舒心片薄層色譜鑒別及木香烴內(nèi)酯和去木香烴內(nèi)酯的含量測(cè)定

劉恬佳，雷明明，關(guān)曉清，于秀華*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春130117；2.解放軍第208醫(yī)院，長(zhǎng)春130061）

舒心片薄層色譜鑒別及木香烴內(nèi)酯和去木香烴內(nèi)酯的含量測(cè)定

劉恬佳1，雷明明1，關(guān)曉清2，于秀華1*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春130117；2.解放軍第208醫(yī)院，長(zhǎng)春130061）

目的制定舒心片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方案，控制制劑成品質(zhì)量。方法采用薄層色譜法對(duì)舒心片中的沉香、莪術(shù)等進(jìn)行鑒別。采用HPLC法測(cè)定木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯總含量。色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水（58∶42）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。結(jié)果TLC法對(duì)制劑中鑒別藥材專屬性強(qiáng)、斑點(diǎn)分離清晰、重現(xiàn)性好，陰性無(wú)干擾；HPLC測(cè)定木香烴內(nèi)酯在0.023 7～0.237 0μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，去氫木香烴內(nèi)酯在0.158 8～1.588 0μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率為96.27%，RSD為1.17%。結(jié)論TLC操作方便、分辨力高；HPLC法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可作為舒心片制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

舒心片；色譜法，薄層；色譜法，高效液相；去氫木香烴內(nèi)酯；木香烴內(nèi)酯

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，冠心病屬于心臟與營(yíng)養(yǎng)心臟之絡(luò)脈的疾病。由于年老體衰，臟腑功能虛損，陰陽(yáng)氣血失調(diào)，加上七情內(nèi)傷、飲食不節(jié)、寒冷刺激、勞逸失度等因素的影響，導(dǎo)致氣滯血瘀，胸陽(yáng)不振，痰濁內(nèi)生，使心脈痹阻而致病。因此，冠心病主要呈現(xiàn)本虛標(biāo)實(shí)的病理狀態(tài)。本虛責(zé)之于氣、血、陰、陽(yáng)，標(biāo)實(shí)主要涉及血瘀、氣滯、痰濁、寒凝、火熱等病理產(chǎn)物或因素［1］。舒心片中含有沉香、木香、莪術(shù)、佛手、當(dāng)歸、茯苓、香附、姜黃、枳實(shí)、麥芽、香櫞、三棱、丹參等二十幾味中藥。其功能主治為解肝郁，行氣滯，祛胸痹。用于氣滯血瘀癥冠心病，心絞痛，心律不齊，氣短腹脹，胸悶心悸。制劑中姜黃的主要成分姜黃素可以抑制黃嘌呤脫氫酶向氧化酶轉(zhuǎn)化，減少氧自由基的生成，提高超氧化物歧化酶的活性，清除氧化物，有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過(guò)氧化和穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用，對(duì)心肌缺血起保護(hù)作用［2-3］。丹參具有擴(kuò)張冠脈、增加冠脈血流量、防止心肌缺血和心肌梗死、改善微循環(huán)、保護(hù)心臟的作用［4-6］。當(dāng)歸可能通過(guò)促進(jìn)體內(nèi)NO的生成、抑制巨噬細(xì)胞在非梗死區(qū)的浸潤(rùn)和聚積，阻斷炎癥反應(yīng)和反應(yīng)性纖維化的發(fā)生，從而起到防治和逆轉(zhuǎn)左室重構(gòu)、改善心臟功能的作用［7］。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津），SPD-10AVP檢測(cè)器，C18柱（4 mm×25 cm，5μm），Lambda25型紫外分光光度計(jì)（美國(guó)PE分析儀器廠），CP225D型雙量程電子分析天平（德國(guó)Sartoris），AMW220D型電子分析天平（日本島津），JH2102電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），CAMAG型薄層色譜成像儀（瑞士CAMAG公司），101-1A型數(shù)顯式電熱恒溫干燥箱（上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），薄層板（青島海洋化工廠分廠）。

1.2 藥品沉香對(duì)照藥材（121222-201203），木香對(duì)照藥材（120921-201204），姜黃對(duì)照藥材（121188-200502），丹參對(duì)照藥材（120923-201113），莪術(shù)醇對(duì)照品（0185-9703），姜黃素對(duì)照品（110823-9802），木香烴內(nèi)酯對(duì)照品（111524-201107），去氫木香烴內(nèi)酯對(duì)照品（111525-201008），以上對(duì)照藥材及對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)藥品生物檢定所，所用試劑為分析純、色譜純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 沉香薄層色譜鑒別［8-9］沉香對(duì)照藥材0.5 g，加乙醚30 mL，超聲處理60 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加乙醚50 mL，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版1部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚（10∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.1.2 莪術(shù)薄層色譜鑒別［10-11］取莪術(shù)醇對(duì)照品，加石油醚（60～90℃）制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品10片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液陰性對(duì)照品溶液5μL、上述對(duì)照品溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（58∶42）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。理論板數(shù)按木香烴內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備取木香烴內(nèi)酯及去氫木香烴內(nèi)酯對(duì)照品，精密稱定，分別為11.85和15.88 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取木香烴內(nèi)酯對(duì)照品溶液1 mL、去氫木香烴內(nèi)酯對(duì)照品溶液5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得（每1 mL含木香烴內(nèi)酯11.85μg、去氫木香烴內(nèi)酯79.4μg）。

2.2.3 供試品溶液的制備［12-13］取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約5.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，放置過(guò)夜，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 專屬性考查為進(jìn)一步確定方法的可行性，取不含木香的陰性對(duì)照液，依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照液色譜在與對(duì)照品峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰，表明無(wú)干擾，方法可行。

2.2.5 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定根據(jù)對(duì)照品的紫外吸收?qǐng)D，最大吸收峰為225 nm，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。

2.2.6 系統(tǒng)適用性驗(yàn)證比較優(yōu)選后色譜條件的理論板數(shù)、分離度及保留時(shí)間等參數(shù)，確定含量測(cè)定的色譜條件，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.7 方法學(xué)考察

2.2.7.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取對(duì)照品溶液2.0、4.0、8.0、10.0、15.0、20.0μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。木香烴內(nèi)酯回歸方程：Y＝2.01×106X+2.53×103，r＝0.999 6，線性范圍：0.023 7～0.237 0μg。去氫木香烴內(nèi)酯回歸方程：Y＝1.33×106X+7.37×103，r＝0.999 6。線性范圍：0.158 8～1.588 0μg。

2.2.7.2 中間精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，于不同時(shí)間、不同儀器、不同人員分布測(cè)定，進(jìn)樣量10μL，結(jié)果RSD分別為0.57%、0.54%。試驗(yàn)結(jié)果表明：精密度較好。

2.2.7.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量10μL，依法測(cè)定，RSD分別為0.55%、0.21%。

2.2.7.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)取樣品，獨(dú)立依正文方法測(cè)定6次，結(jié)果每片中木香烴內(nèi)酯與去氫木香烴內(nèi)酯的總量分別為0.23、0.24、0.24、0.23、0.23、0.24 mg，RSD為2.47%。

2.2.7.5 回收率試驗(yàn)［14-16］取已知含量的樣品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約3.0 g，精密稱定，加入對(duì)照品溶液15 mL（濃度為18.4μg／mL與145.1μg／mL），按2.2.3方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明：回收率平均值為96.27%，RSD值為1.17%，證明此方法可行。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以藥典為依據(jù)，根據(jù)所含藥物成分極性的特點(diǎn)及各成分之間的相互作用來(lái)選擇合適的提取方法及良好的展開(kāi)劑。如沉香主要化學(xué)成分為揮發(fā)油，包括沉香醇、沉香螺醇、二氫沉香呋喃、去甲沉香呋喃酮等，因此采用乙醚浸泡的方法，也可提取揮發(fā)油。佛手的主要含有各種黃酮類成分，如橙皮苷、檸檬油素等。易溶于甲醇、乙醚等有機(jī)溶劑，故采用甲醇超聲后，乙醚提取的方法。莪術(shù)的薄層鑒別在中國(guó)藥典2010年版1部中以吉瑪酮為對(duì)照進(jìn)行鑒別，但因本處方中含有姜黃，來(lái)源相同，入藥部位不同，含有相同的成分姜黃素、吉瑪酮。所以本制劑中莪術(shù)以莪術(shù)醇為對(duì)照品來(lái)進(jìn)行薄層鑒別試驗(yàn)，采用石油醚提取的方法。

在薄層鑒別中，沉香、木香、莪術(shù)、佛手等的斑點(diǎn)分離清晰，陰性無(wú)干擾，重現(xiàn)性好。在薄層鑒別的方法學(xué)的考察中，對(duì)不同的溫度、濕度，以及不同的廠家、不同的點(diǎn)樣方式的情況下的展開(kāi)條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，所鑒別的成分的展開(kāi)條件不受溫度、濕度等影響，該方法可行，故以該標(biāo)準(zhǔn)可列入本制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

本制劑處方由于陳皮、青皮、枳殼、枳實(shí)等均含有相同的成分，專屬性差。木香在處方中粉末入藥，為中國(guó)藥典1部收載品種，采用高效液相色譜法測(cè)定木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯的總和，方法成熟，故我們采用高效液相色譜法測(cè)定木香中木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯總和的含量，以控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

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Shuxin Tablets by TLC and RP-HPLC of quantitative determination of costunolide and dehydrocostuslactone

LIU Tianjia1，LEI Mingming1，GUAN Xiaoqing2，YU Xiuhua1*
（1.Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China；2.NO.208 Hospital of Chinese People's Liberation Army，Changchun 130061，China）

ObjectiveTo draft the quality standard of Shuxin Tablets.MethodsTo study the Aucklandiae Radix and Curcumae Rhizoma by TLC；To establish a RP-HPLC method for the determination of costunolide and Dehydrocostuslactone in Shuxin Tablets.The chromatographic column was C18，the mobile phase was Acetonitrile-water（58：42）at a flow velocity of 1.0 mL／min，and the detection wave length was 225 nm.ResultsThe linear concentration range of costunolide was within 0.023 7μg～0.237 0μg，Dehydrocostuslactone was within 0.158 8μg～1.588 0μg；The average recovery rate was 96.27%（RSD＝1.17%）.ConclusionTLC and HPLC procedures are simple，rapid and accurate，and they can be used for the quality control of Shuxin Tablets.

Shuxin Tablets；TLC；RP-HPLC；；dehydrocostuslactone；costunolide

R285.5

A

1003-5699（2015）09-0948-04

：張瑞彬

2015-07-28）

10.13463／j.cnki.jlzyy.2015.09.025

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2014020427yy）。

劉恬佳（1991-），女，碩士研究生，主要從事中藥學(xué)研究。

*通信作者：于秀華，電子信箱-zyh1955＠163.com