首烏方對(duì)左旋多巴誘導(dǎo)異動(dòng)癥大鼠的干預(yù)作用及其機(jī)制

焦 ,劉洋,孫丹丹,王丹巧Δ,梁嶸

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心 北京市中醫(yī)藥防治重大疾病基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100700； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

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首烏方對(duì)左旋多巴誘導(dǎo)異動(dòng)癥大鼠的干預(yù)作用及其機(jī)制

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心 北京市中醫(yī)藥防治重大疾病基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100700； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

目的 探討首烏方對(duì)左旋多巴誘導(dǎo)的異動(dòng)癥(levodopa induced dyskinesia，LID)大鼠的干預(yù)作用及其機(jī)制。方法 32只雄性SPF級(jí)SD大鼠，隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組(sham operation，SO組)、異動(dòng)癥模型組(levodopa induced dyskinesia，LID組)、首烏方高劑量組(shouwufang-high dose，SWF-H組)、首烏方低劑量組(shouwufang-low dose，SWF-L組)，每組8只。單側(cè)雙位點(diǎn)注射6-羥基多巴胺造成PD模型后，灌胃給予多巴絲肼(30 mg/kg)22 d誘發(fā)LID，首烏方劑量組同時(shí)灌胃(SWF-H含生藥27 g/kg，SWF-L含生藥18 g/kg)。觀察各組LID發(fā)病率并進(jìn)行動(dòng)物AIM評(píng)分；清醒自由活動(dòng)狀態(tài)下腦內(nèi)紋狀體微透析、水楊酸捕獲羥自由基方法采樣，高效液相-電化學(xué)檢測(cè)動(dòng)態(tài)觀察病變靶器官細(xì)胞外液中羥自由基指標(biāo)(2,3-DHBA、2,5-DHBA)的濃度變化；檢測(cè)大鼠體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平的變化。結(jié)果 首烏方可明顯降低大鼠LID的發(fā)病率及AIM評(píng)分，降低紋狀體細(xì)胞外液2,3-DHBA及2,5-DHBA的濃度、并顯著降低血清內(nèi)MDA的水平。結(jié)論 首烏方可以改善大鼠LID的行為學(xué)指標(biāo)，有預(yù)防及干預(yù)LID的作用，其機(jī)制可能與減輕整體特別是病變靶器官的氧化應(yīng)激損傷有關(guān)。

左旋多巴誘導(dǎo)異動(dòng)癥；氧化應(yīng)激；首烏方；微透析

左旋多巴(levodopa，L-DOPA)是臨床上治療帕金森病(parkinson’s disease，PD)的“金標(biāo)準(zhǔn)”用藥，對(duì)大多數(shù)患者可取得顯著療效，然而長(zhǎng)期用藥后則會(huì)出現(xiàn)副作用或并發(fā)癥。L-DOPA誘導(dǎo)的異動(dòng)癥(levodopa-induced dyskinesia， LID)是其長(zhǎng)期治療過(guò)程中普遍出現(xiàn)的嚴(yán)重問(wèn)題。累計(jì)資料分析顯示L-DOPA治療4～6年后，約40%的患者會(huì)出現(xiàn)LID，治療9～15年后，發(fā)生率可上升到90%[1]，而且隨著疾病的加重和治療時(shí)間的延長(zhǎng)，LID的程度加重，發(fā)生頻率進(jìn)一步增加，因而限制了L-DOPA的長(zhǎng)期臨床應(yīng)用。

國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)于LID進(jìn)行了大量研究，其病理生理機(jī)制至今仍不十分明確[2-4]。研究表明PD是LID的發(fā)病基礎(chǔ)，PD的嚴(yán)重程度及治療時(shí)L-DOPA的脈沖樣刺激對(duì)LID發(fā)生發(fā)展有直接影響[5]。而不論在PD的進(jìn)展或LID的發(fā)病機(jī)制中，氧化應(yīng)激損傷均參與其中并發(fā)揮重要的作用[6-7]。

由于LID目前的治療方法有限，應(yīng)用長(zhǎng)效多巴胺(dopamine，DA)制劑、神經(jīng)保護(hù)劑、谷氨酸拮抗劑、抗精神病藥、立體定向蒼白球損毀術(shù)以及丘腦底核或蒼白球內(nèi)側(cè)部的腦深部電刺激術(shù)等，效果并不滿意且存在一定的副作用，因此，如何找到干預(yù)和治療LID的有效措施，是PD治療中急需解決的臨床問(wèn)題。

首烏方(Shouwufang，SWF)由首烏、鹿茸、天麻、鉤藤等中藥組成，補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨、息風(fēng)止顫。臨床研究表明，本方在配合多巴絲肼治療PD患者時(shí)，可以提高多巴絲肼的臨床療效，減少多巴絲肼的用量[8]。本課題組既往的實(shí)驗(yàn)研究顯示，SWF可提高PD大鼠紋狀體細(xì)胞外液DA遞質(zhì)的水平，減少外源性L-DOPA引起的血液、腦細(xì)胞外液藥物濃度的波動(dòng)[9]，提示了干預(yù)LID的可能性。因此，本研究擬在PD基礎(chǔ)上在LID大鼠模型，并采用水楊酸捕獲羥自由基的腦內(nèi)微透析技術(shù)手段，通過(guò)觀察SWF對(duì)其行為學(xué)指標(biāo)、活體靶器官細(xì)胞外液及整體氧化/抗氧化物質(zhì)水平的影響，探討SWF對(duì)LID的干預(yù)作用及其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性SD 大鼠，32只，體質(zhì)量200～250 g，SPF級(jí)，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào)：11400700022793。

1.1.2 藥品與試劑：多巴絲肼片(madopar，每片0.25 g，含L-DOPA 200mg與芐絲肼50 mg)購(gòu)自上海羅氏公司；阿樸嗎啡購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究所，批號(hào)100839；首烏方(何首烏20 g，鹿茸3 g，天麻10 g，鉤藤15 g，厚樸15 g等中藥組成)煎劑為本實(shí)驗(yàn)室自制，3次水煎液合并濃縮為生藥量3.6 g/mL。水楊酸鈉、6-羥基多巴胺(6-OHDA)、辛烷磺酸鈉、2，3-二羥基苯甲酸(2,3-DHBA)、2，5-二羥基苯甲酸(2,5-DHBA)均購(gòu)自Sigma公司，乙腈，乙酸，磷酸和甲醇購(gòu)自Fisher公司。6-OHDA和阿樸嗎啡分別溶解于生理鹽水中，避光保存。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)測(cè)試盒購(gòu)自南京建成科技有限公司。

1.1.3 儀器：微透析系統(tǒng)CMA/12腦部探針(透析膜長(zhǎng)4 mm)及探針套管、CMA/402微量泵、CMA/470低溫樣品自動(dòng)收集器，清醒動(dòng)物活動(dòng)裝置(瑞典CMA公司)。手術(shù)使用設(shè)備：大鼠腦立體定位儀STRONG8003、動(dòng)物體溫維持儀269001、顱鉆/90-102(深圳瑞沃德公司)。高效液相色譜檢測(cè)系統(tǒng)(德國(guó)Sykam S-2100)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物造模、給藥及微透析過(guò)程:6-OHDA制備PD大鼠模型[10-11]：大鼠腹腔注射10%水合氯醛(3.5 mL/kg)麻醉后，頭顱水平位固定在腦立體定位儀上，參照大鼠腦立體定位圖譜確定黑質(zhì)致密部(substantia nigra pars compacta，SNc)，中腦腹側(cè)被蓋部(ventral tegmental area，VTA)三維坐標(biāo)位置。SNc：A：-4.8 mm，R：+2.0 mm，V：-8.0 mm；VTA：A：-4.8 mm，R：+1.2 mm，V：-8.0 mm。每個(gè)位點(diǎn)注射6-OHDA 生理鹽水(含維C)8 μL(2 μg/μL)，SO組注射等量生理鹽水。

分組及給藥：PD大鼠隨機(jī)分為L(zhǎng)ID組(給予多巴絲肼30 mg/kg)，SWF-H組(多巴絲肼30 mg/kg+SWF 27 g/kg)，SWF-L組(多巴絲肼30 mg/kg + SWF 18 g/kg)，灌胃給藥每天1次，連續(xù)22d，SO組灌胃相應(yīng)體積的純凈水。每組8只大鼠。最后1次異常不自主運(yùn)動(dòng)(abnormal involuntary movement, AIM)評(píng)價(jià)后麻醉大鼠，于紋狀體內(nèi)(striatum：A：+0.2 mm，L：+3 mm，V：-7.5 mm)埋入探針套管，次日在大鼠清醒自由活動(dòng)狀態(tài)下插入腦探針，進(jìn)行微透析取樣。微透析過(guò)程：先以生理鹽水平衡1 h后換為5 mmol/L水楊酸鈉林格液以捕獲紋狀體細(xì)胞外液的羥自由基；以2 μL/min的速度灌流，每30 min收集1 管，取前3 管測(cè)定的數(shù)值均值作為基礎(chǔ)水平(0 min)，然后灌胃最后1次藥物或純凈水，并認(rèn)每30 min 收集1 管透析液直至240 min。微透析樣品采用高效液相-電化學(xué)檢測(cè)方法分析。探針在使用前測(cè)定體外回收率，按此折算透析液中各種檢測(cè)物質(zhì)的濃度。微透析結(jié)束后麻醉大鼠，取腹主動(dòng)脈血，4 ℃低溫過(guò)夜后離心取上清液。

1.2.2 行為學(xué)評(píng)價(jià)：6-OHDA造模術(shù)后21 d，腹腔注射0.5 mg/kg阿樸嗎啡，記錄1 h內(nèi)大鼠向健側(cè)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)，大于100圈每小時(shí)為PD模型制作成功。

LID的行為學(xué)評(píng)價(jià)采用AIM評(píng)分：分別就前肢及口面部不自主運(yùn)動(dòng)、軸性及旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行評(píng)定[12]，根據(jù)其嚴(yán)重程度劃分為5個(gè)等級(jí)(0～4分)，其中0分：無(wú)；1分：偶爾出現(xiàn)；2分：經(jīng)常出現(xiàn)；3分：持續(xù)存在，刺激使之停止；4分：持續(xù)存在，刺激也不能使之停止。每7 d評(píng)價(jià)1次，總計(jì)評(píng)價(jià)4次21 d。每次評(píng)價(jià)過(guò)程如下：口服多巴絲肼后每30 min記錄一次分?jǐn)?shù)，至給藥后120 min。AIM分?jǐn)?shù)為4個(gè)時(shí)間點(diǎn)評(píng)價(jià)分?jǐn)?shù)的總和，最高值為64分。

1.2.3 高效液相色譜-電化學(xué)(HPLC-ED)法測(cè)定2,3-DHBA，2,5-DHBA濃度。檢測(cè)方法參照本實(shí)驗(yàn)室以前的研究[13]。Sykam C18分析柱(2.1 mm×100 mm，3 μm)。Antec Decade ⅡSDC電化學(xué)檢測(cè)器。流動(dòng)相：乙二胺四乙酸二鈉(0.027 mmol/L)、辛烷磺酸鈉(0.74 mmol/L)、氯化鉀(2 mmol/L)、磷酸二氫鈉(100 mmol/L)、甲醇(15%)、乙睛(1%)、乙酸(0.05%)。流速0.2 mL/min，柱溫：30 ℃，工作電壓0.52 V，進(jìn)樣量20 μL。

1.2.4 SOD及MDA檢測(cè)：MDA測(cè)定利用硫代巴比妥酸比色法，SOD采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定。實(shí)驗(yàn)步驟按照南京建成試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 首烏方對(duì)LID大鼠行為學(xué)的影響 給SO組大鼠灌胃生理鹽水，無(wú)異常動(dòng)作發(fā)生；多巴絲肼反復(fù)用藥，誘發(fā)了PD大鼠出現(xiàn)異常不自主運(yùn)動(dòng)——LID：主要表現(xiàn)為軸性肌張力障礙，頸部和軀干上部向毀損對(duì)側(cè)扭動(dòng)，甚至不能保持平衡；毀損對(duì)側(cè)上肢或下肢異常不自主、無(wú)目的運(yùn)動(dòng)；對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)等。與SO組相比，LID組AIM評(píng)分在7、14、21 d顯著升高(P<0.05，P<0.01)； SWF-H組則在21 d顯著降低了這一指標(biāo)，僅為L(zhǎng)ID組的30%左右(P<0.01)，見(jiàn)表1。動(dòng)態(tài)觀察AIM評(píng)分>20的嚴(yán)重LID的發(fā)生率， LID組在21 d達(dá)到75.0%；而SWF-L組和SWF-H組分別為50.0%，12.5%，見(jiàn)表2。

表1 SWF對(duì)LID大鼠AIM評(píng)分的影響,分)Tab.

*P<0.05，**P<0.01，與SO組相比，compared with SO group；#P<0.05，與LID組相比，compared with LID group

表2 各組嚴(yán)重LID發(fā)生率(AIM評(píng)分>20，%)Tab.2 The incidence of severe LID(AIM score>20，%)

2.2 SWF對(duì)LID大鼠紋狀體細(xì)胞外液2,3-DHBA和2,5-DHBA濃度的影響 采用水楊酸捕獲法，使腦內(nèi)極不穩(wěn)定的羥自由基形成穩(wěn)定的2,3-DHBA和2,5-DHBA，通過(guò)HPLC-EDC方法檢測(cè)。結(jié)果可以看到0～240 min內(nèi)，LID組2,3-DHBA濃度一直處于較高水平，與SO組相比，有6個(gè)時(shí)間點(diǎn)其升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；SWF-L組和SWF-H組在觀察時(shí)間內(nèi)一直低于LID組，其中SWF-H組有1個(gè)時(shí)間點(diǎn)降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖1。

圖1 首烏方對(duì)LID大鼠紋狀體細(xì)胞外液2,3-DHBA的影響*P<0.05，**P<0.01，與SO組相比;##P<0.01，與LID組相比Fig.1 Effect of SWF on extracellular concentration of*P<0.05，**P<0.01，compared with SO group；##P<0.01，compared with LID group

LID與SWF 2組的2,5-DHBA濃度均升高。與SO組相比，LID組，在除240 min外其余各點(diǎn)均顯著升高(P<0.05，P<0.01)；SWF-L組在0～240 min內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)均高于SO組(P<0.05，P<0.01)；SWF-H組有4個(gè)時(shí)間點(diǎn)顯著高于SO組(P<0.05，P<0.01)，但與LID組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖2。

圖2 首烏方對(duì)LID大鼠紋狀體細(xì)胞外液2,5-DHBA濃度的影響 *P<0.05，**P<0.01，與 SO group相比較Fig.2 Effect of SWF on extracellular concentration of *P<0.05，**P<0.01，compared with SO group

2.3 SWF對(duì)LID模型大鼠血中SOD活力和MDA濃度的影響 LID組大鼠血中MDA濃度為(4.7±0.9)nmol/mL，明顯高于SO組(P<0.01)，與LID組比較SWF高、低組MDA水平顯著降低(P<0.01)。LID組、SWF-L組和SWF-H組的SOD活力分別為(280.8±13.0) U/mL，(291.1±64.1) U/mL及(251.2±9.1) U/mL；高于SO組的(239.1±14.1)U/mL，但各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖3。

圖3 首烏方對(duì)LID大鼠血中MDA濃度(A)和SOD活力(B)的影響**P<0.01，與SO組相比較；##P<0.01，與LID組相比較Fig.3 Effect of SWF on MDA concentration (A) and activity of**P<0.01，compared with SO group；##P<0.01，compared with LID group

3 討論

LID是L-DOPA治療PD過(guò)程中出現(xiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥，皮質(zhì)-基底神經(jīng)節(jié)-丘腦皮層環(huán)路是其發(fā)生的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，由于該環(huán)路受多種神經(jīng)元、神經(jīng)遞質(zhì)、受體的調(diào)控，機(jī)制異常復(fù)雜[14]。近年來(lái)，對(duì)于LID的突觸前機(jī)制、突觸后可塑性、GABA 能和谷氨酸能神經(jīng)元及非多巴胺能調(diào)節(jié)因子等機(jī)制研究報(bào)道較多，取得了新進(jìn)展[15-16]。而本研究從氧化應(yīng)激途徑探討在PD治療中與L-DOPA有協(xié)同作用的中藥SWF對(duì)LID的干預(yù)作用，為L(zhǎng)ID的防治提供新的思路。

多數(shù)研究表明，氧化應(yīng)激損傷參與PD的進(jìn)展并進(jìn)而參與LID的發(fā)生機(jī)制，基礎(chǔ)研究最常使用的6-OHDA造成的動(dòng)物模型即模擬了PD的氧化應(yīng)激損傷機(jī)制[17]。本研究應(yīng)用6-OHDA所致PD基礎(chǔ)上的LID大鼠模型，是在6-OHDA神經(jīng)毒性、氧化應(yīng)激損傷基礎(chǔ)上，附加L-DOPA反復(fù)波動(dòng)性刺激誘發(fā)的。模型在PD階段，黑質(zhì)、紋狀體的氧化/抗氧化功能已失平衡，過(guò)度產(chǎn)生的高活性及毒性的活性氧、羥自由基等，與細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸形成脂質(zhì)過(guò)氧化物，破壞了生物膜的結(jié)構(gòu)，改變了對(duì)離子的通透性、受體的功能等，生物酶活性喪失，線粒體、溶酶體等細(xì)胞器裂解，造成DA能神經(jīng)元損傷或死亡[18]。在此基礎(chǔ)上，外源性L-DOPA異常波動(dòng)性刺激，進(jìn)一步改變了基因表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及神經(jīng)元可塑性，使本已失衡的DA能環(huán)路功能更加異常。最近有研究甚至提出，L-DOPA長(zhǎng)時(shí)間給藥后加重PD患者DA神經(jīng)損傷的可能原因是其在代謝過(guò)程中產(chǎn)生內(nèi)源性6-OHDA[19]，因此L-DOPA自身代謝產(chǎn)生的活性氧和自由基等更加重了氧化應(yīng)激損傷，促進(jìn)PD的進(jìn)展及LID的發(fā)生[20]。因此，靶器官氧化應(yīng)激指標(biāo)的觀察，對(duì)于LID病理生理學(xué)和藥理學(xué)研究具有極其重要的意義。

羥自由基是氧自由基的一種，在研究中經(jīng)常被用于代表性觀測(cè)指標(biāo)。由于羥自由基在活體腦內(nèi)壽命極短，性質(zhì)活潑，產(chǎn)生后即在該部位造成神經(jīng)元損害并隨之迅速代謝，故難于直接測(cè)定，以往測(cè)定腦勻漿中羥自由基的方法也具有較大的局限性。本實(shí)驗(yàn)采用水楊酸捕獲羥自由基的微透析采樣法，使半衰期極短、直接檢測(cè)困難的羥自由基在活體內(nèi)被水楊酸捕獲而形成穩(wěn)定的2,3-DHBA和 2,5-DHBA，經(jīng)HPLC電化學(xué)方法檢測(cè)。該方法能夠反映LID疾病模型動(dòng)物在清醒、自由活動(dòng)狀態(tài)下病變靶組織細(xì)胞外液中羥自由基水平的動(dòng)態(tài)變化，使氧化應(yīng)激損傷的化學(xué)研究更真實(shí)客觀。

本實(shí)驗(yàn)中，LID組大鼠出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)、肌張力障礙等行為學(xué)癥狀，病變靶器官紋狀體細(xì)胞外液的羥自由基指標(biāo)2,3-DHBA和2,5-DHBA水平明顯升高，反映了局部氧化應(yīng)激損傷的嚴(yán)重程度。整體受自由基攻擊程度的氧化物指標(biāo)MDA水平在LID組異常增高，并反應(yīng)性地引起抗氧化物SOD水平升高。SOD在胞漿和線粒體中分別以Cu/ZnSOD及MnSOD的形式存在，使超氧自由基歧化為水，以對(duì)抗氧化損傷[21]。有報(bào)道：使用酶學(xué)與原位雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)PD患者黑質(zhì)部SOD水平增高[22]，認(rèn)為這種改變可能為代償性反應(yīng)，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，也提示在PD和LID的機(jī)制中，氧化與抗氧化水平動(dòng)態(tài)變化具有重要意義。

中藥SWF在本實(shí)驗(yàn)中顯示了可明顯減輕大鼠LID的發(fā)病率及AIM評(píng)分、降低紋狀體細(xì)胞外液2,3-DHBA及2,5-DHBA的濃度，并顯著降低血漿內(nèi)MDA水平的效果。提示SWF可能直接或通過(guò)減緩L-DOPA代謝而間接抑制靶器官細(xì)胞外液羥自由基指標(biāo)、調(diào)節(jié)整體氧化/抗氧化功能動(dòng)態(tài)平衡發(fā)揮抗氧化作用，減輕病變局部腦組織的氧化應(yīng)激損傷，改善失衡的DA能環(huán)路功能，從而干預(yù)了PD的進(jìn)展和LID的形成和維持機(jī)制，表現(xiàn)為模型動(dòng)物L(fēng)ID發(fā)病率降低和運(yùn)動(dòng)障礙程度減輕。

中醫(yī)學(xué)將PD、LID產(chǎn)生的震顫、舞蹈癥、手足徐動(dòng)癥等歸屬于顫證、震掉、痙病范疇，辨證多為肝腎陰虛、風(fēng)痰阻絡(luò)、肝郁血瘀、氣血兩虛等。SWF以入肝腎兩經(jīng)的首烏、鹿茸為主藥，補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨；輔以天麻、鉤藤平肝熄風(fēng)；佐以厚樸下氣消痰，使以川芎引藥上行入腦。諸藥合用，共奏補(bǔ)肝腎、益精血、祛風(fēng)止顫之效。因此，可以說(shuō)首烏方是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，切中PD、LID中醫(yī)病機(jī)的合理中藥組方。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示：首烏、鹿茸、天麻、鉤藤具有抑制血清、腦內(nèi)過(guò)氧化脂質(zhì)生成，或抑制腦內(nèi)單胺氧化酶-B、增強(qiáng)抗氧化能力的作用[23-26]。本課題組前期的研究也證實(shí)：SWF在6-OHDA所致的PD大鼠模型中，抑制L-DOPA引起的腦組織內(nèi)羥自由基升高[9]。進(jìn)而采用清醒自由活動(dòng)的PD模型大鼠腦內(nèi)和血液雙位點(diǎn)同步微透析-HPLC檢測(cè)技術(shù)，觀察到SWF不僅抑制PD模型大鼠紋狀體細(xì)胞外液羥自由基產(chǎn)生，尚可增加DA遞質(zhì)的濃度、平緩?fù)庠葱訪-DOPA投與產(chǎn)生的波動(dòng)，并升高L-DOPA的血藥濃度[9, 27]。這也為本方干預(yù)PD及LID的作用機(jī)制提供了更多的藥理學(xué)依據(jù)。

綜上所述，本研究采用了PD基礎(chǔ)上的LID大鼠模型及水楊酸捕獲羥自由基的腦內(nèi)微透析技術(shù)手段，通過(guò)觀察SWF對(duì)其行為學(xué)指標(biāo)、活體靶器官細(xì)胞外液及整體氧化/抗氧化物質(zhì)水平的影響，證明了氧化應(yīng)激損傷參與了LID的發(fā)生機(jī)制，SWF通過(guò)減輕整體特別是病變靶器官的氧化應(yīng)激損傷，改善LID大鼠行為學(xué)癥狀、減少了LID發(fā)病率。SWF抗氧化作用的分子機(jī)制和形態(tài)學(xué)研究尚待進(jìn)一步進(jìn)行。

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(編校：王冬梅)

Effect and mechanism of ShouwuFang on rats with levodopa-induced dyskinesia

JIAO Yue1,LIU Yang1,SUN Dan-dan1,WANGDan-qiao1Δ,LIANG Rong2Δ

(1.Experimental Research Center, China Academy of Chinese Medicine Science, Key Laboratory of Basic Research on TCM Prevention and Treatment of Major Diseases, Beijing 100700, China; 2.School of Basic Medical Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China)

ObjectiveTo investigate the effect of ShouwuFang (SWF) on levodopa-induced dyskinesia (LID) and its mechanism.Methods32 SD rats were randomized into 4 group: sham operation(SO) group, LID group, SWF low dose (SWF-L) group, and SWF high dose (SWF-H) group.Established the PD model by unilateral perfusion of 6-OHDA in two positions.The PD rats were administrated madopa (30 mg/kg), madopa (30 mg/kg) + SWF (27 g/kg), or madopa (30 mg/kg) + SWF (18 g/kg) for 22 days.Observed the incidence of LID and assessed the abnormal involuntary movement(AIM)scores in every group.Detected the dynamic change of hydroxyl free radicals indexes (concentration of 2,3-DHBA and 2,5-DHBA), captured by salicylic acid in the extracellular fluid of target tissue in free moving LID rats by brain microdialysis and HPLC-ED techniques; evaluated the changes of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) level in blood after microdialysis.ResultsSWF reduced the incidence of LID and AIM scores significantly, decreased the concentration of 2,3-DHBA and 2,5-DHBA in extracellular fluids of striatum; meanwhile significantly decreased the MDA level in the serum. ConclusionSWF can improve the behavior and had the effect of prevention and protection on LID rats.Its mechanism is connected with reduction of oxidative stress damages in organism and especially in the target organs.

levodopa-induced dyskinesia(LID);oxidative stress;ShouwuFang (SWF); microdialysis

國(guó)家自然科學(xué)基金(81274121)；中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院自主選題研究項(xiàng)目(ZZ2012010)

焦玥，女，博士在讀，研究方向：中藥藥理學(xué)，E-mail:jiaoyue_medicine@163.com；王丹巧，通訊作者，女，博士，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥理、中西醫(yī)結(jié)合老年醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，E-mail：dq_wang96@sohu.com; 梁嶸，共同通訊作者，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)診法的客觀化與規(guī)范化研究，E-mail：liangr@hotmail.com。

R332

A

1005-1678(2015)02-0001-05