2014年豬場(chǎng)五種病毒性疾病的血清抗體檢測(cè)

丁文格朱秀高,葉　晶侯　博,蔣文明石勇耀程福生樊學(xué)坤陸　軍熊劍鋒唐萬(wàn)勇

（1武漢回盛生物科技有限公司，湖北武漢430042；2湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心，湖北武漢430042）

2014年豬場(chǎng)五種病毒性疾病的血清抗體檢測(cè)

丁文格1朱秀高1,2葉晶2侯博1,2蔣文明1石勇耀1程福生1樊學(xué)坤1陸軍1熊劍鋒1唐萬(wàn)勇1

（1武漢回盛生物科技有限公司，湖北武漢430042；2湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心，湖北武漢430042）

摘要：采用ELISA方法，對(duì)186個(gè)中小規(guī)模豬場(chǎng)的母豬群、保育豬群和育肥豬群的1 400余份血清檢測(cè)豬瘟、偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒2型和口蹄疫O型的抗體水平。結(jié)果表明，75%～87%的豬群抗體水平合格，種豬群抗體合格率高于保育豬群和育肥豬群。偽狂犬病野毒gE抗體陽(yáng)性率較高，母豬群中g(shù)E抗體陽(yáng)性樣品數(shù)占檢測(cè)樣品總數(shù)的40.93%，而母豬群中陽(yáng)性場(chǎng)占總場(chǎng)數(shù)的89.74%。

關(guān)鍵詞：豬病毒性疾??；ELISA；抗體檢測(cè)

豬瘟、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒病和口蹄疫等5種病毒病是目前嚴(yán)重影響我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病。對(duì)豬群進(jìn)行這5種病毒病的抗體監(jiān)測(cè)，可以及時(shí)掌握豬群免疫抗體水平，了解免疫狀況或感染狀態(tài)，豬場(chǎng)可根據(jù)實(shí)際抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果建立科學(xué)、合理的免疫程序，這是疾病控制的基礎(chǔ)性工作。湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心豬病檢測(cè)所對(duì)湖北、湖南、山東、河南、海南等5個(gè)省份部分規(guī)?；i場(chǎng)送檢的1 400余份血清進(jìn)行了豬瘟、偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒病和口蹄疫抗體的檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果匯總和分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1送檢豬場(chǎng)及待檢血清樣品

來(lái)源于2014年我國(guó)湖北、河南、湖南、海南、山東等5個(gè)省份存欄規(guī)模為30～500頭母豬的中小型規(guī)模豬場(chǎng)。送檢豬場(chǎng)的免疫背景清楚，大多在送檢前已書面說(shuō)明。豬只經(jīng)耳靜脈或前腔靜脈采血，血樣樣品自然凝固，包裝后，經(jīng)冷鏈運(yùn)送至湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心。本文對(duì)其中不同批次送檢的共1 400余份血樣進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.1.2抗體檢測(cè)試劑盒

豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、豬偽狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、豬瘟抗體檢測(cè)ELISA試劑盒、豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)ELISA試劑盒、豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒抗體檢測(cè)ELISA試劑盒、豬口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)ELISA試劑盒，均為武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.2試驗(yàn)方法

試驗(yàn)方法均采用ELISA方法，按照ELISA檢測(cè)試劑盒的使用說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行操作，并根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書中的判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行陽(yáng)性和陰性的判斷。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

最后，應(yīng)用基于“三明治”SERS 特性的檢測(cè)方案開(kāi)展臨床血清樣本的檢測(cè).如圖8(d)所示，對(duì)不同稀釋比例的血清樣品分別進(jìn)行SERS光譜檢測(cè)，并由劑量響應(yīng)曲線(圖8(b))計(jì)算相應(yīng)的AFP濃度，結(jié)果列于表1中.同時(shí)，與采用CLIA方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，可以看出，基于“三明治”結(jié)構(gòu)SERS特性的免疫檢測(cè)方案與CLIA的檢測(cè)結(jié)果基本一致，并且具有更高的靈敏度.因此，基于PS@Ag免疫探針和Si@Ag免疫基底的SERS光譜檢測(cè)具有好的可靠性.

本文以送檢豬場(chǎng)為統(tǒng)計(jì)單元進(jìn)行數(shù)據(jù)匯總和分析，對(duì)母豬群、保育豬群和育肥豬群的檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。豬群抗體合格率按照農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》中的標(biāo)準(zhǔn)均設(shè)定為70%。

表1　豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

2　結(jié)果與分析

2.1豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

豬瘟抗體檢測(cè)樣品總數(shù)為1 333份，來(lái)自172個(gè)豬場(chǎng)（群），其總抗體陽(yáng)性率在70%以上的豬群數(shù)占84%（表1）。但不同豬群的抗體陽(yáng)性率有明顯區(qū)別，其中母豬群的陽(yáng)性率較高，而有30%的豬場(chǎng)保育豬群的豬瘟抗體陽(yáng)性率在70%以下，16%的豬場(chǎng)育肥豬群的豬瘟抗性陽(yáng)性率低于70%。結(jié)果表明，部分豬場(chǎng)保育豬群和育肥豬群的豬瘟免疫合格率不高，需要進(jìn)一步改進(jìn)豬瘟的免疫工作。

2.2偽狂犬抗體檢測(cè)結(jié)果

豬偽狂犬抗體檢測(cè)包括gB和gE抗體檢測(cè)，分別反映豬場(chǎng)免疫合格率和野毒感染比例，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

2.2.1偽狂犬gB抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.2偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)76個(gè)豬場(chǎng)（群）的655份血清的偽狂犬gE抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)（表3），在母豬群中g(shù)E陽(yáng)性樣品數(shù)占40.93%，而gE抗體呈陽(yáng)性的豬場(chǎng)比例為89.74%，保育豬群的gE抗體陽(yáng)性結(jié)果和陽(yáng)性豬場(chǎng)數(shù)均比母豬群的陽(yáng)性比例較低，育肥豬群陽(yáng)性率最低。由于這些豬場(chǎng)在送檢樣品時(shí)已經(jīng)說(shuō)明其最近一年使用的偽狂犬疫苗是gE基因缺失疫苗（Bartha K-61毒株），故檢測(cè)出的gE抗體被認(rèn)為是野毒抗體，結(jié)果說(shuō)明我國(guó)中小規(guī)模豬場(chǎng)母豬群野毒感染情況嚴(yán)重，應(yīng)該采取有力措施進(jìn)行野毒凈化。

2.3豬繁殖與呼吸障礙綜合征(藍(lán)耳?。┛贵w檢測(cè)結(jié)果

藍(lán)耳病抗體檢測(cè)樣品總數(shù)為1 464份，分別來(lái)自186個(gè)豬場(chǎng)（群）。其中，抗體陽(yáng)性率在100%～90%的豬群數(shù)占73.12%，其中母豬群最高，為90.53%，其次為育肥豬群，最后為保育豬群。而保育豬群抗性陽(yáng)性率低于70%的豬場(chǎng)數(shù)明顯高于其他豬群，結(jié)果詳見(jiàn)表4。

表2　豬偽狂犬gB抗體檢測(cè)結(jié)果

表3　豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)結(jié)果

豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)樣品總數(shù)為877份，分別來(lái)自116個(gè)豬場(chǎng)（群），其總抗體陽(yáng)性率在100%～90%的豬群數(shù)占76.72%，其中母豬群為88.14%，其次為保育豬群，最后為育肥豬群。而大約有20%的保育豬群的圓環(huán)病毒2型抗性陽(yáng)性率低于70%（表5），說(shuō)明仔豬的免疫有待進(jìn)一步增強(qiáng)。此外，有部分中小規(guī)模豬場(chǎng)未曾免疫豬圓環(huán)病毒疫苗，或未對(duì)商品豬進(jìn)行免疫，因此對(duì)圓環(huán)病毒疫苗抗體陽(yáng)性需要結(jié)合實(shí)際免疫情況進(jìn)行分析，如果未曾免疫而檢測(cè)到圓環(huán)病毒抗體，則說(shuō)明豬群中存在圓環(huán)病毒的感染。

表4　豬繁殖與呼吸障礙綜合征抗體檢測(cè)結(jié)果

表5　豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)結(jié)果

2.5豬口蹄疫O型抗體檢測(cè)結(jié)果

豬口蹄疫O型抗體檢測(cè)樣品總數(shù)為420份，分別來(lái)自57個(gè)豬場(chǎng)（群）。其中，抗體陽(yáng)性率在100%～90%的豬群數(shù)占70.18%，其中母豬群為100%，其次為保育豬群，為64.29%，最后為育肥豬群，為47.83%（表6）。而育肥豬群抗性陽(yáng)性率低于70%的豬場(chǎng)數(shù)明顯偏多，這與口蹄疫的實(shí)際發(fā)生情況較為吻合。目前豬群中發(fā)生的口蹄疫在大多數(shù)情況下是從育肥豬群開(kāi)始而逐步蔓延至整個(gè)豬場(chǎng)的。

表6　豬口蹄疫病毒O型抗體檢測(cè)結(jié)果

3　小結(jié)與討論

⑴本文利用ELISA的方法，對(duì)2014年部分中型規(guī)?；i場(chǎng)的5種重要病毒性疾病的血清抗體進(jìn)行了檢測(cè)，并以豬場(chǎng)（群）為統(tǒng)計(jì)單元進(jìn)行匯總分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，豬瘟、偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒病和口蹄疫的免疫合格率范圍在75%～87%之間，相應(yīng)則有13%～25%的豬場(chǎng)出現(xiàn)免疫失敗。這可能與近年來(lái)豬群免疫抑制性疾病增多、應(yīng)激或霉菌毒素等其他環(huán)境因素的影響相關(guān)，另外也與毒力變異株的出現(xiàn)、疫苗質(zhì)量不穩(wěn)定、免疫程序不合理、疫苗保存不當(dāng)?shù)瓤陀^因素有關(guān)。因此需要獸醫(yī)工作者在臨床工作中根據(jù)檢測(cè)結(jié)果以及豬場(chǎng)的實(shí)際情況采取適當(dāng)?shù)拇胧?，以提高免疫合格率?/p>

⑵對(duì)不同豬群的免疫合格率比較可見(jiàn)，保育豬群、生長(zhǎng)育肥豬群的免疫合格率普遍低于母豬群，這一方面可能和母豬經(jīng)反復(fù)加強(qiáng)免疫、免疫力較為堅(jiān)強(qiáng)有關(guān)；另一方面，也表明仔豬的免疫程序、免疫操作可能存在不合理因素，如母源抗體干擾、免疫抑制性因素在豬群存在影響免疫效果等，這需要進(jìn)一步摸索和調(diào)整仔豬的免疫程序。

⑶對(duì)偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，在中小規(guī)模豬場(chǎng)中，大部分豬場(chǎng)gE抗體陽(yáng)性，其中對(duì)母豬群的血清樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn)89.74%的豬場(chǎng)存在gE抗體陽(yáng)性，部分豬場(chǎng)送檢的母豬血清樣品100%呈現(xiàn)gE抗體陽(yáng)性，說(shuō)明我國(guó)豬偽狂犬野毒感染仍普遍存在，這對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展具有極大威脅。因此在中小規(guī)模豬場(chǎng)，應(yīng)該充分重視豬偽狂犬野毒感染的嚴(yán)重性和普遍性，應(yīng)采取選用優(yōu)質(zhì)的偽狂犬活疫苗、制定合理的免疫程序、加強(qiáng)生物安全等措施進(jìn)行綜合控制。同時(shí)，要加強(qiáng)豬偽狂犬野毒gE抗體陽(yáng)性率的檢測(cè)，每年定期檢測(cè)兩次，及時(shí)了解本場(chǎng)野毒感染情況，逐步淘汰帶毒豬只，建立健康種群。

⑷對(duì)于中小規(guī)模豬場(chǎng)來(lái)講，亟需提高抗體檢測(cè)的意識(shí)，切實(shí)加強(qiáng)豬群采樣、送檢和結(jié)果分析，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，及早進(jìn)行查漏補(bǔ)缺，才能真正做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，從而消除疾病風(fēng)險(xiǎn)，提升養(yǎng)豬的經(jīng)濟(jì)效益。

Gloria Solano Elida Bautista Thomas Molitor Joaquim Segalés Carlos Pijoan

中圖分類號(hào)：S858.28，S854.4+3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1673-4645(2015)08-0076-04

收稿日期：2015-06-17