理論板數(shù)以紅景天苷峰計算可達(dá)8 000 以上。

在利用超聲波提取法獲得婦炎舒膠囊中紅景天苷時，由于膠囊處方組成相對復(fù)雜，對測定結(jié)果干擾因素較多，紅景天苷與相鄰雜質(zhì)的分離度不理想，因此，將本品經(jīng)非極性大孔樹脂處理，經(jīng)水洗和30%甲醇洗脫除去干擾雜質(zhì)，收集75%甲醇的洗脫部分，濃縮后測定。結(jié)果顯示本法可有效地減少供試品溶液中的雜質(zhì)量，使紅景天苷的測定免受干擾，方法可行。

采用本研究建立的方法，測定6 批婦炎舒膠囊，結(jié)果顯示，本方法測定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，操作簡便，可有效控制婦炎舒膠囊的質(zhì)量。

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