泛素特異性蛋白酶抑制劑及其篩選方法

季飛洋，李紅蕊，陳瑋琳

(浙江大學醫(yī)學院 免疫學研究所，浙江 杭州 310058)

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泛素特異性蛋白酶抑制劑及其篩選方法

季飛洋，李紅蕊，陳瑋琳Δ

(浙江大學醫(yī)學院 免疫學研究所，浙江 杭州 310058)

泛素特異性蛋白酶(ubiquitin-specific protease, USP)抑制劑通過阻斷泛素特異性蛋白酶的去泛素化作用而調控靶蛋白的表達或活性，進而影響細胞的生命活動及機體抗炎、抗病毒、抗腫瘤作用。本文對已知的針對USP家族各成員的抑制劑以及目前主要的USP抑制劑篩選和鑒定方法進行了綜述。

泛素；去泛素化；泛素特異性蛋白酶；抑制劑；藥物篩選

泛素-蛋白酶體系統(ubiquitin proteasome system，UPS)通過26s蛋白酶體降解泛素標記的蛋白從而調控細胞周期、轉錄、以及細胞信號傳導在內的多種細胞生命活動。該調控過程由泛素化和去泛素化介導[1]。去泛素化是將泛素鏈從靶蛋白上水解下來的過程，而去泛素化酶是催化這一過程的關鍵分子。去泛素化酶(deubiquitinating enzyme，DUB)主要分為6個家族：泛素C 末端水解酶(ubiquitin C-terminal hydrolases，UCH)家族、泛素特異性蛋白酶(ubiquitin specific proteases, USP)家族、卵巢癌蛋白酶(ovarian tumor proteases, OTU)家族、MJD(Josephin domain)家族、JAMM(JAB1/MPN/Mov34 metalloenzyme)家族和單核細胞趨化蛋白誘導蛋白(monocyte chemotactic protein-induced protein, MCPIP)家族。研究最廣泛的USP家族和UCH家族，分別有80多個成員和4個成員[2-3]。自從bortezomib和carfilzomib 2個蛋白酶體抑制劑分別于2003年和2012年被美國FDA批準用于治療多發(fā)性骨髓瘤后，泛素-蛋白酶體系統成為一個熱門的抗癌藥物篩選靶點，但是由于藥物的特異性以及耐藥性問題，這2種藥物的治療效果并不理想[4-5]。因此，研究者將目光投向USP抑制劑，希望找到更高效、高特異性的USP抑制劑用于臨床的抗腫瘤、抗感染等治療。目前已經發(fā)現的USP抑制劑包括針對USP1、USP2、USP7/47、USP8、USP11、USP14的抑制劑以及一些非特異性的USP抑制劑。抑制劑的篩選和鑒定方法主要有：探針法、Ub-AMC(ub-7-amino-4-methylcoumarin)法、TR-FRET(time resolved fluorescence resonance energy transfer)法、Ub-PLA2(ubiquitin protein-phospholipase A2)法。但這些方法在價格、篩選速度和篩選范圍上或多或少存在一些缺陷，尋找一種理想的篩選方法對USP抑制劑篩選意義重大。

1 USP抑制劑

1.1 USP1抑制劑 USP1抑制劑主要有N-芐基-2-苯基嘧啶-4-胺的衍生物ML323、Pimozide、GW7647和C527，見表1。它們在DNA的損傷修復以及抗腫瘤方面具有明確的調控作用。USP1相關因子1(USP1-associated factor 1，UAF1)是一個分子量為80 kDa的蛋白，可以與 USP1形成復合體USP1/UAF1，并提高USP1的活性。據報道[6-7]，ML323、哌咪清(Pimozide)、GW7647均為非競爭性抑制劑，特意性靶向USP1/UAF1復合體中的USP1，而對單體的USP1抑制效果不顯著，如ML323對復合體的抑制能力超過單體2000倍。ML323是目前已知性能最優(yōu)的USP1抑制劑，是由定量高通量篩選(quantitative high throughput screening，qHTS)出的N-(噻吩-2-亞甲基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)喹唑啉-4-胺經過藥物優(yōu)化后獲得，具有高效能，高特異性及可逆性[6]。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和范可尼貧血互補群D2(fanconi anemia complementation group D2，FANCD2)在DNA跨損傷合成和DNA修復中起著重要的作用[6]。Liang等[6]發(fā)現ML323通過抑制PCNA和 FANCD2的去泛素化從而增強順鉑對非小細胞肺癌和骨肉瘤的細胞毒性，并抑制同源重組和姐妹染色單體交換。

表1 USP1抑制劑Tab.1 USP1 inhibitors

C527的特異性不及ML323。DNA結合抑制子1(inhibitor of DNA-binding-1，ID1)可促進腫瘤細胞增殖，USP1通過催化ID1的去泛素化，減少了ID1蛋白酶體途徑的降解。Mistry等[8]發(fā)現C527通過抑制USP1，促進ID1降解, 對一些白血病細胞系產生細胞毒性。C527的衍生物SJB2-043、SJB2-109和SJB3-019A 也是USP1抑制劑，其中SJB3-019A的抑制效能與ML323相近[7-8]。Pimozide和GW7647的特異性尚可，除此之外一些抑制效能較高的抑制劑如三氟噻噸(flupenthixol)、三氟啦嗪(trifluoperazine)、咖馬林(rottlerin)的特異性并不理想[9]。

1.2 USP7/47抑制劑 USP7是DUB系統的一個重要腫瘤靶點，而進化生物學揭示USP47是DUB家族中與USP7最緊密相關的分子，故USP47也是一個腫瘤靶點，且多種USP7抑制劑對USP47亦具有抑制作用[10]。Parsons等[11]發(fā)現USP47通過調控DNA聚合酶β的去泛素化來調控DNA堿基切除修復。USP7/47抑制劑，見表2。主要有HBX 41108、HBX 19818、HBX 28258、P5091、P22077、P45204等。

HBX 41108是高效的USP7反競爭性抑制劑，并且對USP47也產生抑制作用，但特異性不強。研究發(fā)現其對組織蛋白酶B、組織蛋白酶L、組織蛋白酶S、UCH-L1的抑制性較顯著(IC50>1 μmol/L)，同時對USP5和USP8也有一定的抑制作用。HBX 41108通過抑制USP7活性來穩(wěn)定p53蛋白，在p53野生型癌細胞中誘導p53依賴的細胞凋亡[12]。

HBX 19818和HBX 28258的特異性較好，其對USP7的抑制能力是對USP2、USP5、USP8、USP20等抑制效果的30倍(IC50>200 μmol/L)以上。Reverdy等[13]證實這2種抑制劑通過抑制USP7的去泛素化而促進鼠雙微體基因2蛋白(murine doubleminute 2，MDM2)的降解，從而使大腸癌細胞周期被阻斷在G1期。

P5091對USP7的抑制具有特異性，其對USP2、USP8 等DUB活性的影響很小[14]。由P5091優(yōu)化得到的衍生物compound14則表現出更強的抑制性和特異性。compound14對細胞凋亡相關的半胱天冬酶3(caspase 3)，參與肌纖維降解的鈣蛋白酶1(calpain 1)，UPS系統的20s proteasome均無抑制作用。此外compound14針對USP家族的其他分子(USP2、USP5、USP8、USP21、USP28)的IC50值均大于31.6 μmol/L[15]。

P22077、P45204也具有USP7抑制能力，其中P22077是 P5091的類似物[16-18]。人雙微體基因2蛋白 (human doubleminute 2，HDM2) 作為E3泛素連接酶，通過介導p53的泛素化抑制腫瘤細胞凋亡。但HDM2極其不穩(wěn)定，需要依賴USP7的去泛素化來抑制自身的降解。Fan等[19]發(fā)現P22077通過抑制USP7的去泛素化，誘導HDM2降解來穩(wěn)定p53蛋白，從而促進擁有完整USP7-HDM2-p53軸的神經母細胞瘤凋亡。除此之外，P22077顯著增強阿霉素和依托泊苷對神經母細胞瘤的細胞毒性。

除了人工化合物外，天然藥物中也發(fā)現了USP7抑制劑。Michitaka等[20]從700多種海洋無脊椎動物提取液中篩選得到的吡咯生物堿Spongiacidin C表現出較強的USP7抑制活性。在特異性方面，Spongiacidin C對 USP2、USP8和 SENP1均無抑制，但對USP21有一定的抑制作用(IC50=16.6 μmol/L)。

表2 USP7/47抑制劑Tab.2 USP7/47 inhibitors

1.3 USP2抑制劑 國內研究者用Ub-PLA2法從天然化合物中篩選出USP2抑制劑紫菀酮(見圖1)，揭示紫菀酮通過抑制USP2的底物Cyclin D1去泛素化，促進Cyclin D1降解從而抑制腫瘤細胞增殖。該研究團隊還確定了紫菀酮與USP2之間最理想的結合模式[21]。雖然紫菀酮對USP2的抑制效能較低，但為后續(xù)的USP2抑制劑發(fā)展提供了先導化合物，提示從天然化合物中篩選獲得USP抑制劑的可行性。

圖1 紫菀酮結構圖Fig.1 The structure of shionone

1.4 USP8抑制劑 Hybrigenics公司在2007年篩選出了USP8的抑制劑HBX90397、HBX90659[16,22]。此后，2010年Matteo等[23]通過研究USP7和USP8的抑制劑發(fā)現compound(5k、22b、22c、22d、22e、22f)有很強的USP8抑制活性(IC50值均小于1 μmol/L)，且遠大于對USP7的抑制活性(其中22b-f的IC50均大于100 μmol/L)，但這6種抑制劑對USP家族其他成員的抑制活性尚未確定。

1.5 USP11抑制劑 USP11與DNA損傷修復蛋白BRCA2(breast cancer 2)相互作用，在DNA雙鏈斷裂修復中起重要作用，促進癌細胞的存活。Richard等[24]從美國食品與藥品管理局提供的2000多種化合物中篩選出6種USP11抑制劑，并發(fā)現6種藥物中的Mitoxantrone(見圖2)。能明顯遏制胰腺導管腺癌細胞的存活，但他們未檢測這6種USP11抑制劑的特異性。

圖2 Mitoxantrone結構圖Fig.2 The structure of Mitoxantrone

1.6 USP14抑制劑 IU1(1-[1-(4-fluorophenyl)-2,5-dimethylpyrrol-3-yl]-2-pyrrolidin-1-ylethanone)，見圖3。它是目前已知的效果最顯著的USP14抑制劑，特異性強，對USP2、USP7等8種DUB均無抑制活性[25]。USP14能抑制蛋白酶體的活性，從而降低泛素化蛋白的降解，多種病毒在進入細胞后通過抑制細胞蛋白酶體的活性保護自身蛋白不被降解。Dilip等[26]發(fā)現IU1通過促進蛋白酶體活性來抑制登革熱病毒復制。Chen等[27]發(fā)現另一種USP14抑制劑Auranofin通過選擇性抑制USP14和UCHL5從而對伊馬替尼耐藥性的慢性粒細胞白血病有治療效果。

圖3 IU1結構圖Fig.3 The structure of IU1

1.7 非選擇性USP抑制劑 Curcusone D(見圖4)能夠抑制USP5、USP7、USP8、USP13、USP14、USP15、USP22, 但是對UCH-L1、UCH-L3、UCH-37 活性無影響。Cao等[28]發(fā)現其能與硼替佐米協同作用治療多發(fā)性骨髓瘤。

查耳酮衍生物AM146、RA-9 和RA-14均表現出對UCHL1、UCH-L3、USP2、USP5、USP8的直接抑制，但是對USP7、USP14等的活性無明顯影響。Issaenko等[29]研究發(fā)現這3種化合物可以通過影響蛋白質泛素化過程，上調P53、P27和P16水平來抑制腫瘤細胞增殖。

PR619(見圖4)對DUBs中的USP2、USP4、USP5、USP7、USP8等都有可逆的抑制作用[17-18]。Veronika等[30]發(fā)現PR619通過抑制去泛素化酶的活性對微管網絡產生調控作用并阻止蛋白質堆積從而改善神經退行性疾病。

WP1130(見圖4)的特異性較差，對USP5、USP9X、UCH-L5等都有抑制作用[16]。

圖4 非選擇性USP抑制劑結構圖Fig.4 The structure of nonselective USP inhibitors

2 USP抑制劑篩選及鑒定方法

2.1 探針法 探針法利用細胞自身產生的DUB分子對泛素鏈的識別來篩選和鑒定抑制劑。該方法首先將細胞與備選抑制劑共孵育，之后將細胞抽提物與HA-Ub探針共孵育，通過免疫共沉淀收集與HA-Ub探針結合的有活性的DUB分子，最后通過凝膠電泳或質譜定性定量活性DUB分子。該方法的優(yōu)點是不需要購買眾多的DUB試劑便能篩選全DUBs的抑制劑，且接近細胞生理狀態(tài)；缺點是費時費力，所以目前并不推薦用于篩選USP抑制劑，而主要用于對已有USP抑制劑的特異性鑒定[17]。

2.2 Ub-AMC法 Ub-AMC法是目前最適合大規(guī)模USP抑制劑篩選的方法， 大部分USP抑制劑都由該方法篩選獲得。熒光底物AMC與泛素鏈結合不發(fā)射熒光，當USP將熒光底物AMC從泛素鏈上切割下來后，AMC發(fā)射熒光，通過檢測熒光強度分析USP的抑制程度。不同USP分子的熒光底物不同，目前商品化的熒光底物有USP7的Ub-EKL、USP2的IQF K4804、USP8和USP21的Ub-Rh110等。Ub-AMC法的優(yōu)勢是對UCH家族的4種去泛素化酶同樣敏感，單次檢測費用低，且已商品化。其主要缺點是激發(fā)波長在340nm的紫外區(qū)，不是一個較好的藥物篩選波長，且目前很多USP分子還未有對應底物。

2.3 TR-FRET法 TR-FRET法利用熒光能量共振轉移的原理，泛素鏈的N末端接上YFP，C末端接上terbium標記的半胱氨酸殘基，USP分子將泛素鏈C末端的半胱氨酸殘基切除后熒光信號強度降低。TR-FRET法的優(yōu)點是對UCH家族的4種去泛素化酶同樣敏感，其對于無關化合物的抗干擾能力強于Ub-AMC法。但目前為止TR-FRET法還沒有商品化的試劑盒，且很多USP分子還沒有對應底物。罕有報道使用該方法篩選USP抑制劑。

2.4 Ub-PLA2法 Ub-PLA2法的原理與Ub-AMC法類似，主要的不同之處在于PLA2從泛素鏈上切割下來后不直接發(fā)射熒光，而是作用于熒光底物并使其發(fā)射熒光。Nicholson B等[31]發(fā)現同一Ub-PLA2底物對USP2、USP5、USP7、USP8等均有良好的底物活性。該方法的優(yōu)點在于USP底物更接近生理狀態(tài)，信號強度和持續(xù)時間優(yōu)于Ub-AMC法，且激發(fā)波長不在紫外區(qū)，目前也有商品化的試劑盒。但Ub-PLA2法對UCH家族的4種去泛素化酶不敏感，且其單次檢測的價格高于Ub-AMC法。目前利用該方法篩選出的USP抑制劑有紫菀酮、P22077等[32]。

3 結語

USP作為抗腫瘤、抗病毒、抗感染等的良好藥物靶點是目前研究的熱點，但是以USP作為靶點的抑制劑由于效能太低，絕大多數抑制劑IC50在 μmol級別，特異性亦不夠理想，目前臨床上還沒有被正式批準的特異性USP抑制劑。USP抑制劑的篩選與研究正處于起步階段，需要更多的研究成本投入；目前的藥物篩選方法也需要進一步優(yōu)化，以便開發(fā)多種USP分子的合適底物。除此之外，組合化學及合成藥物的開發(fā)越來越困難，大規(guī)模的篩選所需設備等要求較高。因此，天然藥物的開發(fā)以及已有藥物的重新利用成為一個新的研究方向，且可用于篩選的天然藥物種類有限，無需大規(guī)模的高通量篩選，已有的Ub-PLA2試劑盒即可滿足要求，可被大多數實驗室接受。一種可行的天然藥物篩選方法是將探針法的細胞培養(yǎng)與Ub-PLA2法的底物熒光反應相結合。綜合考慮時間、靈敏度、特異性等進行新型USP抑制劑的有效篩選。

[1] Ciechanover A.Intracellular protein degradation: from a vague idea thru the lysosome and the ubiquitin-proteasome system and onto human diseases and drug targeting[J].Cell Death Differ, 2005, 12(9):1178-1190.

[2] Reyes-Turcu FE, Ventii KH, Wilkinson KD.Regulation and cellular roles of ubiquitin-specific deubiquitinating enzymes[J].Annu Rev Biochem, 2009(78):363-397.

[3] Fraile JM, Quesada V, Rodriguez D, et al.Deubiquitinases in cancer: new functions and therapeutic options[J].Oncogene,2012,31(19):2373-2388.

[4] Bedford L, Lowe J, Dick LR, et al.Ubiquitin-Like Protein Conjugation and the Ubiquitin-Proteasome System as Drug Targets[J].Nat Rev Drug Discov,2011,10(1):29-46.

[5] Cohen P, Tcherpakov M.Will the Ubiquitin System Furnish as Many Drug Targets as Protein Kinases?[J].Cell, 2010, 143(5):686-693.

[6] Liang Q, Dexheimer TS, Zhang P, et al.A Selective Usp1-Uaf1 Inhibitor Links Deubiquitination to DNA Damage Responses[J].Nat Chem Biol, 2014, 10(4):298-304.

[7] Dexheimer TS, Rosenthal AS, Luci DK, et al.Synthesis and Structure-Activity Relationship Studies of N-Benzyl-2-Phenylpyrimidin-4-Amine Derivatives as Potent Usp1/Uaf1 Deubiquitinase Inhibitors with Anticancer Activity against Nonsmall Cell Lung Cancer[J].J Med Chem, 2014, 57(19):8099-8110.

[8] Mistry H, Hsieh G, Buhrlage SJ, et al.Small-Molecule Inhibitors of Usp1 Target Id1 Degradation in Leukemic Cells[J].Mol Cancer Ther, 2013, 12(12):2651-2662.

[9] Chen J, Dexheimer TS, Ai Y, et al.Selective and Cell-Active Inhibitors of the Usp1/ Uaf1 Deubiquitinase Complex Reverse Cisplatin Resistance in Non-Small Cell Lung Cancer Cells[J].Chem Biol, 2011, 18(11):1390-1400.

[10] Catic A, Fiebiger E, Korbel GA, et al.Screen for Isg15-Crossreactive Deubiquitinases[J].PLoS One, 2007, 2(7):e679.

[11] Parsons JL, Dianova Ii, Khoronenkova SV, et al.Usp47 Is a Deubiquitylating Enzyme That Regulates Base Excision Repair by Controlling Steady-State Levels of DNA Polymerase Beta[J].Mol Cell, 2011, 41(5):609-615.

[12] Colland F, Formstecher E, Jacq X, et al.Small-Molecule Inhibitor of Usp7/Hausp Ubiquitin Protease Stabilizes and Activates P53 in Cells[J].Mol Cancer Ther, 2009, 8(8):2286-2295.

[13] Reverdy C, Conrath S, Lopez R, et al.Discovery of Specific Inhibitors of Human Usp7/Hausp Deubiquitinating Enzyme[J].Chem Biol, 2012, 19(4):467-477.

[14] Chauhan D, Tian Z, Nicholson B, et al.A Small Molecule Inhibitor of Ubiquitin-Specific Protease-7 Induces Apoptosis in Multiple Myeloma Cells and Overcomes Bortezomib Resistance[J].Cancer Cell, 2012, 22(3):345-358.

[15] Weinstock J, Wu J, Cao P, et al.Selective Dual Inhibitors of the Cancer-Related Deubiquitylating Proteases Usp7 and Usp47[J].ACS Med Chem Lett, 2012, 3(10):789-792.

[16] Edelmann MJ, Nicholson B, Kessler BM.Pharmacological Targets in the Ubiquitin System Offer New Ways of Treating Cancer, Neurodegenerative Disorders and Infectious Diseases[J].Expert Rev Mol Med, 2011(13):e35.

[17] Altun M, Kramer HB, Willems LI, et al.Activity-Based Chemical Proteomics Accelerates Inhibitor Development for Deubiquitylating Enzymes[J].Chem Biol, 2011, 18(11):1401-1412.

[18] Tian X, Isamiddinova NS, Peroutka RJ, et al.Characterization of Selective Ubiquitin and Ubiquitin-Like Protease Inhibitors Using a Fluorescence-Based Multiplex Assay Format[J].Assay Drug Dev Technol, 2011, 9(2):165-173.

[19] Fan YH, Cheng J, Vasudevan SA, et al.Usp7 Inhibitor P22077 Inhibits Neuroblastoma Growth Via Inducing P53-Mediated Apoptosis[J].Cell Death Dis, 2013(4):e867.

[20] Yamaguchi M, Miyazaki M, Kodrasov MP, et al.Spongiacidin C, a Pyrrole Alkaloid from the Marine Sponge Stylissa Massa, Functions as a Usp7 Inhibitor[J].Bioorg Med Chem Lett, 2013, 23(13):3884-3886.

[21] 謝文娟, 秦東軍, 張健，等.紫菀酮對去泛素化酶2活性的抑制作用[J].上海交通大學學報醫(yī)學版，2014，34(11)：1563-1567.

[22] Guedat P, Colland F.Patented Small Molecule Inhibitors in the Ubiquitin Proteasome System[J].BMC Biochem, 2007, 8 (Suppl 1):S14.

[23] Colombo M, Vallese S, Peretto I, et al.Synthesis and Biological Evaluation of 9-Oxo-9h-Indeno[1,2-B]Pyrazine-2,3-Dicarbonitrile Analogues as Potential Inhibitors of Deubiquitinating Enzymes[J].Chem Med Chem, 2010, 5(4):552-558.

[24] Burkhart RA, Peng Y, Norris ZA, et al.Mitoxantrone Targets Human Ubiquitin-Specific Peptidase 11 (Usp11) and Is a Potent Inhibitor of Pancreatic Cancer Cell Survival[J].Mol Cancer Res, 2013, 11(8):901-911.

[25] Lee BH, Lee MJ, Park S, et al.Enhancement of Proteasome Activity by a Small-Molecule Inhibitor of Usp14[J].Nature, 2010, 467(7312):179-184.

[26] Nag DK,Finley D.A Small-Molecule Inhibitor of Deubiquitinating Enzyme Usp14 Inhibits Dengue Virus Replication[J].Virus Res, 2012, 165(1):103-106.

[27] Chen X, Shi X, Wang X, et al.Novel Use of Old Drug:Anti-Rheumatic Agent Auranofin Overcomes Imatinib-Resistance of Chronic Myeloid Leukemia Cells[J].Cancer Cell Microenviron, 2014, 1(6):doi:10.14800/ccm.415.

[28] Cao MN, Zhou YB, Gao AH, et al.Curcusone D, a Novel Ubiquitin-Proteasome Pathway Inhibitor Via Ros-Induced Dub Inhibition, Is Synergistic with Bortezomib against Multiple Myeloma Cell Growth[J].Biochim Biophys Acta, 2014, 1840(6):2004-2013.

[29] Issaenko OA, Amerik AY.Chalcone-Based Small-Molecule Inhibitors Attenuate Malignant Phenotype Via Targeting Deubiquitinating Enzymes[J].Cell Cycle, 2012, 11(9):1804-1817.

[30] Seiberlich V, Goldbaum O, Zhukareva V, et al.The Small Molecule Inhibitor Pr-619 of Deubiquitinating Enzymes Affects the Microtubule Network and Causes Protein Aggregate Formation in Neural Cells:Implications for Neurodegenerative Diseases[J].Biochim Biophys Acta, 2012, 1823(11):2057-2068.

[31] Nicholson B, Leach CA, Goldenberg SJ, et al.Characterization of Ubiquitin and Ubiquitin-Like-Protein Isopeptidase Activities[J].Protein Sci, 2008, 17(6):1035-1043.

[32] Goldenberg SJ, Mcdermott JL, Butt TR, et al.Strategies for the Identification of Novel Inhibitors of Deubiquitinating Enzymes[J].Biochem Soc Trans, 2008, 36(Pt 5):828-832.

(編校：王冬梅)

USP inhibitors and screening methods

JI Fei-yang, LI Hong-rui, CHEN Wei-linΔ

(Institute of Immunology, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310058, China)

The ubiquitin-specific protease (USP) inhibitors influence many crucial cellular activities and some immune processes, such as anti-inflammatory, anti-infection and anti-tumor by silencing the functions of USP.The main USP inhibitors, which potency and specificity are underlined and current methods for detecting and identifying USP inhibitors are discussed of in this review.

ubiquitin; deubiquitination; ubiquitin-specific protease; inhibitor; drug screening

國家自然科學基金 (81322042)；中央高?；究蒲袠I(yè)務費專項資金(2014XZZX003-33)；國家理科基礎科學研究和教學人才培養(yǎng)基地研究基金(J1103603)

季飛洋，男，本科，研究方向：抗病毒感染免疫研究，E-mail：3110103638@zju.edu.cn；陳瑋琳，通訊作者，女，博士，教授，博士生導師，研究方向：感染免疫和腫瘤免疫研究，E-mail：cwl@zju.edu.cn。

TQ460.31；R914.2

A

1005-1678(2015)07-0152-05