奧曲肽聯(lián)合復(fù)合輔酶對(duì)化膿性闌尾炎患者Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg失衡影響

譚子方，吳文利，王健，景生虹

(1.寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 藥劑科，寧夏 銀川 750021；2.寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 普外科，寧夏 銀川 750021)

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奧曲肽聯(lián)合復(fù)合輔酶對(duì)化膿性闌尾炎患者Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg失衡影響

譚子方1，吳文利1，王健1，景生虹2Δ

(1.寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 藥劑科，寧夏 銀川 750021；2.寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 普外科，寧夏 銀川 750021)

目的 探討奧曲肽聯(lián)合復(fù)合輔酶對(duì)化膿性闌尾炎患者輔助性T細(xì)胞17/ CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg)失衡的影響。方法 選取寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院已確診為急性化膿性闌尾炎患者150例，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各75例。2組均行腹腔鏡闌尾炎切除術(shù)，術(shù)后實(shí)驗(yàn)組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用奧曲肽皮下注射，檢測治療前后Th17、CD4+CD25+Foxp3+Treg相關(guān)指標(biāo)，進(jìn)而對(duì)Th17/Treg平衡狀態(tài)進(jìn)行分析。結(jié)果 與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者Th17/Treg失衡狀態(tài)恢復(fù)較好，表現(xiàn)為：Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值下降(P<0.05)；相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3的mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05)；血清細(xì)胞相關(guān)因子(IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β)、C反應(yīng)蛋白(CRP)含量降低(P<0.05)；血清干擾素-γ(IFN-γ)含量升高(P<0.05)。結(jié)論 奧曲肽聯(lián)合復(fù)合輔酶可以糾正化膿性闌尾炎患者Th17/Treg的失衡狀態(tài)，提高患者的免疫功能，影響患者預(yù)后。

化膿性闌尾炎；奧曲肽；輔助性T細(xì)胞17；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

急性闌尾炎是外科常見病，居于急腹癥的首位，據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，每1000人中有1.17人患病，男性風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生率為8.6%，女性為6.7%，可發(fā)生于各個(gè)年齡段，發(fā)病與梗阻、感染、內(nèi)臟神經(jīng)功能反射有關(guān)[1]?；撔躁@尾炎屬炎癥反應(yīng)性疾病，其發(fā)病過程存在多種細(xì)胞因子及免疫細(xì)胞的參與，近年來研究發(fā)現(xiàn)[2]，化膿性闌尾炎患者體內(nèi)存在輔助性T細(xì)胞17(Th17)/CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)失衡，可導(dǎo)致免疫功能紊亂，影響患者預(yù)后。奧曲肽是一種生長抑素[3]，能夠抑制胃腸分泌，在闌尾炎術(shù)后一般用來預(yù)防早期炎性腸梗阻，有資料顯示[4]，生長抑素還具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞的平衡，影響免疫功能，但關(guān)于其對(duì)于Th1/Treg細(xì)胞平衡是否有作用，目前研究還較少。因此，本研究對(duì)化膿性闌尾炎患者用藥前后免疫相關(guān)指標(biāo)分析比較，探討奧曲肽聯(lián)合復(fù)合輔酶對(duì)化膿性闌尾炎患者Th17/Treg失衡的影響，為化膿性闌尾炎尋求更好的治療方案。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院2013年6月～2015年4月的確診為急性化膿性闌尾炎的患者150例。其中男性82例，女性68例，年齡20～71歲，平均年齡(45.34±7.16)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：診斷依據(jù)《2011年老年急性闌尾炎患者的臨床特征及外科診療方案》[5]，并經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為化膿性闌尾炎[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重的心、腦慢性疾??；②肝、腎功能衰竭；③合并惡性腫瘤；④凝血功能障礙，具有嚴(yán)重出血傾向；⑤合并妊娠；⑥有手術(shù)禁忌癥的患者。本研究獲得患者知情同意，并得到醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 分組及治療方法：將患者隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組75例，其中男40例，女35例，年齡20～71歲，平均年齡(45.56±7.11)歲；對(duì)照組75例，男41例，女34例，年齡20～70歲，平均年齡(44.74±7.56)歲；2組患者的年齡、性別、病程無明顯差異。所有患者均在全麻下行腹腔鏡闌尾切除術(shù)，術(shù)后所有患者常規(guī)禁食、補(bǔ)液，予氨甲環(huán)酸(成都倍特藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20030625)止血，頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉(蘇州東瑞制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20034146)、奧硝唑(南京圣和藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20030277)聯(lián)合抗感染，復(fù)合輔酶(北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H11020001)2支溶于2 mL 0.9%氯化鈉溶液，每天1次肌內(nèi)注射支持治療；實(shí)驗(yàn)組在對(duì)照組治療的基礎(chǔ)上予注射用醋酸奧曲肽(長春金賽藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20051860，生產(chǎn)批號(hào)：20050919)0.1 mg，每天3次皮下注射，連續(xù)7 d，對(duì)照組給予等量生理鹽水皮下注射。

1.2.2 血液指標(biāo)檢測：所有患者分別于入院時(shí)(治療前)和治療后，采取空腹靜脈血9 mL。其中3 mL血液加入肝素抗凝，分離淋巴細(xì)胞，采用流式細(xì)胞分析儀(BD FACSCanto II)分析Th17細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例及2者比值；另外3 mL血液加入肝素抗凝后，分離淋巴細(xì)胞，采用流式細(xì)胞法測定RORγt(Th17細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子)、Foxp3(Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子)水平；其余3 mL促凝后采用離心機(jī)離心，取上清液，采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(UniCel DxI 800，貝克曼庫爾特)，利用酶聯(lián)免疫雙抗夾心法(ELISA)檢測血清中白細(xì)胞介素-4(IL-4)、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、干擾素-γ(IFN-γ)、C反應(yīng)蛋白(CRP)含量。

2 結(jié)果

2.1 2組患者治療前后Th17、Treg細(xì)胞比例比較 治療后，2組患者的Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值均較治療前下降(P<0.05)。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值明顯下降(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者治療前后Th17、Treg細(xì)胞比例比較Tab.1 Comparison of Th17 and Treg ratios before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.2 2組患者治療前后RORγt、Foxp3因子水平比較 治療后，2組患者的RORγt、Foxp3因子水平均較治療前下降(P<0.05)。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組RORγt、Foxp3因子水平較低(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者治療前后RORγt、Foxp3因子水平比較Tab.2 Comparison of expression levels of RORγt and Foxp3 before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.3 2組患者治療前后血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量比較 治療后，2組患者血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量均較治療前明顯降低(P<0.05)。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量明顯較低(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者治療前后血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量比較Tab.3 Comparison of IL-6， IL-10， IL-17， IL-23 and TGF-β contents before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.4 2組患者治療前后血清IL-4、IFN-γ、CRP含量比較 治療后，2組患者血清IL-4、IFN-γ、CRP含量均較治療前明顯改善(P<0.05)。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組血清IL-4、CRP含量明顯較低，IFN-γ含量明顯較高(P<0.05)。見表4。

表4 2組患者治療前后血清IL-4、IFN-γ、CRP含量比較Tab.4 Comparison of IL-4， IFN-γ and CRP contents of before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group after treatment

3 討論

闌尾由于解剖結(jié)構(gòu)特殊，極易出現(xiàn)梗阻致粘膜受損，細(xì)菌趁機(jī)侵入形成化膿性闌尾炎，引起闌尾腫脹、滲出，甚至波及腹膜，病情進(jìn)展迅速，給患者帶來很大痛苦[6]。近年來研究發(fā)現(xiàn)[7]，闌尾炎癥狀的出現(xiàn)不僅與細(xì)菌感染有關(guān)，還與其激發(fā)的細(xì)胞免疫，T淋巴細(xì)胞功能紊亂關(guān)系密切。資料顯示[8]，Th17細(xì)胞是近年發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞亞型，屬于輔助型T細(xì)胞，其表型為CD4+RORγt+IL23R+CCR6+，能夠促進(jìn)IL-17、IL-21、IL-26等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，參與加強(qiáng)炎癥反應(yīng)過程，同時(shí)誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞聚集；CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)，起到抑制性免疫調(diào)節(jié)的作用，與Th17的作用相互拮抗，使炎癥反應(yīng)不至過度，感染狀況下，機(jī)體內(nèi)炎癥反應(yīng)與抗炎癥反應(yīng)同時(shí)存在，使得Th17/ Treg細(xì)胞失衡，免疫調(diào)節(jié)功能紊亂。奧曲肽為人工合成的八肽生長抑素類似物，目前多用于抑制胃腸道分泌，防止術(shù)后腸梗阻[9]，最新研究表明[10]，生長抑素類藥物還具有免疫調(diào)節(jié)作用，調(diào)節(jié)Th細(xì)胞分化，影響Th1、Th2細(xì)胞間的比例，在自身免疫性疾病中具有治療作用。

本研究結(jié)果顯示，治療后實(shí)驗(yàn)組Th17比例、Treg細(xì)胞比例、Th17/Treg 比值與對(duì)照組比較明顯下降(P<0.05)，證實(shí)了奧曲肽確實(shí)能夠改善Th17/Treg細(xì)胞失衡狀態(tài)。曾有研究報(bào)道顯示[11]，炎癥發(fā)生時(shí)，Th17水平升高，能夠促進(jìn)IL-17的分泌，IL-17具有加強(qiáng)炎癥反應(yīng)的作用，Treg細(xì)胞對(duì)Th17細(xì)胞具有抑制作用，能夠分泌IL-10因子來限制T細(xì)胞的活性，從而抑制過度炎癥反應(yīng)，因此炎癥發(fā)生時(shí)Th17,Treg細(xì)胞會(huì)代償性上調(diào)，而Th17上調(diào)更明顯，使得Th17/Treg比值升高。奧曲肽具有免疫調(diào)節(jié)作用，一方面影響T細(xì)胞向Th17、Treg分化，另一方面對(duì)T細(xì)胞炎癥因子的分泌也有抑制作用，能夠調(diào)節(jié)Th17/Treg，使免疫功能恢復(fù)，防止機(jī)體損傷[12]。

RORγt因子是促進(jìn)T細(xì)胞向Th17轉(zhuǎn)化的主要轉(zhuǎn)錄因子，F(xiàn)oxp3是Treg細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)錄因子[13]。本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組RORγt、Foxp3因子mRNA表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)，提示奧曲肽可以通過下調(diào)RORγt、Foxp3因子的表達(dá)，來控制Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的分化、增殖。

炎癥因子直接參與炎癥過程，本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量與實(shí)驗(yàn)組明顯較低(P<0.05)，提示奧曲肽能夠通過調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子的分泌抑制炎癥反應(yīng)。資料顯示[14]，IL-17是由Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞內(nèi)粘附因子，IL-23對(duì)于其功能維持有重要作用，IL-10是由Treg細(xì)胞分泌的，2者均為功能性細(xì)胞因子；IL-6具有促進(jìn)T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的作用，而TGF-β作用正好相反，可以促進(jìn)T細(xì)胞向TGF-β轉(zhuǎn)化，直接影響Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的平衡。

CRP與機(jī)體的免疫功能有關(guān)，能夠反映炎癥反應(yīng)的程度。IL-4可以誘導(dǎo)Th2細(xì)胞的生成、IFN-γ則可以由Th1分泌，2者通常用來反映Th1/Th2細(xì)胞漂移情況。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組血清IL-4、CRP含量明顯較低(P<0.05)，IFN-γ含量明顯較高(P<0.05)，提示奧曲肽可以降低炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度，抑制Th1/Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，促進(jìn)Th17細(xì)胞/Treg細(xì)胞平衡的恢復(fù)。

本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)急性化膿性闌尾炎患者Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞治療前后相關(guān)指標(biāo)的檢測結(jié)果進(jìn)行分析，證實(shí)了奧曲肽聯(lián)合復(fù)合輔酶可以糾正化膿性闌尾炎患者Th17細(xì)胞/ Treg細(xì)胞的失衡狀態(tài)，提高患者的免疫功能，影響患者預(yù)后。在下一步研究中，本課題組將對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)一步研究，為本實(shí)驗(yàn)所反映的現(xiàn)象做出全面論證和分析。

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(編校：王儼儼)

Effect of octreotide combined with compound coenzyme on Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg imbalance in patients with purulent appendicitis

TAN Zi-fang1, WU Wen-li1, WANG Jian1, JING sheng-hong2Δ

(1.Department of Pharmacy, The Ningxia Hui Autonomous Region People’s Hospital, Yinchuan 750021, China; 2.Department of General Surgery, The Ningxia Hui Autonomous Region People’s Hospital, Yinchuan 750021, China)

ObjectiveTo analyse the effect of octreotide combined with compound coenzyme on Th17/CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells imbalance in patients with purulent appendicitis.Methods150 patients with acute suppurative appendicitis were randomly divided into experimental group and control group, 75 cases in each group.Patients of two groups underwent appendicitis laparoscopic resection, then the control group were given conventional treatment and experimental group were given subcutaneous injection of octreotide on the basis of conventional treatment.Th17, CD4+CD25+Foxp3+regulation T cells (Treg), and Th17 /Treg balance were analyzed.ResultsCompared with control group, Th17/Treg imbalance of experimental group recovered better: the proportion of Th17, Treg, and Th17/Treg ratio decreased (P<0.05); the expression levels of related transcription factor, RORγt and Foxp3 mRNA decreased (P<0.05); serum cytokine (IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, IL-23 and TGF beta) and C-reactive protein (CRP) content decreased (P<0.05); serum interferon gamma (IFN-gamma) content increased (P<0.05).ConclusionOctreotide combined with compound coenzyme could correct Th17/Treg imbalance in suppurative appendicitis patients, improve the immune function of patients and affect the prognosis of patients.

suppurative appendicitis; octreotide; T helper 17 cell; regulatory T cell

譚子方，男，本科，副主任藥師，研究方向：藥品不良反應(yīng)及臨床藥學(xué)，E-mail：tanzifang930@163.com；景生虹，通訊作者，男，本科，主任醫(yī)師，研究方向：普外科，E-mail：nxjingshenghong@126.com。

R982

A

1005-1678(2015)07-0095-03