細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞在腫瘤生物治療中的應(yīng)用進(jìn)展

蘭濤，崔乃強

(1滄州市人民醫(yī)院，河北滄州061001；2天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所)

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞在腫瘤生物治療中的應(yīng)用進(jìn)展

蘭濤1，崔乃強2

(1滄州市人民醫(yī)院，河北滄州061001；2天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所)

以自體細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)為主體的腫瘤過繼免疫治療已逐漸成為一種重要的腫瘤生物治療方法其制備方便，效果可靠。本文就其生物學(xué)特性、制備及應(yīng)用方法、作用機制及臨床應(yīng)用效果作一綜述。

腫瘤；細(xì)胞治療；生物治療；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞

細(xì)胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，它是運用生物技術(shù)和生物制劑分離、體外激活并回輸患者自身或者同種異體的腫瘤特異性或者非特異性殺傷細(xì)胞的一種治療方法。與傳統(tǒng)的腫瘤治療方法相比，其不僅直接發(fā)揮抗腫瘤作用，而且更加專注于糾正機體的細(xì)胞免疫功能低下，促進(jìn)宿主抗腫瘤免疫功能。過繼免疫治療對于實體腫瘤和血液腫瘤都是很有希望的治療方法，它的目的是恢復(fù)及增強免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的識別功能。以自體細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)為主體的腫瘤過繼免疫治療已逐漸成為腫瘤生物治療中最活躍的應(yīng)用與研究領(lǐng)域之一，近年來研究成果較多?，F(xiàn)綜述如下。

1 CIK細(xì)胞的生物學(xué)特性

2 自體CIK 細(xì)胞的制備與輸注方法

3 CIK細(xì)胞的作用機制及特點

CIK細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤靶細(xì)胞溶解作用機制被認(rèn)為是由胞質(zhì)顆粒作為外源性的局部定向的細(xì)胞溶解毒素，通過細(xì)胞膜而滲透進(jìn)靶細(xì)胞內(nèi)從而引起靶細(xì)胞的溶解。抗CD3-Mab或腫瘤細(xì)胞可致CIK細(xì)胞脫顆粒，但是這種作用的前提是必須靠黏附分子LAF-l及其配體ICAM-1相互作用使CIK細(xì)胞與靶細(xì)胞黏附在一起。LAF-1與其配體ICAM-1的單克隆抗體可阻斷CIK細(xì)胞的殺瘤作用，而抗CD3-Mab不能阻斷。雖然CIK細(xì)胞表達(dá)TCR-α/B表面分子，但是TCR-α/B的單克隆抗體并不能阻斷CIK細(xì)胞的作用，其作用也不是抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用，因其不表達(dá)CD16表面分子。

生物免疫治療癌癥的主要困難是許多腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL，可誘導(dǎo)免疫效應(yīng)細(xì)胞的凋亡，從而降低細(xì)胞免疫治療的成功率。此外，腫瘤周圍的微環(huán)境存在的免疫抑制。最后，腫瘤中央和周圍的免疫耐受共同協(xié)力作用滅活和(或)消滅對腫瘤有殺傷作用的免疫效應(yīng)細(xì)胞。Vemeris等[5]研究發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞對FasL所致的凋亡有對抗作用，因為其有抗凋亡基因的表達(dá)，當(dāng)?shù)鞍缀铣墒芤謺r，CIK細(xì)胞的抗凋亡能力下降，容易被FasL誘導(dǎo)凋亡。CIK細(xì)胞是在體外培養(yǎng)時獲得這種能力的，這些結(jié)果提示CIK細(xì)胞免疫治療適合FasL陽性腫瘤[6]。

CIK細(xì)胞對多種腫瘤細(xì)胞包括急性髓系白血病、慢性骨髓性白血病、B-和T-細(xì)胞淋巴瘤具有明顯的細(xì)胞毒功能[7～10]。像CD3細(xì)胞一樣，CIK細(xì)胞同樣表達(dá)T細(xì)胞相關(guān)抗原，而且可以迅速地擴大培養(yǎng)。T細(xì)胞受體分子的表達(dá)對CIK細(xì)胞識別腫瘤細(xì)胞來說不是一個先決條件，此外，CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用不會受到T細(xì)胞受體或MHC Ⅰ類或Ⅱ類分子抗體掩蔽的影響。這表明CIK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞有直接殺傷作用，不需要以靶細(xì)胞MHC分子為介導(dǎo)[11]。CIK細(xì)胞不參與抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)。由于CIK細(xì)胞膜缺乏CD16，導(dǎo)致其對一些免疫藥物耐藥，包括環(huán)孢素A 和FK506[12]。CIK細(xì)胞對化療藥物敏感，極易被化療藥物殺滅，故臨床應(yīng)用時限制了化療和CIK細(xì)胞治療的同時應(yīng)用。有研究將MDR1的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CIK，觀察CIK細(xì)胞耐藥性，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后CIK細(xì)胞MDR1基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA陽性，P-gp的表達(dá)較轉(zhuǎn)染前明顯增高，且對順鉑的耐藥性明顯提高。故MDR1基因轉(zhuǎn)入CIK細(xì)胞后，細(xì)胞獲得了多藥耐藥性，同時保持了對原有腫瘤細(xì)胞的殺傷活性，為化療同時進(jìn)行CIK細(xì)胞治療提供了實驗依據(jù)[13]。另外，CIK細(xì)胞通過識別NKG2D配體發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞能力，NKG2D向CIK細(xì)胞傳遞活化信號，使CIK細(xì)胞具有攻擊靶細(xì)胞的能力。NKG2D能增強CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒性和促進(jìn)CIK細(xì)胞增殖，CIK細(xì)胞通過NKG2D發(fā)揮細(xì)胞毒活性[14]。

4 CIK細(xì)胞的臨床應(yīng)用

大量研究顯示惡性腫瘤根治性切除術(shù)后，輔助CIK免疫治療是可以獲益的[15]。有研究顯示肝癌根治性切除術(shù)后或微創(chuàng)術(shù)后的CIK輔助治療可以有效降低復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率[16,17]。CIK細(xì)胞主要以非主要組織相容性復(fù)合體殺傷腫瘤細(xì)胞，因此對任何一種腫瘤均具有殺滅作用，無法進(jìn)行手術(shù)、放療、化療的中晚期患者級放化療失敗的患者等均可以考慮行CIK維持治療，維持治療可以明顯改善患者的預(yù)后，獲益大小與回輸次數(shù)具有相關(guān)性[18]。

從20世紀(jì)90年代起，國內(nèi)外主要采用患者自體的CIK細(xì)胞進(jìn)行腫瘤治療。Schmidt-Wolf等[11]采用編碼IL-2基因的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染自體CIK細(xì)胞來治療實體瘤(轉(zhuǎn)移性腎癌、結(jié)腸癌、淋巴瘤)，CIK細(xì)胞毒活性明顯增強。Shi等[19]證實了自體CIK細(xì)胞在原發(fā)性肝癌的臨床Ⅰ期試驗中的安全性。最近，國外有報道thymoglobulin結(jié)合IFN-g和IL-2在擴大CIK細(xì)胞方面比CD3單克隆抗體更有效，CIK細(xì)胞結(jié)合甲狀腺球蛋白(TG)在殺死K562細(xì)胞方面比TG聯(lián)合抗CD3單克隆抗體更有效，并且可以釋放較大量的具有生物活性的IL-12p40[20]。在I期后續(xù)研究中，給5例放化療失敗的成年腫瘤患者注入了結(jié)合TG的CIK細(xì)胞，結(jié)果證明其安全無副作用。應(yīng)該強調(diào)的是：功能性的含有TG的CIK細(xì)胞會危害有轉(zhuǎn)移性腫瘤的患者，因為會改變病情正在進(jìn)展中的癌癥患者的免疫抑制機制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，患者來源的CIK細(xì)胞只能表達(dá)較低水平的激活/抑制NK受體的作用和在體外實驗中較低的裂解活性。最近，CIK細(xì)胞的國際認(rèn)證組織IRCC報道了426例患有肝癌、胃癌和復(fù)發(fā)性淋巴瘤的患者，通過輸入自體或異體移植CIK細(xì)胞治療的臨床試驗結(jié)果[21]，成功回訪并觀察到臨床反應(yīng)的有384例，雖然腫瘤縮小的只有3例，但與未輸注CIK細(xì)胞的對照組相比，輸注CIK免疫治療的患者預(yù)后更好。在移植異基因造血干細(xì)胞后，一些輸入異體CIK細(xì)胞的患者會出現(xiàn)血液惡性腫瘤復(fù)發(fā)的情況。在劑量遞增的研究中，CIK細(xì)胞來自于通過最初的供體,擴展為具有抗CD43抗性、IFN-g和IL-2活性的細(xì)胞，作用于18例血液惡性腫瘤成年患者，在CIK輸注后的20個月隨訪當(dāng)中，總生存期的平均值為28個月，有2例患者發(fā)生了急性移植物抗宿主病。值得一提的是，5例患者通過輸注CIK細(xì)胞治療病情獲得了長時間的緩解。效果比輸注同種異基因造血干細(xì)胞的患者還要好，在另一項研究中，輸注了CIK細(xì)胞的11例患者中，有3例接受同種異基因移植者完全康復(fù)。11例中觀察到4例急性移植物抗宿主病(1級和2級)，2例進(jìn)展為慢性移植物抗宿主病[22]。

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