IGFBP-3在白藜蘆醇抑制胃癌細(xì)胞增殖過程中的作用

孫海斌，何曉燕，馬梅

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院病理科，鄭州 450000)

IGFBP-3在白藜蘆醇抑制胃癌細(xì)胞增殖過程中的作用

孫海斌，何曉燕，馬梅

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院病理科，鄭州 450000)

目的 研究在白藜蘆醇(Res)抑制胃癌細(xì)胞增殖過程中，胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)表達(dá)的變化。方法 噻唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定Res對(duì)BGC-823細(xì)胞增殖的抑制程度，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)和Western blot技術(shù)檢測(cè)Res處理后BGC-823細(xì)胞中IGFBP-3表達(dá)變化，siRNA技術(shù)沉默IGFBP-3基因表達(dá)，MTT法觀察Res對(duì)BGC-823細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定各組細(xì)胞凋亡率。結(jié)果 Res能夠抑制BGC-823生長(zhǎng)，經(jīng)20，40，80，160 μmol·L-1Res處理后，細(xì)胞存活率分別為(82.35±10.65)%，(74.30±12.36)%，(62.80±14.66)%，(50.75±11.14)%。Res刺激后，IGFBP-3表達(dá)水平升高，與對(duì)照組比較，IGFBP-3 mRNA水平增高2.96 倍(P<0.05)， IGFBP-3蛋白水平變化與其mRNA一致。siRNA技術(shù)沉默IGFBP-3表達(dá)后，160 μmol·L-1Res刺激BGC-823細(xì)胞，細(xì)胞存活率下降(78.5±9.86)%，但高于同濃度下Res刺激的未經(jīng)IGFBP-3沉默的BGC-823細(xì)胞(P<0.05)。IGFBP-3沉默后，160 μmol·L-1Res處理后BGC-823細(xì)胞凋亡率(20.13±9.12)%，明顯低于未經(jīng)IGFBP-3沉默的BGC-823細(xì)胞[(35.48±11.12)%]，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 Res可以抑制BGC-823細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡。該機(jī)制涉及IGFBP-3高表達(dá)。

白藜蘆醇；胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3；BGC-823細(xì)胞

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，具有容易轉(zhuǎn)移、預(yù)后較差的特點(diǎn)。目前胃癌的治療方式主要包括手術(shù)、化學(xué)治療(化療)、放射治療、靶向治療[1]。但前3種治療方式對(duì)機(jī)體損傷較大，因此，高效、具有選擇性、對(duì)機(jī)體損傷小的靶向治療倍受關(guān)注。在此背景下，針對(duì)特定信號(hào)通路或者轉(zhuǎn)錄因子且可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物越來越受重視[2]。白藜蘆醇(resveratrol，Res)是從植物白藜蘆的根中提取的酚類物質(zhì)，也存在于葡萄等植物中，具有保護(hù)神經(jīng)、保護(hù)血管、抗氧化、抗炎、抗癌等功能[3-4]。研究表明，Res可以抑制胃癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、鼻咽癌細(xì)胞增殖[5-7]，但其抑制細(xì)胞增殖的具體機(jī)制尚不明確。胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3(insulin-like growth factor binding protein-3，IGFBP-3)是胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor-1，IGF-1)特異性結(jié)合蛋白，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的作用。既往研究表明，IGFBP-3可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡[8]，但I(xiàn)GFBP-3與胃癌細(xì)胞凋亡關(guān)系的報(bào)道筆者較少見到。筆者在本研究中假設(shè)Res抑制胃癌細(xì)胞BGC-823增殖的機(jī)制與IGFBP-3有關(guān)，探討Res處理后BGC-823細(xì)胞中IGFBP-3表達(dá)水平的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 Res(Sigma公司，批號(hào)：R5010，純度>99%)，BGC-823細(xì)胞株(購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所，批號(hào)：TCHu 45)。RPMI-1640培養(yǎng)液(賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司，批號(hào)：31800022)，胎牛血清(杭州四季青生物制品有限公司，批號(hào)：sc-224480)，噻唑藍(lán)(methyl thiazoly tetrazolium，MTT)試劑(Sigma公司，批號(hào)：M2128)，RNAiso Plus Kit[寶生物工程(大連)有限公司，批號(hào)：D9108A]，PrimeScript?RTreagent Kit(寶生物工程有限公司，批號(hào)：RR037Q)，凋亡檢測(cè)試劑盒(Sigma公司，批號(hào)：APOAF-20TST)，SYBR?Premix EX TaqⅡ(寶生物工程有限公司，批號(hào)：RR420L)，Dy-Light 800 紅外二抗(KPL實(shí)驗(yàn)技術(shù)公司，批號(hào)：AA0454)，放射免疫沉淀分析(radio immunoprecipitation assay,RIPA)裂解液(北京普利萊生物技術(shù)公司，批號(hào)：C1053)，雙喹啉-4-羧酸二鈉鹽(bicin choninic acid,BCA)蛋白定量分析盒(北京普利萊生物技術(shù)公司，批號(hào)：P1511)，小鼠抗人IGFBP-3多克隆抗體(santa cruz公司，批號(hào)：sc-374365)，小鼠抗人甘油醛-3-磷酸脫氨酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)多克隆抗體(santa cruz公司，批號(hào)：sc-365062)，siRNA序列(上海英為信生物科技有限公司，批號(hào)：RY-42569)，LipofectamineTM 2000轉(zhuǎn)染試劑(美國(guó)Invitrogen公司，批號(hào)：11668-019)。WD-2102A酶標(biāo)儀(北京六一儀器廠)。乙二胺四乙酸二鈉(Sigma公司，批號(hào)：E6758)；胰酶(Sigma公司，批號(hào)：P7545)。

1.2 細(xì)胞的培養(yǎng) BGC-823細(xì)胞培養(yǎng)采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)于37 ℃，5%二氧化碳(CO2)環(huán)境。采用含0.02%乙二胺四乙酸二鈉(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)的0.25%胰酶消化細(xì)胞并傳代，選取生長(zhǎng)良好的對(duì)數(shù)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Res對(duì)BGC-823細(xì)胞的抑制作用 選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)期細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，并接種于96孔板，細(xì)胞密度1.0×105·mL-1，每孔懸液量100 μL。常規(guī)培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后分為5組，其中一組為對(duì)照組，不做任何處理。其余4組分別暴露于20，40，80，160 μmol·L-1Res中。每組設(shè)5個(gè)平行孔，同時(shí)設(shè)調(diào)零孔。常規(guī)培養(yǎng)24 h后，每孔加入MTT試劑10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。棄去各孔中原有液體，加入二甲基亞砜(dimethyl-sulforide,DMSO)100 μL，置于搖床15 min，使其充分溶解。使用WD-2102A酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在490 nm處的吸光度(A值)。計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率(%)=實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)Res處理后BGC-823的IGFBP-3 mRNA表達(dá)水平 收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液，以1.0×105·mL-1密度接種于6孔板，每孔2.0 mL。細(xì)胞貼壁后分為5組：對(duì)照組和20，40，80，160 μmol·L-1Res處理組。繼續(xù)培養(yǎng)24 h。使用RNA iso裂解試劑提取細(xì)胞總RNA。使用PrimeScript RT 試劑盒對(duì)提取出的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲取cDNA模板。反轉(zhuǎn)錄體系參照試劑盒說明書。使用SYBR Premix Ex Taq II試劑盒對(duì)上述合成的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列見表1。反應(yīng)體系和方案參照試劑盒說明書。選擇GAPDH作為內(nèi)參。使用PCR儀自帶軟件查看并分析反應(yīng)結(jié)果，使用2-△△Ct法處理數(shù)據(jù)，獲取各組IGFBP-3的mRNA相對(duì)表達(dá)情況。

表1 IGFBP-3與內(nèi)參β-actin引物序列

Tab.1 Primer sequence of IGFBP-3 and β-actin

引物引物序列(5′?3′)IGFBP?3ForwardprimerCAGCCAGCGCGCTACAAGTTGACTAIGFBP?3ReverseprimerCTGGGACTCAGCACATTGAGGAGAPDHForwardprimerTGGCACCCAGCACAATGAAGAPDHReverseprimerCTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA

1.5 Western blot檢測(cè)Res處理后BGC-823的IGFBP-3 蛋白表達(dá)水平 收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，并制備細(xì)胞懸液，以1.0×105·mL-1密度接種于6孔板，每孔2.0 mL。細(xì)胞貼壁后，將其分為5組：對(duì)照組，20，40，80，160 μmol·L-1Res處理組。繼續(xù)培養(yǎng)24 h。使用含有1%蛋白酶抑制劑混合物的RIPA蛋白裂解液(每孔500 μL)裂解細(xì)胞提取總蛋白。將總蛋白樣本與上樣緩沖液混勻，煮沸3 min后上樣，每孔上樣量20 μg。使用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳，電壓100 V，時(shí)間1.5 h。隨后轉(zhuǎn)膜，使用醋酸纖維素(nitrocellulose,NC膜)，轉(zhuǎn)膜條件為恒流200 mA，時(shí)間1.0 h。轉(zhuǎn)膜完成后，使用5%脫脂奶粉室溫封閉1 h。分別使用小鼠抗人IGFBP-3抗體(1：500)與小鼠抗人GAPDH抗體(1：1 000)4 ℃孵育過夜。磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffed solution,PBS)洗滌3次，除去未結(jié)合的一抗。Dy-Light 800紅外標(biāo)記的二抗避光孵育膜2 h，PBS洗滌3次，除去多余二抗，遠(yuǎn)紅外成像系統(tǒng)分析蛋白條帶。

1.6 使用siRNA進(jìn)行IGFBP-3的表達(dá)沉默及其對(duì)Res抑制效能的影響 以每孔1×104個(gè)的密度將細(xì)胞接種于無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中，96孔板中常規(guī)培養(yǎng)24 h。使用無(wú)血清RPMI-1640培養(yǎng)液分別稀釋siRNA(終濃度100 nmol·L-1)與LipofectamineTM 2000轉(zhuǎn)染試劑(1：50)，并將稀釋后的siRNA與稀釋后的轉(zhuǎn)染試劑混合(總體積100 μL)，將此混合液充分振蕩后室溫靜置20 min，每孔加入上述混合液100 μL。同時(shí)按此法設(shè)立無(wú)關(guān)序列的siRNA陰性對(duì)照組。加入含10%血清的PRMI-1640培養(yǎng)液100 μL，混合均勻繼續(xù)培養(yǎng)48 h，炎癥IGFBP-3在mRNA水平與蛋白水平的沉默效果。獲取良好沉默效果的細(xì)胞，照“1.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)，分為不做任何處理的對(duì)照組、160 μmol·L-1Res處理的普通BGC-823細(xì)胞組(Res組)、160 μmol·L-1Res處理的IGFBP-3沉默的BGC-823細(xì)胞組(siRNA+Res組)。

1.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 分組同“1.6”項(xiàng)MTT分析，即將細(xì)胞分為對(duì)照組、Res組、siRNA組、siRNA +Res組，培養(yǎng)24 h后，收集細(xì)胞，使用預(yù)冷冰PBS洗滌細(xì)胞，離心后使用Annexin V-FITC凋亡檢測(cè)試劑盒中的緩沖液500 μL 重懸浮細(xì)胞。依次加入Annexin V 5 μL及PI 10 μL，常溫避光靜置10 min后，使用流式細(xì)胞儀分析獲取散點(diǎn)圖，計(jì)數(shù)右上象限和右下象限的百分比之和作為總凋亡率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Res抑制BGC-823細(xì)胞增殖 見圖1。MTT分析顯示，Res可以抑制BGC-823細(xì)胞增殖，且抑制程度呈濃度依賴關(guān)系。40，80，160 μmol·L-1Res處理組細(xì)胞存活率分別為(74.30±12.36)%，(62.80±14.66)%，(50.75±11.14)%，與對(duì)照組[82.35±10.65)%]比較，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

2.2 Res導(dǎo)致BGC-823細(xì)胞IGFBP-3表達(dá)水平增高 與對(duì)照組比較，20，40，80，160 μmol·L-1Res處理組細(xì)胞IGFBP-3 mRNA水平分別提高(1.35±0.03)，(1.86±0.05)，(2.11±0.07)，(2.96±0.08)倍，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。20，40，80，160 μmol·L-1Res處理組BGC-823細(xì)胞IGFBP-3蛋白水平升高，條帶灰度值與對(duì)照組比較，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2，3。

2.3 IGFBP-3沉默緩解了Res對(duì)BGC-823細(xì)胞的增殖抑制 siRNA技術(shù)沉默IGFBP-3表達(dá)后，以160 μmol·L-1Res刺激BGC-823細(xì)胞，細(xì)胞存活率下降為(78.51±9.86)%，高于160 μmol·L-1Res刺激的未經(jīng)IGFBP-3沉默的BGC-823細(xì)胞[(58.32±13.63)%]，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.861，P<0.05)。siRNA處理不影響細(xì)胞生存率[(92.54±14.33)%]。見圖4。

2.4 IGFBP-3沉默對(duì)Res誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響 AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，Res可誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞凋亡。對(duì)照組細(xì)胞凋亡率(7.44±2.01)%，Res處理后，細(xì)胞凋亡率(35.48±11.12)%，siRNA處理組細(xì)胞凋亡率(20.13±9.12)%，siRNA處理組與Res處理組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.913，P<0.05)。表明IGFBP-3沉默可以減輕Res所致BGC-823細(xì)胞凋亡。見圖5。

A.對(duì)照組；B.20 μmol·L-1Res組；C.40 μmol·L-1Res組；D.80 μmol·L-1Res組；E.160 μmol·L-1Res組；與對(duì)照組比較，*1P<0.05

圖1 5組細(xì)胞存活率測(cè)定結(jié)果

A.control； B.20 μmol·L-1Res group；C.40 μmol·L-1Res group；D.80 μmol·L-1Res group；E.160 μmol·L-1Res group；Compared with control，*1P<0.05

Fig.1 Survival rate of five groups of cells

A.對(duì)照組；B.20 μmol·L-1Res組；C.40 μmol·L-1Res組；D.80 μmol·L-1Res組；E.160 μmol·L-1Res組；與對(duì)照組比較，*1P<0.05

圖2 5組細(xì)胞IGFBP-3 mRNA水平測(cè)定結(jié)果

A.control group；B.20 μmol·L-1Res group；C.40 μmol·L-1Res group；D.80 μmol·L-1Res group；E.160 μmol·L-1Res group；Compared with control，*1P<0.05

Fig.2 Relative expression of IGFBP-3 mRNA in five groups of cells

A.對(duì)照組；B.20 μmol·L-1Res組；C.40 μmol·L-1Res組；D.80 μmol·L-1Res組；E.160 μmol·L-1Res組

圖3 5組細(xì)胞IGFBP-3 蛋白表達(dá)變化

A.control group；B.20 μmol·L-1Res group；C.40 μmol·L-1Res group；D.80 μmol·L-1Res group；E.160 μmol·L-1Res group

Fig.3 Expression of IGFBP-3 protein in five groups of cells

3 討論

Res廣泛存在于植物中，毒性較低，有良好的應(yīng)用前景。大量研究認(rèn)為，Res抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，該過程中存在Caspase-3激活。Caspase處于細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的核心位置，激活Caspase-3通過級(jí)聯(lián)反應(yīng)干擾細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，DNA修復(fù)等功能從而誘發(fā)凋亡[9-10]。Res還可通過Fas/FasL途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，機(jī)制還涉及其他多個(gè)凋亡調(diào)控因子[11]。但目前研究結(jié)果還不足以完全解釋Res發(fā)揮凋亡作用的機(jī)制，如Res是如何激活上述因子的機(jī)制還未得到證實(shí)。筆者在研究中假設(shè)IGFBP-3扮演了Res激活凋亡因子的中間角色，即Res首先提高IGFBP-3的表達(dá)水平，通過IGFBP-3再與其他凋亡因子發(fā)生作用。本研究發(fā)現(xiàn)Res處理細(xì)胞后，IGFBP-3的表達(dá)增高，這在一定程度上與之前假設(shè)一致。IGFBP-3是胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白家族的重要成員，可從以下兩個(gè)途徑引起細(xì)胞增殖抑制：首先 IGFBP-3可以與IGF-1特異性結(jié)合，從而減少游離的有活性的IGF-1水平，細(xì)胞由于缺少IGF-1活性，生長(zhǎng)受限[12]。其次，IGFBP-3可以通過其他一些凋亡調(diào)控因子發(fā)揮凋亡作用。例如，IGFBP-3可以影響MAPK通路，MAPKs 家族的成員主要有JNK、ERK、以及P38。這些成員發(fā)生磷酸化激活后，可進(jìn)一步激活相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)凋亡產(chǎn)生促進(jìn)作用[13]。除此之外，IGFBP-3可以加強(qiáng)TGF-β1誘導(dǎo)的p38的活化，從而增加細(xì)胞凋亡，Bcl-2家族、Bad、Bax、NF-κB等凋亡調(diào)控因子與IGFBP-3的關(guān)系也有報(bào)道。既往研究表明，Res促進(jìn)凋亡的過程除了與Caspase家族有關(guān)外，也與MAPKs通路、Bcl-2家族、Bad、Bax、NF-κB等因子相關(guān)[14]。因此，不難假設(shè)Res的抗凋亡作用與IGFBP-3有一定的聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)，在Res誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的過程中，細(xì)胞內(nèi)的IGFBP-3表達(dá)有所增多，提示Res可能通過IGFBP-3參與了對(duì)凋亡的促進(jìn)。通過siRNA技術(shù)沉默IGFBP-3后，Res的增殖抑制作用不明顯，這進(jìn)一步證實(shí)了IGFBP-3在此過程中的作用。但Res如何提高IGFBP-3表達(dá)，IGFBP-3提高后導(dǎo)致哪些下游哪些通路的活化或抑制，目前還無(wú)法解釋，需在后續(xù)研究中探索?？傊?，本研究發(fā)現(xiàn)Res能夠抑制胃癌BGC823細(xì)胞的增殖，并且該過程伴有IGFBP-3表達(dá)增多，IGFBP-3可能在Res抑制腫瘤細(xì)胞增殖的過程中發(fā)揮一定作用。

A.對(duì)照組；B.160 μmol·L-1Res處理的普通BGC-823細(xì)胞組(Res組)；C.未經(jīng)res處理的IGFBP-3沉默BGC-823細(xì)胞組(siRNA)；D.160 μmol·L-1Res處理的IGFBP-3沉默BGC-823細(xì)胞組(Res+siRNA組)；與對(duì)照組比較，*1P<0.05；與20 μmol·L-1Res組比較，*2P<0.05

圖4 IGFBP-3基因沉默后4組細(xì)胞存活率

A.control；B.160 μmol·L-1Res treated non-transfected BGC-823 cells(Res group)；C.IGFBP-3 silence BGC-823 cells(siRNA)；D.160 μmol·L-1Res treated IGFBP-3 silence BGC-823 cells(Res+siRNA)；Compared with control，*1P<0.05；compared with Res group 20 μmol·L-1，*2P<0.05

Fig.4 Survival rate of five groups of cells after IGFBP-3 knockdown

A.對(duì)照組；B.160 μmol·L-1Res處理的普通BGC-823細(xì)胞組(Res組)；C.160 μmol·L-1Res處理的IGFBP-3沉默BGC-823細(xì)胞組(Res+siRNA組)；D.未經(jīng)res處理的IGFBP-3沉默BGC-823細(xì)胞組(siRNA)；與對(duì)照組比較，*1P<0.05；與20 μmol·L-1Res組比較，*2P<0.05

圖5 IGFBP-3基因沉默后4組細(xì)胞凋亡率

A.control；B.160 μmol·L-1Res treated non-transfected BGC-823 cells(Res group)；C.160 μmol·L-1Res treated IGFBP-3 silence BGC-823 cells(Res+siRNA)； D.IGFBP-3 silence BGC-823 cells(siRNA)；Compared with control，*1P<0.05；compared with Res group 20 μmol·L-1，*2P<0.05

Fig.5 Apoptosis rate of four groups of cells after IGFBP-3 knockdown

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DOI 10.3870/yydb.2015.03.009

Effect of IGFBP-3 in the Inhibition of Gastric Carcinoma Cells Proliferation by Resveratrol

SUN Haibin， HE Xiaoyan，MA Mei

(DepartmentofPathology，theFifthAffiliatedHospitaltoZhengzhouUniversity，Zhengzhou450000，China)

Objective To study the expression of insulin like growth factor binding proteins 3 (IGFBP-3) during inhibition of resveratrol (Res) on cell proliferation. Methods The inhibitory effect of Res on BGC-823 cells was determined by MTT method; Real-time qRT-PCR and western blot were applied to detect the expression of IGFBP-3 in Res-treated BGC-823 cells.In addition, cytometry was used to determine the proliferation and apoptosis of Res-treated BGC-823 after knockdown of IGFBP-3 by siRNA. Results Upon Res (20，40， 80 and 160 μmol·L-1) treatment，the viability of BGC-823 cells was (82.35±10.65)%，(74.30±12.36)%，(62.80±14.66)% and (50.75±11.14)%， respectively.The mRNA and protein expression of IGFBP-3 elevated as high as 2.96-fold compared to the control group (P<0.05).The cell viability of BGC-823 cells with IGFBP-3 knockdown was significantly higher than that of the wild type (P<0.05) only at high Res concentration (160 μmol·L-1).Meanwhile，IGFBP-3 knockdown led to a significant decrease on cell apoptotic rate by Res (160 μmol·L-1) [(20.13±9.12)% vs (35.48±11.12)%，P<0.05)]. Conclusion Res can inhibit BGC-823 cell proliferation and promote cell apoptosis, the underlying mechanism of which may be related to the overexpression of IGFBP-3 in BGC-823 cells.

Resveratrol; insulin like growth factor binding proteins 3 (IGFBP-3); BGC-823 cell

2014-01-08

2014-02-10

孫海斌(1963-)，男，河南鄭州人，副主任醫(yī)師，學(xué)士，主要研究方向：腫瘤病理。E-mail：sunhb5h@163.com。

何曉燕(1985-)，女，河南鄭州人，主治醫(yī)師，碩士，主要研究方向：腫瘤病理。E-mail：he_xiaoyan2010@163.com。

R286；R965

A

1004-0781(2015)03-0317-05