高效液相色譜法測(cè)定厄貝沙坦的含量

魏獻(xiàn)波，王美艷Δ，路婷婷

(1.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)北京海燕藥業(yè)有限公司 質(zhì)管部，北京 100026；2.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)北京海燕藥業(yè)有限公司 化學(xué)藥物研究所，北京 100026)

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高效液相色譜法測(cè)定厄貝沙坦的含量

魏獻(xiàn)波1，王美艷1Δ，路婷婷2

(1.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)北京海燕藥業(yè)有限公司 質(zhì)管部，北京 100026；2.揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)北京海燕藥業(yè)有限公司 化學(xué)藥物研究所，北京 100026)

目的 建立測(cè)定藥物中厄貝沙坦含量的高效液相色譜法。方法 采用Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以磷酸溶液(以三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.2)-乙腈(62:38)為流動(dòng)相，在柱溫35 ℃，流速約1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)245 nm的條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 厄貝沙坦的質(zhì)量濃度在0.04～0.40 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.99999)，平均加樣回收率為98.37%，RSD為0.7%(n=9)。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便、定量準(zhǔn)確、線性響應(yīng)范圍寬，重復(fù)性好，可作為藥物中厄貝沙坦含量測(cè)定的方法。

厄貝沙坦； 含量測(cè)定； 高效液相色譜法

高血壓是一種臨床綜合征，以體循環(huán)動(dòng)脈壓增高為主要表現(xiàn)，其本身可引起一系列的癥狀，長(zhǎng)期高血壓更可以影響重要臟器尤其是心、腦、腎的功能，最終導(dǎo)致臟器功能衰竭。高血壓可分為原發(fā)性高血壓(即高血壓病)和繼發(fā)性高血壓(即癥狀性高血壓)兩大類(lèi)。

近年來(lái)，我國(guó)高血壓患病人數(shù)每年在以驚人的速度上升，高血壓已成為中國(guó)迫切需要解決的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。厄貝沙坦片為血管緊張素Ⅱ受體抑制劑，能夠抑制血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ，特異性地拮抗AT1受體，通過(guò)選擇性地阻斷血管緊張素Ⅱ與AT1受體的結(jié)合，抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產(chǎn)生降壓作用，是治療原發(fā)性高血壓的一種常用藥物。張海波等[1]采用Meta分析系統(tǒng)評(píng)價(jià)厄貝沙坦與其它降壓藥物治療輕、中度高血壓的臨床療效和安全性差異，結(jié)果表明厄貝沙坦治療輕、中度高血壓在療效上與其它降壓藥物比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在安全性方面優(yōu)于其它降壓藥物。此外，臨床研究表明厄貝沙坦降壓穩(wěn)定，副作用小[2-3]。厄貝沙坦口服后能迅速吸收[4-5]，生物利用度在60%～80%之間，在體內(nèi)的分布容積廣，半衰期長(zhǎng)達(dá)11～15 h。在藥代動(dòng)力學(xué)研究中，藥效和劑量在10～600 mg范圍內(nèi)顯示出明顯線性相關(guān)性，降壓作用平穩(wěn)而持久，并可通過(guò)有效降低夜間血壓來(lái)恢復(fù)正常的血壓晝夜節(jié)律。厄貝沙坦可單獨(dú)使用，也可與其它抗高血壓藥物合用[6-8]。

本文建立了一種高效液相色譜法測(cè)定藥物中厄貝沙坦的含量，此法操作簡(jiǎn)便、定量準(zhǔn)確、線性響應(yīng)范圍較相關(guān)文獻(xiàn)[9-12]更寬，重復(fù)性好，藥品中的其他輔料不干擾測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試藥：Agilent 1100高效液相色譜儀；Seven Easy型pH計(jì)；XS 205型分析天平。厄貝沙坦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100607-201202)，雜質(zhì)I對(duì)照品(USP，批號(hào)為1347711)；科蘇(厄貝沙坦片)(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)北京海燕藥業(yè)有限公司，規(guī)格為每片75 mg，批號(hào)為14012511)；磷酸(GR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、甲醇、乙腈(色譜級(jí)，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司)、三乙胺(AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，水為超純水。

1.1.2 溶液的配制：精密稱(chēng)取厄貝沙坦對(duì)照品與雜質(zhì)I對(duì)照品各約10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為系統(tǒng)適用性溶液。

分別取厄貝沙坦對(duì)照品約10 mg、10 mg、20 mg，精密稱(chēng)定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對(duì)照品溶液1、對(duì)照品溶液2以及對(duì)照品溶液3。

取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于厄貝沙坦10 mg)，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使厄貝沙坦溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

按處方組成，制備不含厄貝沙坦原料的陰性模擬制劑，照上述供試品溶液的制備方法制備作為陰性空白溶液。

1.1.3 色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：245 nm；流動(dòng)相：磷酸溶液(取85%磷酸5.5 mL，加水至950 mL，以三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.2)-乙腈(62:38)，使用前需超聲脫氣。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取系統(tǒng)適用性溶液按1.1.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL，觀察出峰順序并計(jì)算分離度；理論板數(shù)按厄貝沙坦峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

1.2.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取供陰性空白溶液、對(duì)照品溶液1和供試品溶液，在1.1.3所述色譜條件下分別進(jìn)樣10 μL，觀察供試品溶液主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間是否一致，陰性空白溶液在厄貝沙坦位置有無(wú)干擾。

1.2.3 線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液3 1.0、4.0、5.0、6.0、10.0 mL，置10 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得線性系列溶液。將上述溶液按1.1.3項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積。

1.2.4 檢測(cè)限和定量限試驗(yàn)：取厄貝沙坦對(duì)照品溶液1不斷稀釋?zhuān)?dāng)厄貝沙坦峰高與基線噪音高度之比為10:1時(shí)，得本方法的定量限濃度，取定量限濃度下的溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積與保留時(shí)間；當(dāng)厄貝沙坦峰高與基線噪音高度之比為3:1時(shí)，得本方法的檢測(cè)限濃度，取檢測(cè)限濃度下的溶液連續(xù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積與保留時(shí)間。

1.2.5 精密度試驗(yàn)：取1.1.2項(xiàng)下的供試品溶液6份，每次進(jìn)樣10 μL，測(cè)定厄貝沙坦峰面積。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：將1.1.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液1放置0、4、8、12、28、24和36 h后，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。

1.2.7 加樣回收試驗(yàn)：按處方組成，制備不含厄貝沙坦原料的陰性模擬制劑，稱(chēng)取陰性模擬制劑約20 mg共9份，分別加入厄貝沙坦原料16 mg、20 mg、24 mg各3份，分別置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度分別為80%、100%和120%的回收率溶液。精密量取空白溶劑、對(duì)照品溶液(雙樣雙針)及回收率溶液(進(jìn)2針)各10 μL，按1.1.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

1.2.8 樣品含量測(cè)定：按1.1.2項(xiàng)下方法平行制備3批樣品的供試品溶液，在1.1.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品含量。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在高效液相色譜法中，理論塔板數(shù)是柱效的具體體現(xiàn)，它與分離度、重復(fù)性和拖尾因子一齊構(gòu)成高效液相色譜法系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)的指標(biāo)，直接對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不可忽視的影響[13]，本實(shí)驗(yàn)以厄貝沙坦峰與雜質(zhì)I峰的分離度以及厄貝沙坦峰的理論板數(shù)為指標(biāo)，考察了系統(tǒng)的適用性情況。由色譜圖1可知，出峰順序依次為雜質(zhì)I峰與厄貝沙坦峰，分離度大于2.0，理論板數(shù)按厄貝沙坦峰計(jì)算不低于2 000，符合品種分離項(xiàng)下要求。

圖1 系統(tǒng)適用性色譜圖Fig.1 Chromatogram of System Suitability

2.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)：專(zhuān)屬性體現(xiàn)了在其他成分可能存在的條件下，所用方法能夠正確檢測(cè)出被測(cè)物質(zhì)的特性，本實(shí)驗(yàn)以出峰時(shí)間為指標(biāo)，考察了陰性模擬制劑是否對(duì)測(cè)定產(chǎn)生影響。由色譜圖2可知，供試品溶液主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間一致，陰性空白溶液在厄貝沙坦位置無(wú)干擾。

圖2 專(zhuān)屬性色譜圖Fig.2 Chromatograms of System Specificity

2.3 線性關(guān)系考察：以對(duì)照品濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=22 779.397 65X，r=0.999 99(n=5)。

2.4 檢測(cè)限和定量限試驗(yàn)：本方法的定量限濃度為126.5 ng/mL，符合清潔限度要求；取定量限濃度下的溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，溶液峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差0.1%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為4.5%。檢測(cè)限濃度為37.9 ng/mL；取檢測(cè)限濃度下的溶液連續(xù)進(jìn)樣3次，溶液峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)為0.2%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為4.7%，符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 精密度試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)同一批次樣品的連續(xù)測(cè)定，考察了儀器的精密度。計(jì)算得厄貝沙坦峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：計(jì)算得各時(shí)間點(diǎn)色譜峰的峰面積RSD為0.8%(n=7)，表明所測(cè)溶液在36小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn)：按外標(biāo)法以峰面積測(cè)定樣品含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 厄貝沙坦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量測(cè)定 3批樣品中厄貝沙坦含量分別為標(biāo)示量的96.80%，97.50%，97.83%，平均含量為97.38%。

3 討論

高效液相色譜法具有分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣(樣品不需氣化，只需制成溶液即可)、色譜柱可反復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，在《中國(guó)藥典》中有多種中成藥的定量分析采用該法，已成為中藥制劑含量測(cè)定最常用的分析方法。

本文采用高效液相色譜法對(duì)科蘇(厄貝沙坦片)中厄貝沙坦的含量進(jìn)行了分析測(cè)定，方法的系統(tǒng)適用性符合要求；專(zhuān)屬性試驗(yàn)確認(rèn)陰性空白溶液在厄貝沙坦位置無(wú)干燥峰；檢測(cè)限37.9 ng/mL，定量限為126.5 ng/mL；重復(fù)性良好，線性范圍為0.04～0.40 mg/mL(r=0.999 99)；回收率為98.37%，溶液穩(wěn)定性良好，能夠用于藥品中厄貝沙坦含量的測(cè)定。

對(duì)于加樣回收試驗(yàn)中，本文采用“等量的陰性模擬制劑中加入不同質(zhì)量的厄貝沙坦原料”的方法，通過(guò)測(cè)定回收率溶液中厄貝沙坦的百分含量來(lái)確定回收率。在后續(xù)試驗(yàn)中，可以考慮測(cè)定加標(biāo)回收率，即于樣品中加入厄貝沙坦對(duì)照品，采用探究出的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積為準(zhǔn)計(jì)算其中厄貝沙坦含量以及回收率。

對(duì)于本實(shí)驗(yàn)“線性關(guān)系考察”中，后續(xù)可以進(jìn)行厄貝沙坦在低濃度范圍內(nèi)與峰面積是否呈線性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，以增加實(shí)驗(yàn)的適用性；對(duì)于“穩(wěn)定性試驗(yàn)”中，應(yīng)繼續(xù)考察更長(zhǎng)時(shí)間范圍內(nèi)對(duì)照溶液的穩(wěn)定情況，以說(shuō)明對(duì)照溶液的有效適用時(shí)間。

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(編校：譚玲)

Content determination of irbesartan in drugs by HPLC

WEI Xian-bo1, WANG Mei-yan1Δ, LU Ting-ting2

(1.Department of Quality Control, Yangtze River Pharmaceutical Group Beijing Haiyan Pharmaceutical Co., Ltd, Beijing 100026, China; 2.Chemical Research Institute, Yangtze River Pharmaceutical Group Beijing Haiyan Pharmaceutical Co., Ltd, Beijing 100026, China)

ObjectiveTo establish a HPLC method for the content determination of irbesartan in drugs.MethodsThe diamonsil C18column (150 mm×4.6 mm，5 μm) was used, with the mobile phase of phosphoric acid solution-acetonitrile(adjusted to pH 3.2 with triethylamine)(62:38).The column temperature was 35 ℃, with the UV detection wavelength of 245 nm and a flow rate of 1.0 mL/min.ResultsIrbesartan exhibited a good linear relationship with the peak area in the concentration range of 0.04-0.40 mg/mL with the correlation coefficient of 0.999 99．The average recovery was 98.37% with RSD of 0.7%(n=9).ConclusionThis method is simple and accurate with wide linear range and good reproducibility，and can be used to determine the content of irbesartan in drugs.

irbesartan; content determination; HPLC

魏獻(xiàn)波，女，學(xué)士，質(zhì)量控制主管，研究方向：藥物分析檢測(cè)，E-mail:80641626@qq.com；王美艷，通信作者，女，碩士，質(zhì)量控制檢測(cè)員，研究方向：藥物分析檢測(cè)，E-mail:1045773477@qq.com。

R927.2

A

1005-1678(2015)10-0141-03