中麻黃總黃酮超聲提取工藝研究

施 洋， 付 曉， 葛 亮

(1新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報編輯部； 2新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)重點實驗室； 3新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院； 烏魯木齊，830011)

中麻黃總黃酮超聲提取工藝研究

施 洋1,2， 付 曉2,3， 葛 亮2,3

(1新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報編輯部；2新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)重點實驗室；3新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院； 烏魯木齊，830011)

目的 研究中麻黃的總黃酮最佳提取工藝。方法 通過正交實驗進行提取工藝優(yōu)選，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法測定中麻黃總黃酮的含量。結(jié)果 超聲提取中麻黃的總黃酮最佳工藝為：超聲提取2次，10倍量75%乙醇，超聲時間為30 min，測得中麻黃的總黃酮含量為0.255%。結(jié)論 該方法簡單、快捷，適用于提取中麻黃中總黃酮。

中麻黃；總黃酮；超聲提取

全世界目前有67種麻黃屬植物，中國有15種及2變種1變型，其主要分布在東北、華北、西北等地，新疆有10種1變型[1]。中麻黃(EphedraintermediaSchrenk)為麻黃科(Ephedraceae)麻黃屬(Ephedra)多年生草本狀灌木，主要生長于各種干旱荒漠、沙灘地域以及干旱、半干旱山中，分布于我國新疆、青海、甘肅等省區(qū)，蒙古、俄羅斯等國家也有分布[2-4]。本課題組前期預(yù)試驗表明，中麻黃中可能含有多糖類、苷類、黃酮類、生物堿、蒽醌類、酚類等[5-9]。目前對于中麻黃總黃酮類成分的研究報道較少，而其又是活性成分。本實驗擬采用正交實驗優(yōu)選中麻黃總黃酮最佳提取工藝，為新疆民族特色藥物的研究及開發(fā)利用提供相關(guān)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Cintra40可見紫外分光光度計(澳大利亞GBC公司)，KQ-400DB型數(shù)控超聲器(昆山市超聲儀器有限公司)，梅特勒AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。中麻黃采自新疆烏魯木齊市化肥廠附近的麻黃灘，經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院李永和主任藥師鑒定為菊科植物中麻黃(EphedraintermediaSchrenk)的草質(zhì)莖。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，編號：100080-201203)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.00mg，置于容量瓶中，加入70%乙醇，使之溶解，并定容至刻度，搖勻，制成0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精確移取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，加入70%乙醇至6mL，加入5%NaNO2溶液1mL，混勻，放置 6min后加入10%Al(NO3)3溶液1mL，混勻，放置6min后加入5%NaOH溶液10mL，定容至25mL，放置15min，蘆丁在505nm處有最大吸收。以樣品濃度(X)為橫坐標(biāo)，以505nm處的吸光度(Y)為縱坐標(biāo)， 獲得標(biāo)

r=0.999 8。

2.3 測定方法確立精密稱取適量的中麻黃藥材，在相應(yīng)條件下進行提取工藝研究。測定方法按照“2.2”項下方法進行操作，并根據(jù)方程計算樣品溶液中總黃酮含量。

2.4 提取工藝研究經(jīng)過單因素考察實驗，明確提取次數(shù)為2次。正交實驗中考察因素為(A)加醇倍量、(B)乙醇濃度、(C)超聲時間，并根據(jù)單因素考察結(jié)果確定相關(guān)水平，相關(guān)因素水平表見表1；正交實驗設(shè)計采用L9(34)正交表，選擇總黃酮含量為評價指標(biāo)，進行最佳工藝優(yōu)選，實驗安排見表2。數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析用統(tǒng)計軟件SPSS18.0，方差分析結(jié)果見表3。直觀分析法表明最佳提取工藝為A2B2C3，即用10倍量75%乙醇，超聲提取2次，超聲時間30 min。方差分析結(jié)果表明: A 因素影響有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，綜合考慮以A2B2C3組合為佳。即用10倍量75%乙醇超聲提取2次，超聲時間30min。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度試驗 精密吸取樣品溶液1mL于25mL容量瓶中，按照“2.2”項下標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的操作方法，重復(fù)測定6次，測定吸光度。結(jié)果RSD為0.18%，表明此方法精密度良好。

表1 因素水平考察表

表2 L9(34)正交實驗表

表3 方差分析表

2.5.2 重復(fù)性試驗 準(zhǔn)確稱取中麻黃藥材1g，按照最佳提取工藝平行制備6份樣品，測定其總黃酮含量。結(jié)果RSD為0.98%，表明此方法具有較好的重復(fù)性。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗 精密吸取樣品溶液1mL置于25mL容量瓶中，按照測定方法項處理后，分別于0、20、40、60、80、120min時測定吸光度，計算總黃酮含量。結(jié)果RSD為0.98%，表明樣品溶液在120min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.4 加樣回收率試驗 取已知總黃酮含量的中麻黃6份，每份1g，分別精密加入蘆丁對照品溶液適量，按照最佳提取工藝制備樣品并進行測定、計算。結(jié)果平均回收率為98.34%，RSD為1.27%。

2.6 驗證試驗準(zhǔn)確稱取中麻黃細粉3份各1g，采用10倍量75%乙醇超聲提取2次，每次30min,結(jié)果測得樣品中總黃酮含量分別為0.261 5%、0.256 5%、0.248 5%，平均含量為0.255 0%,表明該工藝較穩(wěn)定。

3 結(jié)論

超聲輔助提取法是近些年來迅速興起的一項新技術(shù)，目前已被廣泛用于植物中黃酮類成分的提取。關(guān)于中麻黃中總黃酮提取工藝研究未見報道，本研究采用正交試驗優(yōu)選中麻黃總黃酮最佳提取工藝，為開發(fā)利用新疆特色藥物中麻黃提供理論依據(jù)。本實驗采用分光光度法測定中麻黃中總黃酮的含量，其方法學(xué)考察均符合相關(guān)要求。本實驗結(jié)果可為中麻黃的質(zhì)量評價提供相關(guān)參照。

[1] 新疆植物志編委會.新疆植物志(第一卷)[M].烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社,1992:98-100．

[2] 林凱.麻黃藥材的指紋圖譜研究及其生物堿含量測定研究[D].重慶:重慶醫(yī)科大學(xué),2006．

[3] 周明冬,王果平,李曉瑾.中麻黃新疆產(chǎn)地生態(tài)氣候適宜性分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013,41(33):12839-12840.

[4] 楊自輝,趙翠蓮.中麻黃的適應(yīng)性及其抗逆性栽培[J].干旱區(qū)資源與環(huán)境,2003,17(1): 119-122．

[5] 葛亮,施洋,田樹革.中麻黃的生藥學(xué)研究[J].西部中醫(yī)藥,2014,27(2):11-13．

[6] 馬毅,晉玲,王振恒,等.HPLC測定不同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿和偽麻黃堿的含量[J].西部中醫(yī)藥,2012,25(7):14-16．

[7] 徐靜,李軍,胡強,等.毛細管電泳/發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光法測定麻黃中麻黃堿與偽麻黃堿含量[J].分析測試學(xué)報,20l2,31 (8):977- 981．

[8] 唐俞芳.淺述麻黃中麻黃堿的提取、分離與檢識[J]．中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育,2011，9 (20)：147-148．

[9] 肖宇航,秦群,荊照政.非水毛細管電泳內(nèi)標(biāo)法測定麻黃中麻黃堿的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2011,8 (35):72-74.

(本文編輯 楊晨晨)

Research on ultrasonic extraction process of total Flavonoids fromEphedraintermediaSchrenk

SHI Yang1,2, FU Xiao2,3, GE Liang2,3

(1DepartmentofJournalEditorial,XinjiangMedicalUniversity;2XinjiangKeyLaboratoryofFamousPrescriptionandScienceofFormulas;3CollegeofTraditionalChineseMedicine,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Objective To study the best optimal process of extracting total flavonoids fromEphedraintermediaSchrenk. Methods Determine the content of total flavonoids, using orthogonal test, by the spectrophotometry in the NaNO2-Al (NO3)3-NaOH system. Results The optimum conditions for extracting the total flavonoids by ultrasonic wave were as follow: ultrasonic time was twice, alcohol concentration was 75%, material-liquid ratio was 1:10 and ultrasonic time was 30 min. the content of total flavonoids extracted was up to 0.255%. Conclusion The optimized method was stable and efficient, and can be used for extracting total flavonoids from Ephedra intermedia Schrenk.

EphedraintermediaSchrenk; total flavonoids; ultrasonic wave extract

新疆維吾爾自治區(qū)科技基礎(chǔ)條件平臺建設(shè)項目(PT1413);新疆維吾爾自治區(qū)重點實驗室科研開放課題基金(XJDX0910-2012-4)

施 洋(1984-)，男，碩士，編輯，研究方向：中藥民族藥活性研究。

葛 亮，男，博士，高級實驗師，研究方向：中藥民族藥制劑研究，E-mail: geliang917@163.com。

R914

A

1009-5551(2015)12-1504-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.12.012

2015-6-17]