白雞屎藤揮發(fā)油防治雛雞腸炎沙門氏菌病的效果評價

吳 強， 段俊紅， 楊 帆， 羅 杰

(銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州銅仁554300)

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白雞屎藤揮發(fā)油防治雛雞腸炎沙門氏菌病的效果評價

吳 強， 段俊紅， 楊 帆， 羅 杰

(銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州銅仁554300)

為探索白雞屎藤揮發(fā)油防治雛雞腸炎沙門氏菌病的效果，將7 日齡三黃雛雞420只隨機均分為A、B、C、D、E、F組，對A、B、C組按1 g/kg體重預(yù)防用藥，在12 日齡時對A、B、D、E組口服腸炎沙門氏菌建模，攻毒24 h后對A、D組按1 g/kg體重給藥治療。同時，在7 日齡和0(攻毒前)、 6、 12、 24、 48、 96、 120 h從存活的雛雞中每組隨機抽取5只觀察其病理變化，并統(tǒng)計各試驗組增重率、發(fā)病率、病死率、死亡率和顯效率。結(jié)果顯示，白雞屎藤揮發(fā)油可以提升正常雛雞的增重率，改變患雞的病理組織損傷，降低各試驗組雛雞的發(fā)病率和死亡率。結(jié)果表明，白雞屎藤揮發(fā)油除具有一定的促生長作用外，還對腸炎沙門氏菌病具有較為顯著的防治作用。

白雞屎藤揮發(fā)油；腸炎沙門氏菌；防治；雛雞

腸炎沙門氏菌是一種革蘭氏陰性菌和泛嗜性人畜共患病原菌，為無宿主特異性而有很強侵害性的病原菌之一，不僅能引起畜禽發(fā)病死亡造成嚴重的經(jīng)濟損失，而且被污染的畜禽產(chǎn)品作為腸炎沙門氏菌的攜帶者[1]，還嚴重危害人類的健康[2]。白雞屎藤(Cissusrepens)為茜草科植物毛雞屎藤的全草，具消食健胃、益氣補虛、止咳、止痛、清熱解毒、祛風(fēng)活血、行氣解郁等功效，可通過熏蒸、內(nèi)服等途徑用于防治畜禽傳染性或非傳染性腹瀉，如食積停滯、消化不良、疳積、胃腸瘀痛、熱毒瘡瘍等胃腸道疾病。本試驗依據(jù)熏蒸原理和揮發(fā)油的性質(zhì)，根據(jù)白雞屎藤揮發(fā)油對感染腸炎沙門氏菌雛雞臨床癥狀、病理剖檢特征和臨床指標的影響，探索白雞屎藤揮發(fā)油防治雛雞腸炎沙門氏菌病的效果，旨在為白雞屎藤揮發(fā)油防治雛雞腸炎沙門氏菌病提供參考。

1 儀器與材料

1.1 主要試驗儀器 電子天平(島津AY220)、電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進醫(yī)療器械一廠制造)、MDF超低溫冰箱(三洋)、振蕩培養(yǎng)箱(常州華普達教學(xué)儀器有限公司)、800低速離心機(上海星火醫(yī)療器械廠)、高壓蒸汽滅菌鍋(三洋)、LEICA RM2015組織切片機、LEICA XSZ.G光學(xué)顯微鏡、OLYMPUS PM10SP顯微成像系統(tǒng)、高速臺式離心機、純水儀、冷凍離心機、冰箱、超凈工作臺、普通天平等。

1.2 試劑與菌種 (1)白雞屎藤揮發(fā)油(銅仁地區(qū)民族獸藥研究所提供，原料藥采于貴州省銅仁地區(qū)松桃縣，經(jīng)銅仁地區(qū)民族獸藥研究所鑒定和提取)、無水乙醇、蛋白胨、酵母抽提取物、二甲苯、氨水、鹽酸、甲醛溶液、蘇木精、伊紅、乙醚等。(2)腸炎沙門氏菌(SalmonellaEnteritidis，RS307)，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。

2 試驗方法

2.1 療效評價指標

2.1.1 發(fā)病率：試驗期間出現(xiàn)腸炎沙門氏菌典型癥狀病例的數(shù)量。計算公式為：發(fā)病率=出現(xiàn)明顯癥狀雞只數(shù)/該組雞總數(shù)×100%

2.1.2 顯效率：給藥后臨床癥狀明顯減輕,精神狀態(tài)好轉(zhuǎn),食欲恢復(fù),體重較用藥前增加的病雞,均判斷藥物對感染顯效。計算公式為:顯效率=癥狀明顯恢復(fù)雞只數(shù)/該組病雞總數(shù)×100%

2.1.3 死亡率及病死率：試驗期間出現(xiàn)腸炎沙門氏菌病的典型癥狀并死亡，剖檢有典型的腸炎癥狀及敗血癥病變，并從肝臟、脾臟或肺臟中分離培養(yǎng)出腸炎沙門氏菌的判斷為感染死亡。根據(jù)死亡雞的數(shù)目計算其死亡率及病死率。死亡率=死亡雞數(shù)/該組雞總數(shù)×100%；病死率=死亡雞數(shù)/該組病雞總數(shù)×100%

2.2 試驗動物分組 1 日齡三黃雞，在實驗室條件下孵化，用不含任何抗菌藥物的全價飼料飼喂至7 日齡。稱重后隨機將其分成：預(yù)防用藥攻毒治療組(A)、預(yù)防用藥攻毒不治療組(B)、預(yù)防用藥不攻毒組(C)、正常動物攻毒治療組(D)、正常動物攻毒不治療組(E)、正常動物對照組(F)，共6個組，每組70只，共計420只。

2.3 試驗過程、病理造模、臨床觀察 從7 日齡起，每天用白雞屎藤揮發(fā)油1 g/kg體重對A、 B、 C組雛雞滴鼻預(yù)防用藥， D、 E、 F組給予相同劑量的生理鹽水，連續(xù)給藥5 d，稱重并采樣后對A、 B、 D、 E組雛雞口服接種腸炎沙門氏菌(1.0×109cfu/mL)1 mL，F(xiàn)組雛雞口服相同劑量滅菌生理鹽水，接種后定期觀察雛雞精神狀況、食欲、活動、糞便等臨床變化。攻毒后24 h，對A、 D組用白雞屎藤揮發(fā)油 1 g/kg 體重進行治療， B、 C、 E、 F組給予相同劑量的生理鹽水，連續(xù)用藥5 d。增重率的計算公式如下：增重率=(17 日齡體重-12 日齡體重)/12 日齡體重×100%

2.4 病理組織學(xué)觀察 在7 日齡和在0(攻毒前)、6、 12、 24、 48、 96、 120 h從存活的試驗雛雞中隨機抽取5只，脫臼處死后，迅速取小腸段腸管1 cm左右，以及胸腺、脾臟、法氏囊、肝臟等組織1～2塊用10%福爾馬林液固定，脫水，石蠟包埋，切片，H.E常規(guī)染色，顯微鏡下觀察并記錄病理組織學(xué)變化。

3 試驗結(jié)果與分析

3.1 臨床觀察 攻毒后12～24 h，雛雞出現(xiàn)明顯的腹瀉等臨床癥狀，結(jié)合病理組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，雛雞腸壁充血水腫，可見大量的炎性細胞浸潤，腸積液增多，說明采用腸炎沙門氏菌攻毒造模成功。在攻毒后12 h， E組陸續(xù)出現(xiàn)癥狀，部分雞閉眼昏睡，呆立或趴臥不起；部分雞擁擠成堆，兩翅下垂，精神委頓。攻毒后24 h，表現(xiàn)為精神沉郁，嗉囊空虛，部分雞出現(xiàn)腹瀉，拉白色稀糊糞便，叫聲尖銳，不食。A、 B組發(fā)病高峰明顯延后，癥狀較E組輕微。在攻毒后24～48 h， A、 D組病癥開始逐漸恢復(fù)，食欲增加； E組雛雞開始大量死亡，死亡雛雞消瘦，嗉囊空虛。攻毒后48 h， B、 E組雛雞死亡數(shù)呈下降趨勢。

3.2 病理剖檢變化 所有組別在接種腸炎沙門氏菌后6～12 h內(nèi)病理剖檢無明顯眼觀變化。攻毒后24 h， D、 E組剖檢見肝臟、肺臟、脾臟、法氏囊、腎臟、小腸壁出現(xiàn)廣泛性的腫脹和點狀出血，并且心臟表面有纖維素性滲出，肺臟出現(xiàn)輕度水腫，腎臟腫大，脾臟有不同程度的腫脹且表面出現(xiàn)大小不等的白色壞死灶。B組在48 h也開始出現(xiàn)相似的臨床癥狀， A、 D組癥狀較輕微，未出現(xiàn)繼續(xù)加重的趨勢。對死亡雞進行剖檢，發(fā)現(xiàn)肝臟充血、腫大、變黑，呈紅色點狀或紋狀出血，膽囊擴張；部分雛雞腸腔內(nèi)有白色稀糞存積，腸黏膜潮紅，腸腔出現(xiàn)環(huán)狀出血帶，部分雞小腸內(nèi)容物混有血液；肺臟為紫紅色或暗紅色，呈出血性肺炎病變；法氏囊內(nèi)腔面嚴重出血。

3.3 病理組織學(xué)變化 主要病理組織學(xué)變化表現(xiàn)在攻毒后24 h，發(fā)病雛雞內(nèi)臟器官出現(xiàn)廣泛性的水泡變性(見圖1)，部分病例見廣泛性充血(見圖2、圖3、圖4)或出血(見圖5)，但A、 B、 C組病變較D組和E組輕，F(xiàn)組未出現(xiàn)出血性病理變化。攻毒后48 h，對A、 D組用白雞屎藤揮發(fā)油進行治療后病變較B、 E組明顯減輕，未出現(xiàn)出血性病變。

圖1 肝細胞出現(xiàn)廣泛性的水泡變性(10×40 H·E)

圖2 淋巴結(jié)充血(10×40 H·E)

圖3 肺毛細血管擴張充血 (10×40 H·E)

圖4 腎臟間質(zhì)毛細血管擴張充血(10×40 H·E)

圖5 腸壁廣泛性出血(10×40 H·E)

3.4 體重變化 比較7 日齡各組雛雞體重差異不顯著(P>0.05)，符合試驗要求。在12 日齡，各組間差異不明顯，僅C組顯著高于F組(P<0.05)，說明白雞屎藤揮發(fā)油對雛雞具有一定的增重作用。17 日齡(即攻毒后120 h)， C組極顯著高于F組(P<0.01)，說明隨著時間的延長，白雞屎藤揮發(fā)油對雛雞的促生長和增重作用愈加明顯；同時，17 日齡A組與F組差異不顯著(P>0.05)，而A組顯著大于B組，說明白雞屎藤揮發(fā)油對患腸炎沙門氏菌雛雞體重的恢復(fù)具有顯著的影響。見表1。

表1 試驗期間雞體重變化情況(n=10) g

注：同一行中，相同大寫字母或小寫字母者表示差異不顯著(P>0.05)，同一大寫字母與小寫字母者表示差異顯著(P<0.05)，標有不同字母者表示差異極顯著(P<0.01)。

3.5 療效觀察 從12～17 日齡， 增重率統(tǒng)計學(xué)分析具有顯著性意義(P<0.01)， A組增重率大于B組， D組增重率大于E組， C組增重率大于F組，表明白雞屎藤揮發(fā)油可促進正常雛雞體重的生長，并使患病雛雞體重恢復(fù)至正常。在死亡率與病死率方面，死亡率統(tǒng)計學(xué)分析具有顯著性意義(P<0.01)，F(xiàn)組最小， E組大于D組和B組， B組大于A組和D組，說明白雞屎藤揮發(fā)油的預(yù)防與治療作用均可降低正常雛雞和患病雛雞的死亡率和病死率。在顯效率方面，統(tǒng)計學(xué)分析具有顯著性意義(P<0.01)，A組最高，D組次之，B組最低，表明白雞屎藤揮發(fā)油對感染腸炎沙門氏菌雛雞有一定的治療作用，并且預(yù)防作用可以增強其治療效果。在發(fā)病率方面，統(tǒng)計學(xué)分析未見顯著性意義，直觀比較見A、B組低于D、 E組，表明白雞屎藤揮發(fā)油的預(yù)防作用可以減少雛雞的發(fā)病率。見表2。

表2 雛雞腸炎沙門氏菌防治作用效果

4 小結(jié)與討論

4.1 腸炎沙門氏菌屬于無宿主特異性而有侵害性的病原菌，宿主包括人和各種動物。腸炎沙門氏菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素是一種多糖、類脂、蛋白質(zhì)化合物[3]，是誘發(fā)炎癥反應(yīng)過程中主要的致病成分，通過誘導(dǎo)體內(nèi)單核-巨噬細胞合成并釋放多種炎癥介質(zhì)，參與機體的免疫炎癥反應(yīng)，嚴重時可導(dǎo)致膿毒癥或休克。動物從被污染飼料中攝入大量的活菌，病菌在腸道內(nèi)繼續(xù)繁殖，經(jīng)腸系膜淋巴系統(tǒng)進入血液循環(huán)，形成一過性菌血癥。腸道內(nèi)大量的細菌及菌體崩解后釋放出來的內(nèi)毒素造成腸道黏膜腫脹、滲出、黏膜脫落而中毒，癥狀主要為不同性質(zhì)的腹瀉。內(nèi)毒素由腸壁排入腸內(nèi)，對腸管局部有致敏作用，因而引起局部炎癥或加重局部炎癥[4]。其機理主要是由于內(nèi)毒素可以直接活化并損傷血管內(nèi)皮細胞，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞骨架蛋白收縮、解聚或重組，尤其是肌動蛋白Factin微絲重組，致密周圍束消失，應(yīng)力纖維形成，細胞形態(tài)改變，細胞與細胞及細胞與基底膜間的黏附連接松解，細胞間隙形成，通透性增加，血中有形成分滲出，故形成以滲出、水腫為特征的急性炎癥反應(yīng)[5,6]。

4.2 本試驗研究結(jié)果表明，白雞屎藤揮發(fā)油具有一定的促生長作用，并且對患病雛雞體重恢復(fù)也具有促進作用，這種增重作用可能與雞屎藤揮發(fā)油的健胃作用和胃蛋白活性提升作用有關(guān)[7]，當然也可能與雞屎藤揮發(fā)油主要藥理活性成分——丁香酚的健胃作用[8]、芳樟醇等的鎮(zhèn)靜作用[9]有關(guān)。其次，白雞屎藤揮發(fā)油在防治雛雞腸炎沙門氏菌感染過程中表現(xiàn)出一定的治療作用，可以降低雛雞的發(fā)病率和死亡率，使發(fā)病率和死亡率遠遠低于80%和50%[1，10，11]。白雞屎藤揮發(fā)油可以促進患病雛雞恢復(fù)，并且配合預(yù)防用藥和治療用藥，可以大幅度提高白雞屎藤揮發(fā)油治療雛雞腸炎沙門氏菌病的顯效率。其機理可能是通過白雞屎藤揮發(fā)油的抗菌作用來實現(xiàn)的，其抗菌作用與其揮發(fā)油成分丁香酚[9，12]、水楊酸甲酯[13，14]、芳香醇[5]等有關(guān)。

4.3 綜合各器官和組織病理變化分析發(fā)現(xiàn)，雛雞在感染腸炎沙門氏菌早期以炎癥變化為主，表現(xiàn)為染色變淺，細胞腫脹，臟器和組織脹大或增厚，隨著病情的發(fā)展則出現(xiàn)很明顯的出血反應(yīng)。進一步病理剖解發(fā)現(xiàn)，感染腸炎沙門氏菌后，雛雞在感染初期就表現(xiàn)胸腺、脾臟、法氏囊腫脹和小腸炎癥，表明腸炎沙門氏菌可直接作用于小腸引起小腸黏膜及肌層細胞腫脹，并隨著細胞的擴散而侵襲胸腺、脾臟、法氏囊等免疫器官，引起這些器官出現(xiàn)水腫病癥。白雞屎藤揮發(fā)油預(yù)防作用可以減輕腸炎沙門氏菌的損傷作用或延緩腸炎沙門氏菌對機體的損傷作用，白雞屎藤揮發(fā)油的治療作用則可減輕患雞臨床癥狀和病理損傷，甚至恢復(fù)正常。其原因和病理學(xué)機制主要可以從3個方面來分析：首先，從臨床剖檢結(jié)果可知，白雞屎藤揮發(fā)油對雛雞免疫器官具有增重作用，從形態(tài)學(xué)的角度說明了白雞屎藤揮發(fā)油可以增強雛雞的抵抗力和抗病力，從而表現(xiàn)出抗損傷作用或延緩腸炎沙門氏菌對雛雞的損傷，這與魏玉等的報道結(jié)果一致[16]。其次，白雞屎藤揮發(fā)油對腸炎沙門氏菌病的治療作用可能與其抗炎作用密切相關(guān)[7]。這種抗炎作用可以緩減腸炎沙門氏菌感染過程中的各種損傷，甚至修復(fù)由于各種炎癥及炎癥產(chǎn)物對機體的損傷，從而減少了各種炎癥產(chǎn)物對機體的進一步損傷和刺激作用，為患雞的恢復(fù)創(chuàng)造了條件。第三，白雞屎藤揮發(fā)油可以用于雛雞腸炎沙門氏菌病的治療，與其揮發(fā)油所含的藥理活性成分有關(guān)。如：樟腦是雞屎藤揮發(fā)油的主要成分之一，可從一切用藥部位吸收，吸收后直接興奮延腦中樞，可使呼吸增強，血壓回升，并且樟腦在體內(nèi)代謝過程中生成的氧化樟腦有強心作用，可直接興奮心肌，加強心肌收縮力，具保護心臟功能，從而促進炎性產(chǎn)物和內(nèi)毒素的排出，減輕炎性產(chǎn)物和內(nèi)毒素對腸黏膜的刺激，消除組織由于內(nèi)毒素和炎性產(chǎn)物的刺激所導(dǎo)致的水腫，控制炎癥的發(fā)展[9，17]。

總之，白雞屎藤揮發(fā)油除具有一定的促生長作用外，還對腸炎沙門氏菌病具有較為顯著的防治作用，可以降低雛雞的發(fā)病率和死亡率，促進患病雛雞恢復(fù)。

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The Effects of Volatile Oil of White Paederia Scandens Against Salmonella Enteritidis in Broilers

Wu Qiang, Duan Junhong, Yan Fan, Luo Jie

(Tongren Polytechnic College, Tongren Guizhou 554300，China)

420 7th age of San-Huang broilers were divided into A，B，C，D，E，F(xiàn) groups, and prevention given intranasally on A，B，C groups at 1 g/kg body weight. At 12-day-old, A, B, D and E groups were treated orally with Salmonella Enteritidis for modeling , and A and D groups were treated intranasally at 1 g/kg body weight after 24 h . Meanwhile, Pathological changes observed at 7 d, 0, 6, 12 , 24, 48, 96 and 120 h in survival broilers, and the rate of weight gain, morbidity, mortality, mortality and significant efficiency was calculated in all groups. The results show that volatile oil of White Paederia Scandens can improve weight gain, reduce pathological damage and lower mortality and mortality rate. The search concludes that the volatile oil of White Paederia Scandens has a growth-promoting effect, and has significant effect against Salmonella Enteritidis infection.

Volatile Oil of White Paederia Scandens； Salmonella Enteritidis； Prevention and Cure； Broiler

2015-08-11

貴州省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目(黔科合NY字[2012]3068號)

吳強(1979—), 男, 四川宜賓人, 副教授，博士，主要從事禽病與禽藥的研究。E-mail：wuqiangfirst@163.com

S853.7

A

1007-1474(2015)06-0010-06