中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)制的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

康宜兵

關(guān)鍵詞：潰瘍性結(jié)腸炎；中醫(yī)藥治療機(jī)制；綜述

中圖分類號(hào)：R574.62文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2015）06-0102-03

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種主要累及直腸、結(jié)腸黏膜的慢性非特異性炎癥，屬炎癥性腸病范疇。臨床上以腹痛、腹瀉、黏液血便、里急后重為主要表現(xiàn)。病因不明、難以治愈、容易復(fù)發(fā)和癌變。隨著生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣的改變，環(huán)境的變化，以及診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步，我國(guó)UC的發(fā)病率逐年增高，逐漸成為消化內(nèi)科的常見疑難疾病。2004年亞太地區(qū)UC處理共識(shí)意見指出在我國(guó)UC的患病率為11.6/10萬。有關(guān)資料顯示，UC發(fā)病率在我國(guó)有上升趨勢(shì)。中醫(yī)藥治療取得了等同或優(yōu)于西醫(yī)治療的成效，同時(shí)也對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究?，F(xiàn)將近年來的研究進(jìn)展綜述如下。

1炎性因子

李進(jìn)等將64只雄性Wistar大鼠用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇溶液灌腸誘導(dǎo)UC模型，UC 模型組第1、3、7、14 d大鼠結(jié)腸組織學(xué)評(píng)分均明顯升高，結(jié)腸組織MPO活性明顯增高，IL21β，IL210mRNA 相對(duì)于GAPDH的表達(dá)量均明顯增高[1]。遲莉麗等采用2，4，6-三硝酸苯磺酸復(fù)制UC模型，各試驗(yàn)組大鼠結(jié)腸黏膜均有不同程度的炎癥修復(fù)、潰瘍愈合。結(jié)腸大體形態(tài)和組織學(xué)損傷評(píng)分及MPO活性均不同程度降低，結(jié)腸黏膜中IL1β、IL-8、TNF-α含量也不同程度降低，而IL-10含量升高，與模型對(duì)照組相比有顯著性差異，尤其以安腸愈瘍湯合加味生肌散組最顯著[2]。劉敬軍等建立小鼠UC動(dòng)物模型，白頭翁和丹參單獨(dú)灌腸治療UC的療效顯著，而三七單獨(dú)灌腸治療UC療效不顯著；白頭翁單獨(dú)灌腸治療UC的療效可能是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL24、IFN2C來實(shí)現(xiàn)的[3]。賈志新等采取免疫致敏法制備模型，治療后腸必安組的體重變化、結(jié)腸黏膜損傷度、潰瘍面積、組織病理學(xué)的改變、CRP值方面與模型對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05）；腸必安組在結(jié)腸黏膜損傷度、潰瘍面積、組織病理學(xué)改變方面與陽性對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05）[4]。

2免疫調(diào)節(jié)

榮英蕊等采用TNBS/乙醇混合溶液灌腸制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，泄?jié)峤舛痉侥苊黠@降低大鼠結(jié)腸CMDI評(píng)分，降低NF2κBp65、ICAM21的表達(dá)[5]。陳文剛等采用TNBS/乙醇混合溶液灌腸復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，泄?jié)峤舛痉礁鲃┝拷M大鼠Toll樣受體4及核因子-κB表達(dá)均明顯低于模型組；泄?jié)峤舛痉酱髣┝拷MToll樣受體4及核因子-κB表達(dá)明顯低于柳氮磺胺吡啶組[6]。陳名濤等采用葡聚糖硫酸鈉加乙酸配合飲食加環(huán)境復(fù)合法復(fù)制大腸濕熱型UC大鼠模型，模型組大鼠結(jié)腸組織中NF-κBp65、TLR4的表達(dá)顯著增高（P<0.01），清腸湯各劑量組和SASP組NF-κBp65、TLR4的表達(dá)較模型組明顯降低（P<0.01）[7]。

3調(diào)節(jié)胃腸激素

惠毅等以SD大鼠為研究對(duì)象，采用大承氣湯灌胃+TNBS灌腸誘導(dǎo)UC形成，通過烏梅丸拆方給藥，模型組大鼠結(jié)腸組織VIP升高，SP降低，胃殘留率升高，小腸推進(jìn)率降低，有顯著性（P<0.01），灌胃給藥后，全方組、寒熱并用組、溫?zé)峤M大鼠結(jié)腸組織VIP降低，SP升高，胃殘留率降低，小腸推進(jìn)率升高，補(bǔ)益組大鼠結(jié)腸組織VIP降低，SP升高，有顯著性差異（P<0.01）[8]。朱葉珊等采用TNBS/乙醇溶液灌腸法制作UC大鼠模型，陽性藥對(duì)照組和泄?jié)峤舛痉礁摺⒌蛣┝拷MDAI、ICAM-1積分均較模型對(duì)照組下降（P<0.01）；泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷MDAI較陽性藥對(duì)照組、泄?jié)峤舛痉降蛣┝拷M均下降（P<0.01，P<0.05）。陽性藥對(duì)照組和泄?jié)峤舛痉礁?、低劑量組ICAM-1積分均較模型對(duì)照組降低（P<0.01）；泄?jié)峤舛痉礁?、低劑量組ICAM-1積分均較陽性藥對(duì)照組降低（P<0.05）；泄?jié)峤舛痉礁?、低劑量組之間ICAM-1積分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）[9]。王營(yíng)等采用醋酸直腸刺激法復(fù)制大鼠UC模型，模型組SP、VIP含量明顯增高；合方組與拆方組含量較模型組明顯降低（P<0.05）；辛開組與苦降組無差異（P>0.05）；而與合方組比較，各組均有差異（P<0.05）[10]。

4調(diào)控細(xì)胞凋亡因子

王浩等根據(jù)體重將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、對(duì)照藥組、葛根芩連湯組；采用免疫誘導(dǎo)法（第1、10、17、24d于大鼠雙側(cè)足趾、雙側(cè)腹股溝及背部皮下注射抗原乳化液）復(fù)制UC大鼠模型，UC模型大鼠結(jié)腸潰瘍形成，可伴有炎癥、充血、水腫等病理改變；UC模型大鼠結(jié)腸黏膜Bcl-2水平顯著降低，Bax水平顯著升高（P<0.05）；葛根芩連湯組結(jié)腸黏膜Bcl-2水平顯著升高，Bax水平顯著降低（P<0.05）[11]。馬少丹等采用異種異體結(jié)腸黏膜組織致敏法結(jié)合TNBS/無水乙醇局部灌腸方法建立UC模型，模型組結(jié)腸組織凋亡細(xì)胞明顯增多（P<0.01），久瀉寧顆粒治療后，凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯減少（P<0.01），并明顯降低了凋亡相關(guān)調(diào)控蛋白Fas/Fas-L的表達(dá)（P<0.01）[12]。張濤等采用5%TNBS 100mg·kg 灌腸建模，模型組結(jié)腸黏膜LPL凋亡減慢，中、西藥組均可誘導(dǎo)結(jié)腸黏膜LPL凋亡，中藥組與模型組相比，P<0.05[13]。

5抗氧化及清除氧自由基

王宏偉等采用異種異體結(jié)腸黏膜組織致敏法和乙酸局部灌腸相結(jié)合的方法制造動(dòng)物模型。久瀉靈可明顯降低結(jié)腸組織中MDA水平，升高GSH-Px、SOD的活性，降低病理組織學(xué)評(píng)分[14]。陶弘武等采用TNBS/乙醇法建立潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，大鼠結(jié)腸組織中的MDA含量明顯升高，SOD活性明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；補(bǔ)脾益腸丸組、SASP組、潰結(jié)安康湯組與模型組比較，MDA含量明顯下降，SOD活性明顯增強(qiáng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；潰結(jié)安康湯組與補(bǔ)脾益腸丸組、SASP組比較，MDA含量下降，SOD活性明顯增強(qiáng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）[15]。

6小結(jié)

中藥能下調(diào)致炎細(xì)胞因子（IL-1β、IL-8、TNF-α）和上調(diào)抗炎細(xì)胞因子（IL-10、IFN 2C），從而使免疫功能恢復(fù)。異常的免疫反應(yīng)或正常免疫調(diào)節(jié)的破壞是UC發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞因子（cytokine）是一類生物活性物質(zhì)，是由細(xì)胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白質(zhì)的總稱。UC患者，核因子激活，可使腸道黏膜細(xì)胞、固有層淋巴細(xì)胞和浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，直接或間接造成組織損傷。炎癥發(fā)生時(shí)，先激活的是炎癥細(xì)胞因子IL-1β、TNF2α等。進(jìn)一步激活Th，釋放1L-2、IL-6、IL-8等，當(dāng)這些細(xì)胞因子的過度分泌使機(jī)體免疫平衡被打破時(shí)即出現(xiàn)免疫性疾病，最終引起UC的發(fā)生。細(xì)胞因子可分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、生長(zhǎng)因子和趨化性細(xì)胞因子6類。細(xì)胞因子還可分為促炎因子和抗炎因子2類。正常人群細(xì)胞因子中促炎性因子如白介素-1（IL-1）、IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和炎性抑制因子IL-1ra、IL-4、IL-10、IL-13處于平衡狀態(tài)，如果失去平衡，則會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生。促炎細(xì)胞因子IL21β與抑炎細(xì)胞因子IL210的失衡在TNBS誘導(dǎo)的UC模型大鼠發(fā)病中起重要作用。

中藥抑制腸組織TLR4、NF-κB p65的激活。Toll 樣受體4是免疫系統(tǒng)中的跨膜受體，其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了UC的發(fā)生發(fā)展。NF-κB在免疫及炎癥反應(yīng)方面起著重要作用，有功能活性的NF-κB二聚體大都含p65亞單位，這樣的二聚體具有顯著的促炎活性。Toll樣受體4可通過MyD88途徑及MyD88非依賴途徑，使核因子-κB轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)并活化，釋放多種炎性因子，最終引發(fā)腸道黏膜的異常免疫反應(yīng)。NF-κB是一種具有多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的核蛋白因子，廣泛參與多種基因特別是免疫炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控，影響炎癥反應(yīng)過程[16]，可能在UC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

中藥通過降低胃腸激素的分泌，緩解腸平滑肌痙攣，減慢腸蠕動(dòng)，減少腸分泌減少，緩解腹瀉、腹痛等癥狀。血管活性相關(guān)腸肽（VIP）具有強(qiáng)大的抑制胃腸道平滑肌和括約肌的作用，可抑制胃蠕動(dòng)和膽囊收縮，VIP分泌異?？赡苤率刮改c道動(dòng)力和分泌功能紊亂，從而使分泌物過多，運(yùn)動(dòng)規(guī)律性改變，腸道對(duì)外來刺激敏感性增強(qiáng)，因而導(dǎo)致了腹痛腹瀉等臨床癥狀。P物質(zhì)（SP）為11個(gè)氨基酸組成的多肽，在腸道主要分布于近端小腸和結(jié)腸，它既可以激素的形式，亦可作為神經(jīng)遞質(zhì)參與胃腸道運(yùn)動(dòng)的調(diào)控。VIP和SP 2種物質(zhì)的協(xié)調(diào)作用，是維持胃腸運(yùn)動(dòng)功能的重要機(jī)制之一。ICAM-1 在炎癥中的作用主要是白細(xì)胞的過度激活，這是炎癥腸病病理過程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，而白細(xì)胞停滯并浸潤(rùn)式的血管外滲依賴于炎癥部位白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞膜表面的黏附分子的表達(dá)與功能。ICAM-1作為免疫調(diào)節(jié)因子，通過受配體相互作用，介導(dǎo)白細(xì)胞不同亞群間的接觸和黏附，調(diào)節(jié)白細(xì)胞的功能活性和免疫反應(yīng)。

中藥可能通過誘導(dǎo)結(jié)腸黏膜 LPL凋亡達(dá)到緩解潰瘍性結(jié)腸炎的目的。Bcl-2家族在細(xì)胞凋亡中扮演重要角色，降低線粒體膜的通透性，阻止細(xì)胞色素C進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)[17～18]。一類具有抑制細(xì)胞凋亡的作用，如Bcl-2；另一類具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，如Bax等。通過上調(diào)Bcl-2水平、下調(diào)Bax水平，可能為潰瘍性結(jié)腸炎的療效機(jī)制。Fas /Fas-L為細(xì)胞凋亡發(fā)生的重要途徑。UC發(fā)病時(shí)Fas/Fas-L表達(dá)均顯著升高。通過改善相關(guān)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)達(dá)到治療作用。

中藥有抗氧化和清除氧自由基的作用。GSH-Px的作用是催化還型谷胱甘肽生成氧化型谷胱甘肽，并能使有害的過氧化物還原為無害的羥基化合物，從而保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能免受過氧化氫的氧化損傷，因此，GSH-Px活性的變化也可反映機(jī)體抗氧化能力的變化，而脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的中間產(chǎn)物MDA間接反映機(jī)體內(nèi)細(xì)胞操作的輕重和脂質(zhì)過氧化的程度。SOD能抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，清除超氧陰離子，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，其活性的高低常間接地反映了機(jī)體清除自由基的能力。參考文獻(xiàn)：

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（收稿日期：2015-02-02）