• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    五味子治療大鼠糖尿病腎病作用機(jī)制的血清代謝組學(xué)研究

    2015-07-02 00:48:02皮子鳳門麗慧張靜周園宋鳳瑞劉志強(qiáng)
    分析化學(xué) 2015年2期
    關(guān)鍵詞:五味子尿酸質(zhì)譜

    皮子鳳門麗慧張 靜周園宋鳳瑞劉志強(qiáng)*

    1(中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所國家質(zhì)譜中心(長春)吉林省中藥化學(xué)與質(zhì)譜重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,長春 130022)2(吉林大學(xué)藥學(xué)院,長春 130021)

    研究報(bào)告

    五味子治療大鼠糖尿病腎病作用機(jī)制的血清代謝組學(xué)研究

    皮子鳳1門麗慧2張 靜2周園2宋鳳瑞1劉志強(qiáng)*1

    1(中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所國家質(zhì)譜中心(長春)吉林省中藥化學(xué)與質(zhì)譜重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,長春 130022)2(吉林大學(xué)藥學(xué)院,長春 130021)

    采用基于超高效液相色譜與串聯(lián)四級桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(Ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC/Q-TOF-MS)聯(lián)用技術(shù)的代謝組學(xué)方法,通過分析大鼠血清內(nèi)源性代謝物的變化,研究五味子治療糖尿病腎病的作用機(jī)制。利用高脂高糖飼料喂養(yǎng)并腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型。給藥12周后,采用試劑盒方法測定尿蛋白、尿肌酐的含量,結(jié)果表明五味子水提取物可以顯著降低模型動物的尿蛋白含量(p<0.05),對糖尿病大鼠腎病并發(fā)癥具有一定的改善作用。采用UPLC/Q-TOF-MS方法分析了五味子對糖尿病腎病大鼠的血清代謝輪廓,分析了健康組、模型組和五味子給藥組的大鼠血清,采用偏最小二乘法-判別分析(Partial least squares discriminant analysis, PLS-DA)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。PLS-DA得分圖顯示健康組、模型組和五味子組的代謝輪廓有顯著差別,根據(jù)正交偏最小二乘法-判別分析(Orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)載荷圖篩選,將對各組分離貢獻(xiàn)大的化合物的串聯(lián)質(zhì)譜分析數(shù)據(jù),經(jīng)Human Metabolome Database(HMDB)等數(shù)據(jù)庫檢索,進(jìn)行質(zhì)譜信息匹配,鑒定出黃尿酸、油酰胺、棕櫚酰胺、尿酸、5-羥基己酸、硫酸對甲酚、對甲酚葡萄糖苷酸7種內(nèi)源性代謝物為生物標(biāo)記物。研究結(jié)果表明五味子通過影響色氨酸代謝、嘌呤代謝、腸內(nèi)菌代謝、脂肪酸代謝等通路對糖尿病腎病發(fā)揮治療作用,其中嘌呤代謝、腸內(nèi)菌代謝通路可能是五味子發(fā)揮治療作用的重要途徑。

    五味子;糖尿病腎病;血清;代謝組學(xué)

    1 引 言

    北五味子為木蘭科植物五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.)的干燥成熟果實(shí),具有斂肺滋腎、生津斂汗、澀精止瀉、寧心安神等功效[1]。研究表明,五味子有效成分主要包括木脂素、多糖、揮發(fā)油、有機(jī)酸、脂肪油、氨基酸、色素、鞣質(zhì)等,藥理作用涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)以及泌尿系統(tǒng)等各個(gè)方面。

    研究表明,五味子油可以改善STZ聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)的Ⅱ型糖尿病大鼠胰島素抵抗,改善β細(xì)胞的功能缺陷,提高胰島素的分泌量,增加胰島素和胰十二指腸同源盒因子基因的表達(dá),從而發(fā)揮降血糖作用[2]。五味子多糖可控制糖尿病小鼠體重減輕、多飲和血糖升高的癥狀[3],能顯著促進(jìn)肝糖原的合成,抑制肝糖原分解而發(fā)揮降糖作用,且對糖尿病所引起的脂代謝異常也具有改善作用。五味子抗炎、抗氧化、清除氧自由基、增加周圍組織對葡萄糖的攝取等藥理活性在糖尿病腎病治療中效果明顯[4,5]。五味子醇提液能顯著改善C57BL/614小鼠的糖尿病腎病,阻抑腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及纖溶酶原活化抑制因子-1表達(dá)是其作用機(jī)制[6]。

    目前,文獻(xiàn)報(bào)道的五味子治療糖尿病作用機(jī)制的研究,大多數(shù)是從藥理作用以及分子角度進(jìn)行的。近年來,越來越多的研究采用代謝組學(xué)方法考察中藥治療糖尿病機(jī)制[7~9],但尚無從五味子整體作用角度對其治療糖尿病腎病的作用機(jī)制進(jìn)行研究的報(bào)道。本研究采用代謝組學(xué)方法,基于UPLC/ Q-TOF-MS技術(shù),對五味子治療前后糖尿病腎病大鼠血清中內(nèi)源性代謝物進(jìn)行了分析鑒定,從中藥作用的整體性角度,初步闡明了五味子治療糖尿病腎病的作用機(jī)制。

    2 實(shí)驗(yàn)部分

    2.1 儀器與試劑

    WatersAcquity UPLC液相色譜系統(tǒng)、Q-TOF SYNAPT G2 HDMS質(zhì)譜儀和Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)。

    五味子購自北京同仁堂藥店;鏈脲佐菌素(STZ,Sigma公司);乙腈和甲酸(色譜純,美國Fisher公司);水經(jīng)Millipore制得。SD大鼠購自吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心,實(shí)驗(yàn)動物許可證:SCXK (吉)2013-0001。尿蛋白試劑盒、尿肌酐試劑盒購自南京建成生物工程研究所(批號20140515, 20140506)。

    2.2 動物實(shí)驗(yàn)

    正常對照組(Control group):給予8只SD雄性大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料,正常喂養(yǎng)。

    Ⅱ型糖尿病大鼠造模參照文獻(xiàn)[7]進(jìn)行。

    16只糖尿病大鼠隨機(jī)分為兩組:模型組(Model group)和五味子組(WWZ group)。五味子組每日灌胃五味子水提液,劑量為每kg體重5 g生藥,模型組和空白組灌胃蒸餾水。連續(xù)給藥12星期后,收集24 h尿液,按照試劑盒方法測定尿蛋白、尿肌酐含量。末次給藥24 h后,動物斷頭處死,取血, 3000 r/min離心,收集空白對照組、模型組和五味子組的血清,-80℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

    2.3 樣品收集和制備

    五味子水提物制備:藥材粉碎后稱取適量,加10倍體積水浸泡20 min,加熱回流提取兩次,每次45 min,合并提取液,濃縮后凍干,陰涼干燥處儲存?zhèn)溆谩?/p>

    樣品檢測前,4℃融化血清樣品,在100 μL血清樣品中加入400 μL無水乙腈,劇烈振蕩30 s,室溫靜置10 min,樣品在4℃條件下,12000 r/min離心10 min,上清液用0.22 μm濾膜過濾,濾液供UPLC/MS測定。

    2.4 色譜質(zhì)譜條件及樣品分析

    色譜條件:A超純水(0.1%甲酸),B乙腈;梯度洗脫:0~2 min,5%~60%B;2~4 min,60%~70%B;4~7 min,70%~100%B;7~8 min:100%B。柱溫:30℃;流速:0.5 mL/min,進(jìn)樣量5 μL。

    質(zhì)譜條件:電離源溫度120℃;錐孔氣為氮?dú)?流速50 L/h;去溶劑氣為氮?dú)?溫度350℃,流速700 L/h。正離子模式下毛細(xì)管電壓為3.0 kV,錐孔電壓為30 V,提取錐孔電壓為5.0 V;負(fù)離子模式下毛細(xì)管電壓為2.0 kV,錐孔電壓為30 V,提取錐孔電壓為5.0 V。甲酸鈉建立質(zhì)量軸標(biāo)準(zhǔn)曲線,亮氨酸腦啡肽進(jìn)行實(shí)時(shí)質(zhì)量校正。串聯(lián)質(zhì)譜碰撞氣為氬氣,低碰撞能為5 eV,高碰撞能為25~35 eV。

    為保證整個(gè)分析系統(tǒng)的穩(wěn)定性,在本實(shí)驗(yàn)中使用質(zhì)控樣品(Quality control,QC)進(jìn)行方法驗(yàn)證,QC樣品由每個(gè)正常樣品各取100μL混合而得。為避免誤差樣品的檢測順序?yàn)殡S機(jī)進(jìn)行。對樣品進(jìn)行分析前,先運(yùn)行5次QC樣品,以起到平衡系統(tǒng)的作用。樣品的檢測過程中,每檢測5個(gè)正常樣品后運(yùn)行1次QC樣品以衡量系統(tǒng)的穩(wěn)定性。

    2.5 數(shù)據(jù)處理

    樣本用UPLC/Q-TOF-MS進(jìn)行檢測,得到樣品的總離子流色譜圖,利用MarkerLynx對采集得到的譜圖進(jìn)行離子對的提取、峰對齊、峰匹配和峰強(qiáng)度校正等操作,將結(jié)果轉(zhuǎn)化為包含化合物的保留時(shí)間和質(zhì)荷比信息的csv格式文件。再將其導(dǎo)入EZinfo 2.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。使用HMDB(http://www. hmdb.ca/)、METLIN(http://metlin.scripps.edu/)等生物學(xué)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行生物標(biāo)志物的鑒定和代謝通路的分析。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 五味子對糖尿病腎病大鼠尿肌酐、尿蛋白含量的影響

    糖尿病腎病早期,腎小球基底膜受損,過濾能力下降,會出現(xiàn)尿蛋白增加、尿肌酐含量減少的狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(表1),大鼠經(jīng)糖尿病造模后12周,尿液中蛋白數(shù)量顯著增加(p<0.05)、尿肌酐水平顯著下降(p<0.01),說明糖尿病模型大鼠發(fā)生了腎病并發(fā)癥,腎小球?yàn)V過能力下降。經(jīng)五味子治療后,尿蛋白排泄水平明顯低于模型組(p<0.05),尿肌酐水平顯著增加(p<0.05),表明五味子對糖尿病腎病具有一定的治療作用。

    表1 五味子對糖尿病腎病大鼠尿肌酐、尿蛋白含量的影響Table 1 Effect of Schisandra chinensis(WWZ)on the contents of creatinine and protein in urine of rat diabetic nephropathy

    3.2 五味子治療糖尿病腎病的血清代謝組學(xué)研究

    3.2.1 血清代謝輪廓分析采用UPLC/Q-TOF-MS進(jìn)行樣本的分離和數(shù)據(jù)采集,圖1為正、負(fù)離子模式下各組典型的總離子流基峰強(qiáng)度色譜圖(Base peak intensity chromatogram,BPI)。從圖1可見,空白對照組、模型組和五味子治療組大鼠血清代謝物具有明顯的差異。

    圖1 空白組(A)、模型組(B)和五味子組(C)大鼠血清在正離子模式(1)和負(fù)離子模式(2)下的基峰強(qiáng)度色譜圖(BPI)Fig.1 Typical serumal base peak intensity chromatograms in positive(1)and negative(2)ion mode of different group(control group(A),model group(B)and WWZ group(C))

    由空白對照組、模型組和五味子組的偏最小二乘法判別分析法(PLS-DA)得分圖(圖2)可以看出,在正譜或負(fù)譜中,3組均能明顯分開,其中正離子模式下模型的評價(jià)指標(biāo)為 R2X=0.9986, Q2=0.8675,負(fù)離子模式下模型的評價(jià)指標(biāo)為R2X=0.9943,Q2=0.9026。如圖2所示,STZ造模成功12周后,模型大鼠血清中的內(nèi)源性代謝物與正常動物相比發(fā)生了明顯的變化,經(jīng)五味子治療后,糖尿病大鼠血清代謝輪廓向著正常組方向轉(zhuǎn)變。

    3.2.2 潛在標(biāo)記物鑒定對五味子治療組和糖尿病組在STZ造模12周的血樣進(jìn)行正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)。正離子模式下模型評價(jià)指標(biāo)為R2Y=0.9986、Q2=0.8675,負(fù)離子模式下模型評價(jià)指標(biāo)為R2Y=0.9942和Q2=0.9026,說明模式質(zhì)量良好。如OPLS-DA得分圖(圖3 A和C)所示,五味子治療組和糖尿病模型組可以明顯區(qū)分。載荷圖上遠(yuǎn)離原點(diǎn)的化合物為潛在的標(biāo)記物(圖3B和3D),同時(shí)將VIP>1且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量(p<0.05)作為標(biāo)記物的判斷標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)它們精確分子量和串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)果以及與Human Metabolome Database(HMDB)和Mass Bank.jp等代謝產(chǎn)物和質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行質(zhì)譜信息匹配,對可能的潛在標(biāo)記物進(jìn)行初步鑒定,再用標(biāo)準(zhǔn)品的串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行驗(yàn)證,鑒定了7種化合物,結(jié)果列于表2。

    圖2 健康對照組(-)、模型組(◆)和五味子治療組(▲)在糖尿病造模12周的大鼠血清正離子模式(A)和負(fù)離子模式(B)下的PLS-DA得分圖Fig.2 Partial least squares-discriminant analysis(PLS-DA)score plots of serum metabolic profiling of control group (-),model group(◆),WWZ group(▲)in positive mode(A),and negative mode(B)after diabetes induced for 12 weeks

    圖3 五味子治療組(-)和模型組(▲)糖尿病造模12周的大鼠血清在正離子模式(A)和負(fù)離子模式(C)下的OPLS-DA得分圖和正離子模式(B)和負(fù)離子模式(D)下PLS-DA的載荷圖Fig.3 Orthoganal partial least squares(OPLS)-DA score plots of serum metabolic profiling of WWZ group(-)and model group(▲)in positive mode(A)and negative mode(C)and OPLS-DA loading plots in positive mode(B)and negative mode(D)after diabetes induced for 12 weeks.

    正離子模式下以保留時(shí)間為0.690 min,m/z 206.0452的離子為例,根據(jù)精確分子量、計(jì)算分子的不飽和度、結(jié)合同位素峰相對強(qiáng)度進(jìn)行篩選,推斷其化學(xué)式是C10H8NO4。該離子在串聯(lián)質(zhì)譜中產(chǎn)生m/z 160.0382和132.0370的碎片,經(jīng)計(jì)算確認(rèn)碎片離子為[M-HCOOH+H]+和[M-HCOOH-CO+H]+,經(jīng)數(shù)據(jù)庫搜索確認(rèn)為黃尿酸(Xanthurenic acid),其串聯(lián)質(zhì)譜圖和可能的裂解規(guī)律見圖4a。

    德克薩斯大學(xué)阿林頓分校生物系教授Woo-Suk Chang分析認(rèn)為:“作物產(chǎn)量不僅取決于土壤的結(jié)構(gòu)和營養(yǎng)狀況,還取決于土壤中的微生物組成和活性,特別是根際土壤。”然而,近幾十年來,隨著人類活動而導(dǎo)致的環(huán)境污染和生態(tài)破壞的問題日益突出,土壤侵蝕、鹽堿化、酸化、沙漠化、重金屬污染等導(dǎo)致的土壤退化或污染現(xiàn)象越來越嚴(yán)重,土壤健康狀況趨于惡化。目前,我國耕地土壤40%以上面積出現(xiàn)退化。

    負(fù)離子模式下以保留時(shí)間0.343 min,m/z 167.2000的離子為例,根據(jù)精確分子量推測可能的化學(xué)式是C5H4N4O3。碎片離子包括m/z 124.0158和96.0617(圖4b),經(jīng)分析確認(rèn)碎片離子分別為[M-CHNO-H]-和[M-C2HNO2-H]-,經(jīng)數(shù)據(jù)庫和結(jié)構(gòu)推斷確認(rèn)為尿酸(Uric acid)。

    3.3 標(biāo)記物代謝通路分析

    黃尿酸(Xanthurenic acid)是色氨酸經(jīng)犬尿氨酸代謝通路產(chǎn)生的代謝物。據(jù)Kotake等報(bào)道,糖尿病患者體內(nèi)色氨酸代謝紊亂,羥基犬尿素和黃尿酸代謝增加[10]。Murakami報(bào)道黃尿酸可與胰島素連接形成復(fù)合體[11],復(fù)合體的降血糖活性和吸收葡萄糖作用較游離胰島素低,降低了胰島素的生物學(xué)效應(yīng),從而導(dǎo)致糖尿病。五味子給藥后血液中黃尿酸含量降低,對糖尿病模型的色氨酸代謝途徑有積極的調(diào)節(jié)作用。

    表2 五味子治療糖尿病大鼠的潛在生物標(biāo)記物Table 2 Potential biomarkers in diabetes rats treated by Schisandra chinensis

    圖4 黃尿酸(a)和尿酸(b)二級串聯(lián)質(zhì)譜圖Fig.4 MS/MS spectra of xanthurenic acid(a)and uric acid(b)

    油酰胺(Oleamide)是長鏈脂肪酰胺,研究發(fā)現(xiàn)具有降低身體核心體溫等多種生理功能。油酰胺沒有特定的受體,但最有可能作用大麻素受體(CB-1和CB-2)[12]和幾種血清素受體[13],而這兩種大麻素和血清素受體參與控制胰島素分泌。有研究證明CB-1受體可以促進(jìn)人骨骼肌細(xì)胞和小鼠脂肪細(xì)胞的胰島素抵抗[14]。棕櫚酰胺(Palmitic amide),屬于脂肪酰胺,由棕櫚酸降解產(chǎn)生。五味子治療后,油酰胺、棕櫚酰胺水平下調(diào),說明五味子對糖尿病大鼠脂肪酸代謝通路具有調(diào)節(jié)作用。

    尿酸(Uric acid)是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物,能夠減緩腎血流量,激活腎素血管緊張素系統(tǒng)。高血尿酸也可加速腎臟損傷,造成腎小管不可逆性損傷[15],會造成低密度脂蛋白膽固醇的氧化和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。研究表明,尿酸是糖尿病腎病的一種介質(zhì),可通過增強(qiáng)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)活性和炎癥級聯(lián)反應(yīng)等途徑介導(dǎo)糖尿病腎病的發(fā)生[16],加重糖尿病患者的腎臟損傷程度。五味子治療后血尿酸水平下調(diào),可減少模型動物血清中高尿酸水平對腎臟的損傷,從而發(fā)揮治療糖尿病腎病的作用。

    5-羥基己酸(5-Hydroxyhexanoic acid)是一種脂肪酸的單羥基羧酸降解產(chǎn)物。在伴有酮酸中毒的糖尿病患者中檢測到該化合物[18]。五味子的治療減少了糖尿病腎病大鼠血清中5-羥基己酸的濃度,表明五味子在減輕糖尿病酮酸中毒癥狀中可能達(dá)到重要的作用。

    4 結(jié) 論

    本研究采用UPLC-Q-TOF-MS結(jié)合PLS-DA的分析手段,進(jìn)行了五味子治療糖尿病腎病大鼠血清代謝組學(xué)研究。共鑒定了7種內(nèi)源性代謝產(chǎn)物,分別為黃尿酸、油酰胺、棕櫚酰胺、尿素、5-羥基己酸、硫酸對甲酚和對甲酚葡萄糖苷酸,說明五味子通過影響色氨酸代謝、嘌呤代謝、脂肪酸代謝、腸內(nèi)菌代謝等通路發(fā)揮治療作用,其中嘌呤代謝、腸內(nèi)菌代謝通路是其減少腎病損傷的重要作用途徑。從五味子整體作用角度初步闡明了其治療糖尿病腎病的作用機(jī)理。

    1 WANG Sen,ZHANG Jian-Guo.Econom.Fores.Res.,2003,21(4):126-127

    王森,張建國.經(jīng)濟(jì)林研究,2003,21(4):126-127

    2 AN Li-Ping,WANG Ying-Ping,LIU Xiao-Mei,WANG Chun-Mei,ZHAN Jin-Zhuo,SUN Hui,LI Na,WANG Tuo, DU Pei-Ge,SUN Zhi-Wei.Chinese Tradit.Herb.Drugs,2012,43(3):552-556

    安麗萍,王英平,劉曉梅,王春梅,詹巾卓,孫匯,李娜,王拓,杜培革,孫志偉.中草藥,2012,43(3):552-556

    3 GAO Xiao-Xu,MENG Xian-Jun,LI Ji-Hai,QIN Qin,NA Guang-Ning.Food Res.Dev.,2008,29(9):27-30

    高曉旭,孟憲軍,李繼海,秦琴,那廣寧.食品研究與開發(fā),2008,29(9):27-30

    4 Ip S P,Ko K M.Biochem.Pharmacol.,1996,52:1687-1693

    5 Pan S Y,Han Y F,Carlier P R,Pang Y P,Mak D H F,Lam B Y H,KO K M.Planta Med.,2002,68(3):217-220

    6 LIU Miao,ZHANG Mian-Zhi,TAN Xiao-Yue,YUAN Sha-Sha.Tianjin Medic.J.,2011,39(6):557-559

    劉苗,張勉之,譚小月,袁沙沙.天津醫(yī)藥,2011,39(6):557-559

    7 GU Jin-Ning,NIU Jun,PI Zi-Feng,YUE Hao,WU Sui-Sheng,LIU Shu-Ying.Chinese J.Anal.Chem.,2013,41(3): 371-376

    谷金寧,牛俊,皮子鳳,越皓,吳綏生,劉淑瑩.分析化學(xué),2013,41(3):371-376

    8 Niu J,Pi Z F,Yue H,Wang Y,Yu Q,Liu S Y.Rapid Commun.Mass Spectrom.,2012,26(23):2683-2689

    9 Zhang S X,Sun H,Sun W J,Jiao G Z,Wang X J.J.Pharmaceut.Biomed.,2010,53:1011-1014

    10 Kotake Y,Inada T.J.Biochem.,1953,40(3):291-294

    11 Kotake Y,Murakami E.Am.J.Clin.Nutr.,1971,24(7):826-829

    12 Leggett J D,Aspley S,Beckett S R G,D'antona A M,Kendall D A.Brit.J.Pharmacol.,2004,141(2):253-262

    13 Boger D L,Patterson J E,Jin Q.P.Natl.Acad.Sci.USA,1998,95(8):4102-4107

    14 D′eon T M,Pierce K A,Roix J J,Tyler A,Chen H,Teiceira S.Diabetes,2008,57(5):1262-1268

    15 Nakagawa T,Mazzali M,Kang D H,Kanelis J,Watanabe S,Sanchez-lozada L G,Rodriduez-lturbe B,Herrera-acosta J, Johnson R J.Am.J.Nephrol.,2002,23(1):2-7

    16 Jalal D I,Maahs D M,Hovind P,Nakagawa T.Semin.Nephrol.,2011,31(5):459-465

    17 Glorieux G,Vanholder R.Contrib.Nephrol.,2011,168(1):117-128

    18 Kamerling J P,Duran M,Bruinvis L,Ketting D,Wadman S K,Vliegenthart J F G.Clin.Chim.Acta,1982,125(3): 247-254

    This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81373952)

    《分析化驗(yàn)工技術(shù)問答》

    王秀萍 主編 王博、馬春香 副主編

    本書針對分析化驗(yàn)工應(yīng)知應(yīng)會的分析知識與技能,以問答的形式介紹了化學(xué)分析基礎(chǔ)知識、化學(xué)分析操作技能知識、酸堿滴定法、氧化還原滴定法、配位滴定法、沉淀滴定法、稱量分析法等化學(xué)分析知識與操作,電化學(xué)分析、紫外-可見分光光度法、氣相色譜法、液相色譜法和原子吸收光譜法等儀器分析方法。另外,結(jié)合當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室的管理需求,書中融入了分析過程質(zhì)量控制和實(shí)驗(yàn)室管理的內(nèi)容。

    書 號:9787122210586 定價(jià):39.0元

    出版時(shí)間:2014年10月 開本:16 化學(xué)工業(yè)出版社出版

    Serumal Metabonomic Study on Mechanism of Schisandra Chinensis in Rat Diabetic Nephropathy

    PI Zi-Feng1,MEN Li-Hui2,ZHANG Jing2,ZHOU Yuan2, SONG Feng-Rui1,LIU Zhi-Qiang*1

    1(National Center for Mass Spectrometry in Changchun,Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Chemistry and Mass Spectrometry Jilin Province,Changchun Institute of Applied Chemistry,Chinese Academy of Sciences,
    Changchun 130022,China)
    2(School of Pharmaceutical Science,Jilin University,Changchun 130021,China)

    A serumal metabonomics method based on UPLC/Q-TOF-MS was established to investigate the mechanism of Schisandra chinensis to treating diabetic nephropathy.The diabetic model was established by feeding with high-fat and high-sucrose chow and streptozotocin intraperitoneal injection.After intragastric administration for 12 weeks,the content of protein and creatinine in rat urine was detected.The results showed that Schisandra chinensis could reduce the content of protein in urine of diabetic rat(p<0.05)and ameliorate the condition of diabetic nephropathy.The serum metabolic profiling was analysed by using UPLC/ Q-TOF-MS and partial least squares-discriminated analysis(PLS-DA)was used for data analysis.The score of PLS-DA showed that there was significant difference among the metabolic profile of control group,model group and Schisandra chinensis group(WWZ).Potential biomarkers of Schisandra chinensis ameliorating diabetic nephropathy were selected by orthogonal partial least squares(OPLS)-DA model.According to the results of OPLS-DA,the MS/MS data of each compound which provided greater contribution to separation of each group were searched from the HMDB databases.Seven endogenous metabolites were identified as potential biomarkers such as xanthurenic acid,palmitic amide,oleamide,uric acid,5-hydroxyhexanoic acid,p-cresol sulfate,and p-cresol glucuronide.The results revealed that Schisandra chinensis mainly affected the pathways of tryptophan metabolism,gut microbiota metabolism,purine metabolism and fatty acid metabolism to treating type 2 diabetes mellitus.The gut microbiota metabolism and purine metabolism was an important pathway on diabetic nephropathy.

    Schisandra chinensis;Diabetic nephropathy;Serum;Metabonomics

    2 July 2014;accepted 28 August 2014)

    2014-07-02收稿;2014-08-28接受

    本文系國家自然科學(xué)基金(No.81373952)資助

    *E-mail:liuzq@ciac.ac.cn

    10.11895/j.issn.0253-3820.140564

    猜你喜歡
    五味子尿酸質(zhì)譜
    喝茶能降尿酸嗎?
    茶道(2022年3期)2022-04-27 00:15:46
    氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀在農(nóng)殘檢測中的應(yīng)用及維護(hù)
    芒果苷元對尿酸性腎病大鼠尿酸排泄指標(biāo)的影響
    尿酸真的能殺死泰國足療小魚嗎
    HPLC-DAD法快速篩查五味子顆粒(糖漿)中南五味子代替五味子
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:02
    降尿酸——我是不是吃了假藥?
    五味子醇甲提取純化方法的研究進(jìn)展
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:06
    北五味子化學(xué)成分的研究
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:01
    吹掃捕集-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測定水中18種揮發(fā)性有機(jī)物
    HPLC法同時(shí)測定五酯膠囊中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量
    国产黄色免费在线视频| 黄色 视频免费看| 999精品在线视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲七黄色美女视频| 久久这里只有精品19| 国产激情久久老熟女| 美国免费a级毛片| 午夜精品国产一区二区电影| 在线精品无人区一区二区三| 母亲3免费完整高清在线观看| 首页视频小说图片口味搜索 | 国产在线观看jvid| 免费观看人在逋| 亚洲熟女精品中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 成人免费观看视频高清| 伊人亚洲综合成人网| 老鸭窝网址在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲欧洲国产日韩| 大码成人一级视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 真人做人爱边吃奶动态| av不卡在线播放| 国产亚洲av高清不卡| 欧美亚洲日本最大视频资源| 韩国精品一区二区三区| 丝袜喷水一区| 久久久精品免费免费高清| 成年人免费黄色播放视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久青草综合色| 一本大道久久a久久精品| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 丁香六月天网| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 最新的欧美精品一区二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产国语露脸激情在线看| 各种免费的搞黄视频| 青春草亚洲视频在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 中文字幕制服av| 一区福利在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| av有码第一页| 国产熟女欧美一区二区| 麻豆av在线久日| 99精品久久久久人妻精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲天堂av无毛| 狂野欧美激情性xxxx| 青青草视频在线视频观看| 曰老女人黄片| 97在线人人人人妻| 欧美人与善性xxx| 美女高潮到喷水免费观看| 免费高清在线观看日韩| 最近中文字幕2019免费版| 国产精品一国产av| 丝袜美足系列| 搡老岳熟女国产| 国产福利在线免费观看视频| 一级片'在线观看视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 日韩大码丰满熟妇| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美激情极品国产一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 97在线人人人人妻| 国产精品 国内视频| 一级片'在线观看视频| 人妻人人澡人人爽人人| 高清不卡的av网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| av片东京热男人的天堂| 在线观看免费高清a一片| 老汉色∧v一级毛片| 在线观看一区二区三区激情| 国产主播在线观看一区二区 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲九九香蕉| 日韩大码丰满熟妇| 国产一区亚洲一区在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产一区二区激情短视频 | 久久九九热精品免费| 国产精品人妻久久久影院| 国精品久久久久久国模美| 一级黄色大片毛片| videos熟女内射| 在线精品无人区一区二区三| 男女边摸边吃奶| 午夜激情久久久久久久| e午夜精品久久久久久久| 亚洲国产中文字幕在线视频| 激情视频va一区二区三区| 国产在线免费精品| xxx大片免费视频| 水蜜桃什么品种好| 国产在线视频一区二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲一区中文字幕在线| 老汉色av国产亚洲站长工具| 两人在一起打扑克的视频| 在线观看人妻少妇| 国产男人的电影天堂91| 国产99久久九九免费精品| 国产精品免费视频内射| 丝袜喷水一区| 亚洲国产日韩一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 成人国产av品久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 日本wwww免费看| 不卡av一区二区三区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 精品人妻1区二区| 国产免费福利视频在线观看| av天堂久久9| 午夜精品国产一区二区电影| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲精品国产区一区二| 日本a在线网址| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美亚洲日本最大视频资源| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久精品国产a三级三级三级| 日本a在线网址| 搡老乐熟女国产| 18禁观看日本| 日韩av不卡免费在线播放| 高潮久久久久久久久久久不卡| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日韩av不卡免费在线播放| 一级毛片女人18水好多 | 亚洲欧洲日产国产| 国产在线一区二区三区精| 亚洲一码二码三码区别大吗| 人人澡人人妻人| 乱人伦中国视频| 久久99一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 男人舔女人的私密视频| 一级片免费观看大全| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品一区蜜桃| 1024视频免费在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 日本91视频免费播放| 亚洲av国产av综合av卡| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产免费现黄频在线看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 永久免费av网站大全| 精品少妇久久久久久888优播| 精品人妻一区二区三区麻豆| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲国产看品久久| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 成年人午夜在线观看视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 十八禁人妻一区二区| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品.久久久| 一区二区三区精品91| 欧美国产精品一级二级三级| 丝袜脚勾引网站| 一区二区日韩欧美中文字幕| 美女大奶头黄色视频| 视频在线观看一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 操美女的视频在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 搡老岳熟女国产| 女人久久www免费人成看片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 在线观看免费午夜福利视频| 一本色道久久久久久精品综合| 久久久国产一区二区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 午夜免费成人在线视频| 国产成人精品在线电影| 国产麻豆69| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲第一av免费看| 国产精品一区二区在线观看99| 99热国产这里只有精品6| 精品高清国产在线一区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产亚洲一区二区精品| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 中文字幕av电影在线播放| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲久久久国产精品| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久国产一区二区| 国产精品99久久99久久久不卡| 两个人免费观看高清视频| 美女大奶头黄色视频| 欧美精品av麻豆av| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲七黄色美女视频| 91麻豆av在线| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产又色又爽无遮挡免| 十八禁人妻一区二区| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 黄色一级大片看看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产99久久九九免费精品| 18禁观看日本| 欧美日韩综合久久久久久| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| www日本在线高清视频| 男人添女人高潮全过程视频| 久久免费观看电影| 久久影院123| 国产高清视频在线播放一区 | 国产伦人伦偷精品视频| 高清av免费在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久久精品免费免费高清| 青草久久国产| av在线播放精品| 精品人妻1区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久精品94久久精品| 超碰97精品在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久毛片免费看一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 成人国产av品久久久| 国产成人一区二区在线| 最黄视频免费看| 99久久综合免费| 少妇精品久久久久久久| 1024视频免费在线观看| 91老司机精品| 嫩草影视91久久| 亚洲七黄色美女视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美日韩黄片免| 亚洲av电影在线进入| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 91精品三级在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 无限看片的www在线观看| 国产精品国产av在线观看| 操出白浆在线播放| 国产精品熟女久久久久浪| 深夜精品福利| 国产成人91sexporn| www日本在线高清视频| 亚洲成色77777| 久久人人爽av亚洲精品天堂| kizo精华| 搡老乐熟女国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| e午夜精品久久久久久久| 久久久久久人人人人人| 99香蕉大伊视频| 国产亚洲av高清不卡| 永久免费av网站大全| 一本久久精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 成年动漫av网址| 色精品久久人妻99蜜桃| 一本综合久久免费| 成人免费观看视频高清| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美变态另类bdsm刘玥| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 老司机深夜福利视频在线观看 | 制服人妻中文乱码| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 看免费成人av毛片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 手机成人av网站| 欧美黄色片欧美黄色片| 日本wwww免费看| 九色亚洲精品在线播放| 美女高潮到喷水免费观看| 精品久久蜜臀av无| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产三级黄色录像| svipshipincom国产片| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品成人在线| 在现免费观看毛片| www.av在线官网国产| 色综合欧美亚洲国产小说| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲欧美一区二区三区黑人| av国产精品久久久久影院| 欧美在线黄色| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 黄色毛片三级朝国网站| 另类亚洲欧美激情| 免费不卡黄色视频| 久久人人爽人人片av| 久久鲁丝午夜福利片| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 午夜福利,免费看| 嫁个100分男人电影在线观看 | 美女视频免费永久观看网站| 精品视频人人做人人爽| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 制服人妻中文乱码| 精品人妻一区二区三区麻豆| av网站免费在线观看视频| 午夜免费鲁丝| 丝袜喷水一区| 久久99精品国语久久久| 脱女人内裤的视频| 欧美在线黄色| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品久久久久成人av| 亚洲第一青青草原| 国产成人91sexporn| 国产精品国产三级国产专区5o| 天天添夜夜摸| 欧美大码av| av天堂在线播放| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产1区2区3区精品| 成年动漫av网址| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 九色亚洲精品在线播放| 午夜福利免费观看在线| 国产高清videossex| 男女午夜视频在线观看| 香蕉国产在线看| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 国产又爽黄色视频| 国产男人的电影天堂91| 人妻 亚洲 视频| www.熟女人妻精品国产| 尾随美女入室| 亚洲 欧美一区二区三区| www.av在线官网国产| 国产1区2区3区精品| 视频区欧美日本亚洲| 精品高清国产在线一区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| cao死你这个sao货| 麻豆乱淫一区二区| 午夜av观看不卡| 国产精品久久久久久精品古装| 成年人黄色毛片网站| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av电影在线进入| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日本vs欧美在线观看视频| a级毛片黄视频| 大香蕉久久网| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 男人舔女人的私密视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一本大道久久a久久精品| www.999成人在线观看| 国产男女内射视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 在线av久久热| 蜜桃国产av成人99| 老鸭窝网址在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 久久亚洲国产成人精品v| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 丝瓜视频免费看黄片| 国产黄频视频在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 成人亚洲欧美一区二区av| 9色porny在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 少妇人妻久久综合中文| 在线观看一区二区三区激情| 午夜久久久在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久99热这里只频精品6学生| 大香蕉久久网| 我要看黄色一级片免费的| 欧美精品一区二区大全| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲天堂av无毛| 成人国产一区最新在线观看 | 热99久久久久精品小说推荐| 看免费av毛片| 丝袜美腿诱惑在线| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲精品自拍成人| 免费看av在线观看网站| 极品人妻少妇av视频| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 午夜免费观看性视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 老熟女久久久| 免费高清在线观看日韩| a级片在线免费高清观看视频| 激情五月婷婷亚洲| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 九色亚洲精品在线播放| 亚洲黑人精品在线| 亚洲国产av影院在线观看| 下体分泌物呈黄色| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 狂野欧美激情性xxxx| 国产av一区二区精品久久| 国产一区二区 视频在线| av天堂久久9| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| 日本a在线网址| 又紧又爽又黄一区二区| 两性夫妻黄色片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| xxx大片免费视频| 国产又色又爽无遮挡免| 真人做人爱边吃奶动态| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美成人午夜精品| 观看av在线不卡| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品三级大全| 成年人免费黄色播放视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 男的添女的下面高潮视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 午夜影院在线不卡| 亚洲情色 制服丝袜| 波野结衣二区三区在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品一国产av| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品一区二区在线不卡| 国产成人精品在线电影| 黄色视频在线播放观看不卡| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 99国产综合亚洲精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 91国产中文字幕| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 曰老女人黄片| 成年人黄色毛片网站| 午夜免费成人在线视频| 男女国产视频网站| 国产免费现黄频在线看| 水蜜桃什么品种好| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产一区二区 视频在线| 免费高清在线观看日韩| 久热爱精品视频在线9| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久狼人影院| 国产av国产精品国产| 大话2 男鬼变身卡| 啦啦啦啦在线视频资源| 操美女的视频在线观看| 国产不卡av网站在线观看| 国产1区2区3区精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 婷婷色av中文字幕| 国产成人欧美在线观看 | 午夜日韩欧美国产| 久久久久久久久久久久大奶| 丝袜在线中文字幕| av片东京热男人的天堂| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 91麻豆av在线| avwww免费| 亚洲免费av在线视频| 青青草视频在线视频观看| 日韩免费高清中文字幕av| 人成视频在线观看免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 日本午夜av视频| 国产深夜福利视频在线观看| 国产麻豆69| 国产日韩欧美在线精品| www.熟女人妻精品国产| 午夜福利,免费看| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 欧美久久黑人一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品一区二区在线观看99| 最近手机中文字幕大全| 满18在线观看网站| 韩国高清视频一区二区三区| bbb黄色大片| 亚洲第一av免费看| 国产高清国产精品国产三级| 91精品三级在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 欧美xxⅹ黑人| 国产黄色视频一区二区在线观看| 两性夫妻黄色片| 久久人人97超碰香蕉20202| 成人国语在线视频| 高清av免费在线| 欧美精品高潮呻吟av久久| svipshipincom国产片| a级片在线免费高清观看视频| 久久久久久久久免费视频了| 捣出白浆h1v1| 色视频在线一区二区三区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲欧美清纯卡通| 国产福利在线免费观看视频| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 人妻一区二区av| 免费在线观看日本一区| 黄色视频不卡| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 下体分泌物呈黄色| 国产一区二区三区综合在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲中文字幕日韩| 两性夫妻黄色片| 亚洲精品一二三| 99国产精品99久久久久| 精品福利永久在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 好男人视频免费观看在线| 又大又爽又粗| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 男的添女的下面高潮视频| av线在线观看网站| 国产高清国产精品国产三级| 最近中文字幕2019免费版| 国产精品一二三区在线看| 大码成人一级视频| 女性生殖器流出的白浆| 久热爱精品视频在线9| 一级毛片 在线播放| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| av不卡在线播放| 操出白浆在线播放| kizo精华| 在现免费观看毛片| 亚洲欧洲国产日韩| 国产伦理片在线播放av一区| www日本在线高清视频| bbb黄色大片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美人与性动交α欧美软件| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 丝袜人妻中文字幕| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美精品高潮呻吟av久久| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲人成电影观看| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲国产欧美网| 久久九九热精品免费| h视频一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 成人黄色视频免费在线看| 美女午夜性视频免费| 99国产精品99久久久久| 91国产中文字幕| 在线观看免费视频网站a站| 丰满少妇做爰视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 青草久久国产| 欧美黑人精品巨大|