衰老模型聯(lián)合β－淀粉樣蛋白1－42建立大鼠阿爾茨海默病模型研究

張淑萍，劉璐，王秀梅，黃作義，宣兆博，楊麗敏，吳成吉，劉文娟

·論著·

衰老模型聯(lián)合β－淀粉樣蛋白1－42建立大鼠阿爾茨海默病模型研究

張淑萍，劉璐，王秀梅，黃作義，宣兆博，楊麗敏，吳成吉，劉文娟

目的以3月齡大鼠用D－半乳糖制作衰老模型后聯(lián)合β－淀粉樣蛋白1－42(Aβ1－42)制作模擬程度更高、更理想的阿爾茨海默病(AD)大鼠模型。方法2013年3月—2014年3月選取SD清潔級(jí)雄性3月齡大鼠60只，12月齡大鼠40只，通過(guò)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)后，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組:3月齡假手術(shù)組20只、3月齡對(duì)照組20只、3月齡造模組20只、12月齡對(duì)照組20只、12月齡造模組20只。3月齡造模組大鼠采用D－半乳糖皮下注射制作衰老模型，觀察一般狀態(tài)、體質(zhì)量變化，檢測(cè)血中超氧化物歧化酶(SOD)及脂質(zhì)過(guò)氧化物(MDA)表達(dá)水平。3月齡造模組與12月齡造模組大鼠采用Aβ1－42腦內(nèi)海馬區(qū)注射制作AD模型，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試各組大鼠逃避潛伏期和航行距離，觀察各組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)改變，對(duì)比3月齡對(duì)照組、3月齡造模組與12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)。結(jié)果大鼠體質(zhì)量比較，造模與時(shí)間有交互作用(P＜0．05);3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠組間體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);時(shí)間間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠第4、5周體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);3月齡對(duì)照組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=85．302，P＜0．05);3月齡造模組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1．371，P＞0．05)。3月齡造模組和12月齡對(duì)照組大鼠血清SOD水平較3月齡對(duì)照組降低，MDA水平較3月齡對(duì)照組升高(P＜0．05);3月齡造模組與12月齡對(duì)照組大鼠血清SOD、MDA水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。3月齡造模組、12月齡造模組大鼠逃避潛伏期和航行距離較3月齡假手術(shù)組、3月齡對(duì)照組和12月齡對(duì)照組延長(zhǎng)(P＜0．05)。組織病理學(xué)檢查示，各造模組海馬CA1區(qū)可見(jiàn)神經(jīng)元受損，呈現(xiàn)退行性改變，細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，線(xiàn)粒體塉消失。3月齡造模組和12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)較3月齡對(duì)照組降低(P＜0．05);3月齡造模組與12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。結(jié)論以3月齡大鼠通過(guò)皮下注射D－半乳糖制作衰老模型的基礎(chǔ)上，在大鼠雙側(cè)海馬區(qū)注射Aβ1－42制備的AD模型，更能耐受后續(xù)抗AD藥物的干預(yù)實(shí)驗(yàn)。

阿爾茨海默病;D－半乳糖;淀粉樣β肽類(lèi);模型，動(dòng)物

張淑萍，劉璐，王秀梅，等．衰老模型聯(lián)合β－淀粉樣蛋白1－42建立大鼠阿爾茨海默病模型研究［J］．中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18(36):4459－4463．［www．chinagp．net］

Zhang SP，Liu L，Wang XM，et al．Building rat Alzheimer disease model by combining aging model andβ－amyloid peptide 1－42［J］．Chinese General Practice，2015，18(36):4459－4463．

中國(guó)已步入老齡化社會(huì)，癡呆的發(fā)病率逐年遞增，阿爾茨海默病(AD)作為癡呆的主要類(lèi)型，占癡呆總數(shù)的70%［1］。目前治療AD無(wú)特效藥物，不能治愈，僅能緩解病情［2］。AD發(fā)病機(jī)制尚不清楚，有多種學(xué)說(shuō)試圖闡明其病因:膽堿能性假說(shuō)、淀粉樣蛋白質(zhì)假說(shuō)、微管相關(guān)蛋白質(zhì)假說(shuō)及最新提出的軸突漏假說(shuō)［3］等。學(xué)者們建立了多種制作AD模型的方法，靈長(zhǎng)類(lèi)存在記憶、認(rèn)知功能障礙的老年動(dòng)物過(guò)于昂貴，數(shù)量太少［4］。慢性缺血癡呆模型制作比較簡(jiǎn)單，但病理改變廣泛，不適于做AD模型，以自然衰老為基礎(chǔ)的AD動(dòng)物模型存在記憶、認(rèn)知功能障礙，但老年大鼠較難得到，實(shí)驗(yàn)?zāi)褪苣芰Σ?，因此在幼鼠致衰老基礎(chǔ)上制作AD模型更為理想。制作衰老模型的研究中，有代謝學(xué)說(shuō)、免疫系統(tǒng)退化學(xué)說(shuō)和自由基學(xué)說(shuō)［5］等。代謝學(xué)說(shuō)是我國(guó)學(xué)者最早提出的致衰老學(xué)說(shuō)［6］，認(rèn)為在限定時(shí)間內(nèi)給予動(dòng)物注射大劑量D－半乳糖使其達(dá)到較高水平進(jìn)而出現(xiàn)代謝紊亂、細(xì)胞腫脹和功能障礙，達(dá)到衰老模型標(biāo)準(zhǔn)［7］。海馬和皮質(zhì)出現(xiàn)大量的細(xì)胞外老年斑(SP)和細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFT)是AD的主要病理學(xué)特征。β－淀粉樣蛋白(Aβ)為SP的主要成分，Aβ的生成和蓄積是AD發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［8］。鑒于此，本實(shí)驗(yàn)以皮下注射D－半乳糖制作大鼠衰老模型為基礎(chǔ)聯(lián)合Aβ1－42，獲得模擬程度高、更耐受實(shí)驗(yàn)的AD大鼠模型。

1材料與方法

1．1主要試劑Aβ1－42的配制:稱(chēng)取Aβ1－42 10 g溶于無(wú)菌0．9%氯化鈉溶液，稀釋并定容至1 000 ml。恒溫水浴箱中37℃孵育5 d，使其聚合成凝集狀態(tài)。Aβ在可溶狀態(tài)下是相對(duì)無(wú)毒的，但Aβ轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗軤顟B(tài)是AD發(fā)病中的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)［9］。

1．2模型制作2013年3月—2014年3月選取Sprague Dawley(SD)清潔級(jí)雄性3月齡大鼠60只，體質(zhì)量320～380 g，12月齡大鼠40只，體質(zhì)量350～420 g，由長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào)scxk (吉)－2013－0006，均在佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)，自由飲食，明暗各12 h。而后進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，將大鼠面向池壁從東南西北4個(gè)方向放入水中，計(jì)算大鼠在120 s內(nèi)找到平臺(tái)的時(shí)間，若大鼠超過(guò)120 s仍未找到平臺(tái)，則由實(shí)驗(yàn)操作者引導(dǎo)大鼠至平臺(tái)后重新實(shí)驗(yàn)，若仍不能找到則剔除。每天訓(xùn)練3次，共訓(xùn)練2 d。將通過(guò)篩選的大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組:3月齡假手術(shù)組20只、3月齡對(duì)照組20只、3月齡造模組20只、12月齡對(duì)照組20只、12月齡造模組20只。3月齡造模組大鼠頸背部皮下注射D－半乳糖0．125 g·kg－1·d－1，連續(xù)40 d，建立衰老模型［10］。3月齡假手術(shù)組大鼠頸背部皮下注射等量0．9%氯化鈉溶液，3月齡對(duì)照組大鼠不做處理。監(jiān)測(cè)注射期間3月齡對(duì)照組及3月齡造模組大鼠的一般狀態(tài)及體質(zhì)量變化，40 d后選取3月齡對(duì)照組、3月齡造模組及12月齡對(duì)照組大鼠各10只，10%水合氯醛麻醉，心腔穿刺取血，測(cè)血清中超氧化物歧化酶(SOD)及脂質(zhì)過(guò)氧化物(MDA)表達(dá)水平。將3月齡造模組和12月齡造模組大鼠固定于大鼠立體定位儀上，頭頂正中做縱向切口，以前囟為基準(zhǔn)，從正中旁2．2 mm前囟后3．0 mm，以牙科鉆鉆開(kāi)顱骨［11］，用微量注射器吸取孵育好的Aβ1－42，雙側(cè)海馬緩慢注射10 min，留針5 min。在縫合切口處撒少許青霉素粉劑，連續(xù)3 d腹腔注射青霉素4萬(wàn)U;3月齡假手術(shù)組大鼠注射等量0．9%氯化鈉溶液，3月齡對(duì)照組和12月齡對(duì)照組大鼠不做處理。

1．3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)［12］14 d后進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，水迷宮為一不銹鋼圓形水池，直徑120 cm、高50 cm、水深30 cm。池壁標(biāo)明W、S、E、N作為個(gè)4入水點(diǎn)，由此以通過(guò)水池中心的2條垂直交叉線(xiàn)將水池等分為東北、西北、西南、東南4個(gè)象限。任選其中1個(gè)象限，正中放立1個(gè)直徑10 cm、高28 cm的平臺(tái)。各組取10只大鼠頭背部用苦味酸標(biāo)記顏色，便于攝像跟蹤記錄。池壁上方懸掛一標(biāo)志物作為近距離視覺(jué)暗示，水池周?chē)幸恍┪恢貌蛔兊膮⒄瘴?，作為遠(yuǎn)距離視覺(jué)暗示，大鼠可憑此來(lái)定位平臺(tái)。自動(dòng)記錄系統(tǒng)包括監(jiān)視器、攝像機(jī)和計(jì)算機(jī)，攝像機(jī)安放在水池上方，與監(jiān)視器和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)相連接。水溫控制在25℃左右，將大鼠面向池壁分別從4個(gè)入水點(diǎn)放入水中，記錄其在120 s內(nèi)尋找到平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)。如果大鼠未找到平臺(tái)，潛伏期算作120 s。而后撤除平臺(tái)，將大鼠從任選的非平臺(tái)象限入水點(diǎn)面向池壁放入水中，記錄大鼠120 s內(nèi)在平臺(tái)象限的游泳距離(航行距離)。

1．4組織病理學(xué)觀察Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)后，每組采用隨機(jī)數(shù)字表法選取5只大鼠，10%水合氯醛麻醉后，開(kāi)胸暴露心臟，找到升主動(dòng)脈并插管至根部，再以4℃的4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(PBS)灌注固定，剝離腦組織，置入4℃冰箱。次日切取視交叉后4 mm小腦之間的部分，即海馬部位的組織塊1 cm3作為電鏡標(biāo)本，浸入2%戍二醛溶液中。固定后超薄切片機(jī)切片，使用枸櫞酸鉛和醋酸鈾染色，透射電鏡拍照。

1．5胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)將3月齡對(duì)照組、3月齡造模組和12月齡造模組大鼠各10只腹腔注射麻醉后，稱(chēng)量每只大鼠的體質(zhì)量，通過(guò)心腔穿刺取血液后解剖大鼠，取出大鼠的胸腺和脾臟，并用電子天平稱(chēng)量胸腺和脾臟的重量，通過(guò)如下公式算出大鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。胸腺(脾臟)指數(shù)=胸腺(脾臟)濕重(g) /體質(zhì)量(g)×100%。

1．6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以(x±s)表示，3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2．1 3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠一般狀態(tài)及體質(zhì)量比較3月齡造模組大鼠造模后精神狀態(tài)逐漸變差，活動(dòng)及進(jìn)食逐漸減少，毛色發(fā)暗發(fā)黃且體質(zhì)量增加緩慢，第4、5周時(shí)體質(zhì)量增加接近停止。大鼠體質(zhì)量比較，造模與時(shí)間有交互作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠組間體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);時(shí)間間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠第4、5周體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);3月齡對(duì)照組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=85．302，P＜0．05);3月齡造模組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F =1．371，P＞0．05，見(jiàn)表1)。

2．2 3月齡對(duì)照組、3月齡造模組與12月齡對(duì)照組大鼠血清SOD、MDA水平比較3月齡對(duì)照組、3月齡造模組與12月齡對(duì)照組大鼠血清SOD、MDA水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);其中3月齡造模組和12月齡對(duì)照組大鼠血清SOD水平較3月齡對(duì)照組降低，MDA水平較3月齡對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);3月齡造模組與12月齡對(duì)照組大鼠血清SOD、MDA水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05，見(jiàn)表2)。提示衰老模型建造成功。

2．3 5組大鼠逃避潛伏期和航行距離比較5組大鼠逃避潛伏期和航行距離比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);其中3月齡造模組和12月齡造模組大鼠逃避潛伏期和航行距離較3月齡假手術(shù)組、3月齡對(duì)照組和12月齡對(duì)照組延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05，見(jiàn)表3)。

2．4各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)3月齡假手術(shù)組、3月齡對(duì)照組和12月齡對(duì)照組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞膜完整光滑，線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)清楚，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)整齊排列。3月齡造模組、12月齡造模組海馬CA1區(qū)可看到神經(jīng)元受損，呈現(xiàn)退行性改變，細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，線(xiàn)粒體塉消失(見(jiàn)圖1)。

圖1各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)(枸櫞酸鉛和醋酸鈾染色，×12 000)Figure 1 Ultrastructure of nerve cells in hippocampus CA1 area of each group

表1 3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量比較(±s，g)Table1 Comparison of bodymassbetween 3－month controlgroup and 3－month model－building group at different time points

表1 3月齡對(duì)照組與3月齡造模組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量比較(±s，g)Table1 Comparison of bodymassbetween 3－month controlgroup and 3－month model－building group at different time points

注:與3月齡對(duì)照組比較，aP＜0．05

組別只數(shù)第1周第2周第3周第4周第5周3月齡對(duì)照組20 325±12 346±16 382±15 417±11 436±18 3月齡造模組20 323±13 336±11 339±12 332±13a327±16aF 值＜0．001 F交互=44．226，F(xiàn)組間=245．633，F(xiàn)時(shí)間=37．337 P值P交互＜0．001，P組間＜0．001，P時(shí)間

表2 3月齡對(duì)照組、3月齡造模組與12月齡對(duì)照組大鼠血清SOD、MDA水平比較(x±s)Table2 Comparison of serum SOD and MDA levelamong3－month control group，3－month model－building group and 12－month control group

表3 5組大鼠逃避潛伏期和航行距離比較(x±s)Table 3 Comparison of escape latency and sailing distance among the five groups

2．5 3月齡對(duì)照組、3月齡造模組與12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較3月齡對(duì)照組、3月齡造模組與12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);其中3月齡造模組和12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)較3月齡對(duì)照組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);3月齡造模組與12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05，見(jiàn)表4)。

表4 3月齡對(duì)照組、3月齡造模組與12月齡對(duì)照組大鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)比較(x±s，g/100 g)Table 4 Comparison of thymus and spleen index among 3－month control group，3－month model－building group and 12－month control group

3討論

如今AD發(fā)病率上升極快，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。在科研中制造理想的衰老后的AD模型勢(shì)在必行。有文獻(xiàn)表明，SD大鼠連續(xù)注射大劑量D－半乳糖可使其行動(dòng)緩慢和學(xué)習(xí)記憶能力下降［13］，腦內(nèi)超氧陰離子自由基水平增高，MDA、脂褐素水平升高，SOD活性降低，加速細(xì)胞凋亡，使機(jī)體出現(xiàn)衰老現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3月齡造模組大鼠與3月齡對(duì)照組比較，血清中SOD水平降低、MDA水平升高，與12月齡對(duì)照組大鼠無(wú)差異，提示3月齡大鼠衰老模型建立成功。

“Aβ級(jí)聯(lián)學(xué)說(shuō)”［14］認(rèn)為，Aβ有極其復(fù)雜的神經(jīng)毒性作用，其生成與清除失衡是細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)的最主要原因［15］。Hardy等［16］在大鼠腦室內(nèi)灌入Aβ，經(jīng)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)證實(shí)，大鼠出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙，結(jié)果顯示，Aβ灌注導(dǎo)致了中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。Aβ主要包括Aβ1－40、Aβ1－42和Aβ25－35等。通常所認(rèn)為的Aβ多是指Aβ1－40或Aβ1－42［17］，黃濤波等［18］研究發(fā)現(xiàn)，Aβ1－40占90%，Aβ1－42占10%，Aβ1－42容易集聚而不易降解，毒性極大，是構(gòu)成AD SP的最主要成分。在AD患者SP形成過(guò)程中，Aβ1－42是啟動(dòng)因素，在模型動(dòng)物腦室、海馬區(qū)注射孵育好的Aβ溶液，可使模型動(dòng)物產(chǎn)生與AD相同的學(xué)習(xí)和記憶能力減低癥狀。所以本實(shí)驗(yàn)在大鼠衰老模型基礎(chǔ)上腦內(nèi)注射Aβ1－42旨在復(fù)制出最接近AD的癡呆模型。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3月齡造模組及12月齡造模組與12月齡對(duì)照組比較，大鼠平均逃避潛伏期和航行距離明顯延長(zhǎng)，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元受損，呈退行性改變，提示造模成功。3月齡造模組和12月齡造模組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)較3月齡對(duì)照組降低，由于12月齡大鼠活動(dòng)及適應(yīng)能力下降，抗應(yīng)激能力較低，在實(shí)驗(yàn)?zāi)褪芊矫婷黠@不如3月齡造模組，不能耐受后續(xù)的抗AD的藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)。其次，3月齡大鼠較12月齡大鼠更容易獲得，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

綜上所述，以3月齡大鼠注射D－半乳糖制作衰老模型后聯(lián)合Aβ1－42建立的AD模型是一種容易獲得且較為理想的動(dòng)物模型，為進(jìn)一步深入研究AD的發(fā)病機(jī)制及治療提供了更好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。腦內(nèi)Aβ的沉積是引起AD退行性病變的重要因素，使學(xué)習(xí)記憶能力下降，但其確切作用機(jī)制還沒(méi)有很明確，有待于以后更深一步的實(shí)驗(yàn)研究。

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Building Rat A lzheimer Disease M odel by Combining Aging M odel andβ－am yloid Peptide 1－42

ZHANG Shu－ping，LIU Lu，WANG Xiu－mei，et al．Department of Neurology，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154002，China

ObjectiveTo build ideal rat Alzheimer disease(AD)modelwith superior simulation on three－month rats using agingmodel built by D－galactose combiningβ－amyloid peptide 1－42(Aβ1－42)．M ethods We enrolled 60 threemonth cleaningmale SD rats and 40 twelve－month rats from March 2013 to March 2014．After the selection by Morris water maze，random number tablemethod was used to divide the subjects into 5 groups:3－month sham－operation group(n=20)，3－month control group(n=20)，3－month model－building group(n=20)，12－month control group(n=20)and 12－monthmodel－building group(n=20)．For 3－month rats，aging model was built using the subcutaneous infection of D－galactose，general state and changes in body mass were observed，and the expression of SOD and MDA in the blood were detected．For 3－month model－building group and 12－month model－building group，AD model was made in brain hippocampus by the injection of Aβ1－42;morris water maze was employed to measure mean escape latency and total sailing distance，morphological changes in neurons of hippocampus in rats of each group were observed．Comparison wasmade in thymus index and spleen index among 3－month control group，3－month model－building group and 12－month model－building group．Results In the comparison of body mass，there was interaction between model building and time with significant differences(P＜0．05);3－month control group and 3－month model building group were significantly different in body mass (P＜0．05);significant differences existed in bodymass at different time points(P＜0．05);3－month control group and 3－month model－building group were significantly different in the bodymass at4 weeks and 5 weeks(P＜0．05);3－month control group had significantly different bodymass at different time points(F=85．302，P＜0．05);3－month model－building group had not significantly different body mass at different time points(F=1．371，P＞0．05)．Compared with 3－month control group，3－month model－building group and 12－month control group were lower in serum SOD level and higher in MDA level (P＜0．05);3－month model－building group and 12－month control group were not significantly different in serum SOD level and MDA level(P＞0．05)．Three－month model－building group and 12－month model－building group had longer escape latency or sailing distance，compared with 3－month sham－operation group，3－month control group and 12－month control group(P＜0．05)．By histopathological examination，neuron damage could be observed in the hippocampus CA1 area of each model－building group with degenerative changes，irregular nucleus morphology，damaged cellular structure，swollen mitochondria and endoplasmic reticulum and disappeared mitochondria ridges．Compared with 3－month control group，3－month model－building group and 12－month model－building group were lower in thymus and spleen index(P＜0．05);3－month model－building group and 12－month model－building group were not significantly different in thymus and spleen index(P＞0．05)．Conclusion After agingmodel was built in 3－month rats by the subcutaneous injection of D－galactose，AD model was builtusing Aβ1－42 in bilateralhippocampus areas，which wasmore tolerant to the following intervention experiments ofanti－AD drug．

Alzheimer disease;D－galactose;Amyloid beta－peptides;Models，animal

R 741

A

10．3969/j．issn．1007－9572．2015．36．012

2015－02－24;

2015－09－01)

(本文編輯:陳素芳)

黑龍江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(C201242)

154002黑龍江省佳木斯市，佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(張淑萍，王秀梅，黃作義，宣兆博，吳成吉，劉文娟);佳木斯大學(xué)(劉璐，楊麗敏)

黃作義，154002黑龍江省佳木斯市，佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;E－mail:blcldxn@163．com