偏頭痛模型大鼠相關(guān)活性物質(zhì)表達(dá)

董曉夢(mèng) 荊龍 陳金波

偏頭痛模型大鼠相關(guān)活性物質(zhì)表達(dá)

董曉夢(mèng) 荊龍 陳金波

目的 研究磷酸化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(the phosphorylated form of the extracellular signal-regulated kinase，p-ERK)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)及環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)在偏頭痛模型大鼠硬腦膜、三叉神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)脊束尾核組織中的表達(dá)及其相關(guān)性，為探討偏頭痛發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。方法 將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、生理鹽水組、硝酸甘油組和電刺激組；硝酸甘油組和生理鹽水組根據(jù)注射后時(shí)間再分別分為30 min、1 h和3 h組；電刺激組再分為電刺激三叉神經(jīng)節(jié)(ESTG)模型組、假手術(shù)組和尼美舒利干預(yù)組。采用免疫組化染色觀察大鼠硬腦膜、三叉神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)脊束尾核p-ERK、CGRP、COX-2的表達(dá)。結(jié)果 (1)硝酸甘油組大鼠硬腦膜、三叉神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)脊束尾核的p-ERK、CGRP、COX-2表達(dá)均明顯高于生理鹽水組(均P<0.01)，ESTG大鼠不同部位組織的p-ERK、CGRP、COX-2表達(dá)均明顯高于假手術(shù)組和空白組(均P<0.01)；(2)p-ERK表達(dá)在注射硝酸甘油后的30 min組均高于1 h組和3 h組，后隨時(shí)間增加其表達(dá)逐漸降低(均P<0.01)；(3)尼美舒利干預(yù)組大鼠不同組織中p-ERK、CGRP、COX-2的表達(dá)均低于ESTG模型組(P<0.05)。結(jié)論 (1)p-ERK、CGRP、COX-2表達(dá)上調(diào)與偏頭痛的炎性反應(yīng)和疼痛敏化有關(guān)，其中p-ERK可能參與偏頭痛早期過程；(2)偏頭痛過程中，p-ERK、CGRP和COX-2蛋白之間有密切聯(lián)系。

偏頭痛；細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)MAP激酶類；降鈣素基因相關(guān)肽；環(huán)氧化酶-2；硝酸甘油模型；電刺激三叉神經(jīng)節(jié)模型；尼美舒利

偏頭痛是一種復(fù)雜的神經(jīng)血管疾病，以發(fā)作性、多為偏側(cè)、中重度、搏動(dòng)樣疼痛、活動(dòng)后加重為特點(diǎn)，患病率為15%[1]。其發(fā)病機(jī)制尚不明確，三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)(trigeminalvascularsystem，TVS)介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎性反應(yīng)和疼痛中樞敏化在偏頭痛的痛覺產(chǎn)生和維持中起重要作用[2-3]，其中硬腦膜(duramater)、三叉神經(jīng)節(jié) (trigeminalganglion，TG) 和腦干三叉神經(jīng)脊束尾核 (spinaltrigeminalnucleuscaudalis，TNC)為TVS關(guān)鍵部位[4-5]。諸多研究證實(shí)，磷酸化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(thephosphorylatedformoftheextracellularsignal-regulatedkinase，p-ERK)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningene-relatedpeptide，CGRP)及環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)參與痛覺機(jī)制和傷害性信號(hào)傳遞，但目前國內(nèi)外對(duì)以上3種物質(zhì)在偏頭痛神經(jīng)源性炎性反應(yīng)和疼痛敏化過程的研究較少?；赥VS理論的經(jīng)典模型-硝酸甘油(nitroglycerin，NTG)模型和電刺激三叉神經(jīng)節(jié)(electricalstimulationofthetrigeminalganglion，ESTG) 模型，較好地反映了偏頭痛的疼痛超敏和神經(jīng)炎性反應(yīng)過程[6]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化技術(shù)，從蛋白水平觀察NTG模型大鼠p-ERK、CGRP和COX-2在硬腦膜、TG和TNC組織中的表達(dá)，研究其在偏頭痛炎性反應(yīng)和疼痛敏化中的作用，并用ESTG模型探討此3種物質(zhì)在偏頭痛中的相互聯(lián)系，為偏頭痛機(jī)制研究和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 60只SPF級(jí)成年雄性SD大鼠(體質(zhì)量280～320g)，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。大鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為空白組(n=6)、生理鹽水組(n=18)、NTG模型組(n=18)和電刺激組(n=18)。NTG模型組和生理鹽水組再根據(jù)最后一次注射后處死時(shí)間隨機(jī)分為30min、1h和3h亞組(每組6只)；電刺激組再隨機(jī)分為ESTG模型組(n=6)、假手術(shù)組(n=6)和尼美舒利干預(yù)組(n=6)。

1.2 主要試劑和儀器 鼠抗p-ERK、羊抗CGRP及兔抗COX-2抗體購自Abcam公司，對(duì)應(yīng)3種二抗MaxVisionTM試劑盒、DAB染色液及蘇木素染色液購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，NTG注射液(5mg/mL，批號(hào)20130504)為北京益民藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，尼美舒利分散片(50mg，批號(hào)131001)購自康芝藥業(yè)。主要儀器包括YLS-9A生理藥理電子刺激儀(濟(jì)南益延科技發(fā)展公司)、ZH-RXZ柔性顱骨鉆及ZH藍(lán)星腦立體定位儀(安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司)、LeicaRM2235石蠟切片機(jī)、OLYMPUSBX51顯微鏡+DP72顯微照相等。

1.3 方法

1.3.1NTG模型：采用皮下注射NTG法[7]造模。大鼠按體質(zhì)量10mg/kg頸部皮下注射NTG，15～30min后大鼠出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前后肢頻繁撓頭、爬籠次數(shù)增多等現(xiàn)象，40～60min時(shí)達(dá)高峰，持續(xù)1～3h后大鼠蜷臥、活動(dòng)減少。每周1次，共5周。生理鹽水組以相同方式注射等劑量生理鹽水。兩組大鼠分別于第5次注射后30min、1h、3h時(shí)將大鼠麻醉，灌注固定，取材。

1.3.2ESTG模型：將大鼠用10%(質(zhì)量濃度)水合氯醛按體質(zhì)量0.4mL/100g腹腔注射麻醉后固定在立體定位儀上，頭頂正中(去毛)皮膚消毒，“十”字切口切開皮膚、肌肉，暴露顱骨。以前囟為基點(diǎn)，在后移3.2mm，旁開3mm處，顱骨鉆鉆直徑為1.5mm孔，然后將電極經(jīng)此孔插入TG(以硬腦膜算起深度約為9.5mm)。調(diào)試好刺激電極，電刺激參數(shù)為周期200ms，幅度10V，波寬5ms，刺激30min[8]。大鼠刺激側(cè)咀嚼肌收縮，口鼻分泌物增多時(shí)為模型制作成功。假手術(shù)組只插電針不刺激，余同上。尼美舒利處理組大鼠進(jìn)行ESTG造模前按體質(zhì)量6mg/(kg·d)給予尼美舒利分散片灌胃，1次/d，持續(xù)7d。最后1次灌胃后1h建立ESTG模型，步驟同上。以上所有操作均在無菌條件下進(jìn)行，操作過程保持動(dòng)作輕柔、環(huán)境安靜，避免強(qiáng)光，室溫保持25℃左右。刺激結(jié)束30min后灌注固定，取材?？瞻捉M不作任何處理，直接麻醉后灌注固定，取材。

1.3.3 免疫組織化學(xué)染色：大鼠經(jīng)10%(質(zhì)量濃度)水合氯醛按體質(zhì)量0.4mL/100g腹腔注射麻醉后，仰臥固定，開胸經(jīng)左心室插管至升主動(dòng)脈灌注37℃ 0.9%(質(zhì)量濃度)生理鹽水300～500mL至右心耳流出液變清、肝臟變白，繼而用4℃ 4%(質(zhì)量濃度)的多聚甲醛磷酸緩沖液先快速灌注200mL，再慢速灌注300mL，至大鼠肝臟變韌，肢體由抽搐變僵直后開顱，取出硬腦膜、TG(ESTG模型組、假手術(shù)組和尼美舒利干預(yù)組只取刺激側(cè))、TNC對(duì)應(yīng)的低位腦干，置于4%(質(zhì)量濃度)的多聚甲醛磷酸緩沖液中固定12～24h后，常規(guī)脫水、包埋、切片(厚度3μm)。

將上述切片烤片，二甲苯脫蠟，梯度酒精復(fù)水，0.01mol/LPBS洗 5min×3次，檸檬酸鹽緩沖液微波爐熱抗原修復(fù)，0.01mol/LPBS洗5min×3次，3%(體積分?jǐn)?shù))H2O2孵育20min(室溫)，PBS洗5min×3次，5%(質(zhì)量濃度)BSA封閉30min(室溫)，加一抗(稀釋倍數(shù)：COX-2、CGRP均為1/350，p-ERK為1/400)4℃過夜，0.01mol/LPBS洗5min×3次，滴加二抗，37℃孵育30min，0.01mol/LPBS洗5min×3次，DAB顯色、蘇木素復(fù)染、鹽酸酒精分化、脫水透明、封片后，顯微鏡下觀察。光鏡(×40)下觀察拍攝(腦膜切片×100)，應(yīng)用ImageProPlus6.0圖像分析系統(tǒng)，每只大鼠取5張切片，每張切片隨機(jī)取6個(gè)視野，對(duì)陽性表達(dá)部分進(jìn)行平均吸光度〔D(λ)〕值測(cè)定，每組至少測(cè)定3次，取均值。

2 結(jié)果

2.1NTG對(duì)p-ERK、CGRP和COX-2表達(dá)的影響 空白組與生理鹽水組p-ERK、CGRP、COX-2在硬腦膜、TG及TNC未見或僅見少量表達(dá)，兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與空白組和生理鹽水組相比，NTG模型組大鼠在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)硬腦膜、TG與TNC組織的CGRP和COX-2均呈強(qiáng)陽性表達(dá)(均P<0.01)，p-ERK陽性細(xì)胞在30min時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)較空白組和生理鹽水組升高(均P<0.01)，且在此時(shí)間點(diǎn)3部位p-ERK表達(dá)分別高于1h組和3h組(均P<0.01)，而COX-2與CGRP的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)間比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)；生理鹽水組與空白組中3物質(zhì)在3時(shí)間點(diǎn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。具體結(jié)果見圖1～6。

2.2 尼美舒利對(duì)p-ERK、CGRP和COX-2表達(dá)的影響 空白組、假手術(shù)組、ESTG組和尼美舒利干預(yù)組間各部位中p-ERK、CGRP和COX-2的表達(dá)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(硬腦膜組織：Fp-ERK=98.34，F(xiàn)CGRP=131.4，F(xiàn)COX-2=99.4；TG組織：Fp-ERK=193.4，F(xiàn)CGRP=227.0，F(xiàn)COX-2=96.61；TNC組織：Fp-ERK=35.55，F(xiàn)CGRP=123.5，F(xiàn)COX-2=114.9；均P<0.01)。兩兩比較，ESTG組各部位組織的p-ERK、CGRP和COX-2表達(dá)均較假手術(shù)組增高(均P<0.01)，而尼美舒利干預(yù)組其表達(dá)均較ESTG組降低(均P<0.05)，但高于假手術(shù)組和空白組(均P<0.01)，假手術(shù)組和空白組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05，圖7)。

p-ERK：磷酸化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶，CGRP：降鈣素基因相關(guān)肽，COX-2：環(huán)氧化酶-2，NTG：硝酸甘油，圖2～7同

圖1 各組大鼠最后一次注射后30 min硬腦膜p-ERK、CGRP和COX-2的表達(dá)(免疫組化，×100)

TG：三叉神經(jīng)節(jié)，圖3～7同

圖2 各組大鼠最后一次注射后30 min TG p-ERK、CGRP和COX-2的表達(dá)(免疫組化，×40)

TNC：三叉神經(jīng)脊束尾核，圖4～7同

圖3 各組大鼠最后一次注射后30 min TNC p-ERK、CGRP和COX-2的表達(dá)(免疫組化，×40)

注：A：硬腦膜組織，B：TG組織，C：TNC組織，圖5～7同；NTG模型組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)各部位組織中p-ERK比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F硬腦膜=139.8，F(xiàn)TG=82.42，F(xiàn)TNC=181.4，均P<0.01)；生理鹽水組(F硬腦膜=1.235，F(xiàn)TG=0.4613，F(xiàn)TNC=0.4333)和空白組(F硬腦膜=0.7114，F(xiàn)TG=0.3329，F(xiàn)TNC=1.929)p-ERK在各時(shí)間點(diǎn)各部位的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)；與同組內(nèi)1 h和3 h時(shí)間點(diǎn)比較，#P<0.01

圖4 各組注射后不同時(shí)間點(diǎn)各部位組織中p-ERK的表達(dá)(免疫組化)

注： NTG模型組各組織部位不同時(shí)間點(diǎn)CGRP(F硬腦膜=0.8455，F(xiàn)TG=0.4945，F(xiàn)TNC=0.9628)和COX-2(F硬腦膜=0.6558，F(xiàn)TG=0.8512，F(xiàn)TNC=0.7731)的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)

圖5 NTG模型組注射NTG后不同時(shí)間點(diǎn)各部位組織中CGRP和COX-2的表達(dá)變化(免疫組化)

注：生理鹽水組各時(shí)間點(diǎn)CGRP比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F硬腦膜=0.2973，F(xiàn)TG=0.2427，F(xiàn)TNC=0.6693，均P>0.05)，COX-2比較亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F硬腦膜=0.7436，F(xiàn)TG=0.4846，F(xiàn)TNC=0.3889，均P>0.05)；空白組各時(shí)間點(diǎn)CGRP比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F硬腦膜=0.3908，F(xiàn)TG=0.4987，F(xiàn)TNC=0.5542，均P>0.05)，COX-2比較亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F硬腦膜=0.3688，F(xiàn)TG=0.7940，F(xiàn)TNC=0.4383，均P>0.05)

圖6 生理鹽水組和空白組注射后不同時(shí)間點(diǎn)各部位組織中CGRP和COX-2的表達(dá)變化(免疫組化)

注：與假手術(shù)組和空白組分別比較，#P<0.01；與ESTG組比較，*P<0.05

圖7 各組大鼠不同組織中p-ERK、CGRP和COX-2的表達(dá)比較

3 討論

偏頭痛發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，TVS的激活起關(guān)鍵作用[1-3,5]。TVS包括三叉神經(jīng)眼支支配的腦膜及其血管、TG、TNC等[5]。偏頭痛發(fā)作時(shí)硬腦膜等傷害感受器上的三叉神經(jīng)無髓C纖維釋放CGRP、P物質(zhì)、神經(jīng)激肽A等，產(chǎn)生神經(jīng)源性炎性反應(yīng)[1]，是偏頭痛發(fā)作時(shí)的主要傷害性刺激[5,9]。皮膚超敏痛(cutaneous allodynia, CA)是偏頭痛慢性化的指標(biāo)之一，是中樞感覺神經(jīng)元超敏化的標(biāo)志，經(jīng)TVS介導(dǎo)[3,5,10]。TG接受來自硬腦膜的疼痛刺激，傳遞至TNC，后者將傷害性刺激向上傳遞至丘腦腹后核、大腦皮質(zhì)，產(chǎn)生痛覺[3,5,9]。因此，神經(jīng)源性炎性反應(yīng)和中樞敏化是偏頭痛的關(guān)鍵反應(yīng)。

細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)是絲裂原活化蛋白激酶的一員，Iwashita等[11]研究證實(shí)p-ERK通過傷害性刺激受體——TRPV1介導(dǎo)偏頭痛痛覺信號(hào)傳導(dǎo)，傳遞傷害信息至外周神經(jīng)末梢和TNC，產(chǎn)生外周和中樞敏化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NTG模型組和ESTG組大鼠組成TVS部分的硬腦膜、TG和TNC中p-ERK表達(dá)均明顯升高，提示其在偏頭痛發(fā)病機(jī)制中具有重要作用；且p-ERK 的表達(dá)在偏頭痛發(fā)作30 min左右時(shí)達(dá)到較高水平，后隨時(shí)間增加其表達(dá)逐漸降低，在3 h左右達(dá)到基礎(chǔ)水平，而CGRP及COX-2在發(fā)作30 min～3 h一直處于相對(duì)較高水平，提示 ERK的磷酸化激活可能參與了偏頭痛的早期發(fā)病過程，而CGRP和COX-2則在維持偏頭痛整個(gè)發(fā)作過程中起重要作用。

CGRP表達(dá)于感受痛覺的腦膜血管的TG細(xì)胞，參與偏頭痛硬腦膜神經(jīng)源性炎性反應(yīng)[2,4]。研究表明，偏頭痛患者血清CGRP水平明顯升高；CGRP可通過激活P2X3基因參與痛覺敏化[12]；其受體拮抗劑CGRP8-37可減弱辣椒辣素誘導(dǎo)的TVS痛覺過敏[13]。COX-2是合成前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)的重要限速酶，PGE2不僅是一種周圍炎性反應(yīng)介質(zhì)，更參與中樞疼痛信號(hào)傳導(dǎo)[14-15]，臨床上常用COX-2抑制劑(如尼美舒利等)治療偏頭痛。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NTG模型組和ESTG組中，硬腦膜、TG及TNC上都呈現(xiàn)CGRP和COX-2的高表達(dá)，從蛋白水平證實(shí)了CGRP和COX-2在TVS介導(dǎo)的痛覺敏化和炎性反應(yīng)中具有重要作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)CGRP在硬腦膜的表達(dá)多集中在腦膜血管周圍肥大細(xì)胞處，這可能與CGRP參與偏頭痛過程肥大細(xì)胞脫顆粒釋放炎性反應(yīng)介質(zhì)從而進(jìn)行傷害性信號(hào)傳遞[5]有關(guān)。COX-2在正常組織表達(dá)較少，在炎性反應(yīng)組織中則呈高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)中NTG模型組與生理鹽水組相比、ESTG組與假手術(shù)組相比，硬腦膜COX-2表達(dá)明顯升高，進(jìn)一步證實(shí)偏頭痛硬腦膜神經(jīng)源性炎性反應(yīng)的存在。

本實(shí)驗(yàn)通過特異性COX-2抑制劑尼美舒利干預(yù)ESTG模型大鼠，結(jié)果顯示COX-2水平被明顯抑制的同時(shí)，p-ERK和CGRP的水平也較ESTG組降低，提示尼美舒利可能通過抑制COX-2抑制了部分p-ERK和CGRP的表達(dá)，由此推測(cè)，在偏頭痛過程中，COX-2與p-ERK、CGRP的表達(dá)存在某種聯(lián)系。尼美舒利組3種物質(zhì)的表達(dá)仍較空白組和假手術(shù)組高，考慮與尼美舒利劑量不足有關(guān)。結(jié)合Neeb等[16]研究結(jié)果，作者認(rèn)為，在偏頭痛過程中，COX-2可通過合成PGE2進(jìn)一步激活三叉神經(jīng)元釋放CGRP；而由于p-ERK在偏頭痛中由TRPV1介導(dǎo)，而后者亦可被PGE2激活[11]。因此，COX-2也可以通過合成PGE2促進(jìn)p-ERK的產(chǎn)生?？梢姡^痛過程中COX-2與p-ERK、CGRP之間存在密切聯(lián)系，臨床上COX-2抑制劑不僅是通過抑制COX-2，也抑制p-ERK、CGRP等治療偏頭痛，為COX-2抑制劑在臨床上的使用增加了新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過建立兩種經(jīng)典的偏頭痛大鼠模型研究p-ERK、CGRP和COX-2在偏頭痛炎性反應(yīng)和疼痛中樞敏化中的作用，為偏頭痛治療藥物和發(fā)病機(jī)制的研究提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和靶點(diǎn)。

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(本文編輯：時(shí)秋寬)

Expression of the relevant active substances in rat models of migraine

DONGXiaomeng,JINGLong,CHENJinbo*.

*Department of Neurology, The Affiliated Hospital of Binzhou Medical University，Binzhou Shandong 256603,China

CHENJinbo,Email:chenjinbo6720@126.com

ObjectiveToobservetheexpressionofthephosphorylatedformofextracellularsignal-regulatedkinase(p-ERK),calcitoningene-relatedpeptide(CGRP),andcyclooxygenase-2 (COX-2)inthepathogenesisofmigraineandtheconnectionsbetweenthethreesubstances.MethodsSixtyratswererandomlydividedintofourgroups:blank,normalsaline(NS),nitroglycerin(NTG),andelectricalstimulationgroups.TheNTGgroupandNSgroupwerethenrandomlydividedinto30min,1h,and3hgroupsbytheinjectiontime.Theelectricalstimulationgroupwerethenrandomlydividedintoelectricalstimulationoftrigeminalganglion(ESTG),shamgroup(SO),andnimesulide(NM)groups.Theduramater,TGandTNCwereresectedtodetecttheexpressionofp-ERK,CGRPandCOX-2byimmunohistochemistry.Results(1)ComparedtoNSgroup,theexpressionsofp-ERK,CGRPandCOX-2intheduramater,TGandTNCweresignificantlyenhancedinNTGgroup(P<0.01);andtheexpressionsofp-ERK,CGRPandCOX-2inalltheexaminedtissuesitesinESTGgroupwerealsosignificantlyenhancedcomparedtotheSOandblankgroup(P<0.01);(2)Theexpressionofp-ERKinthe30mingroupwashigherthanthe1hgroupandthe3hgroupafterNTGadministration,thengraduallydecreased; (3)TheexpressionsofthethreesubstancesinNMgroupwerelowerthantheESTGgroup(P<0.05).Conclusions(1)Theup-regulatedexpressionofp-ERK,CGRPandCOX-2isassociatedwiththeneurogenicinflammationandcentralsensitizationofmigraine,andp-ERKpotentiallytookpartintheearlyprocessofit; (2)Thereisacloserelationshipbetweenp-ERK,CGRPandCOX-2duringmigraine.

migrainedisorder;extracellularsignal-regulatedMAPkinases;calcitoningene-relatedpeptide;cyclooxygenase-2;nitroglycerin-inducedmigrainemodel;electricalstimulationofthetrigeminalganglionmodel;nimesulide

10.3969/j.issn.1006-2963.2015.01.009

濱州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(NO.2011ZC0908)

256603濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(董曉夢(mèng)，陳金波)；256603 濱州市人民醫(yī)院特檢科(荊龍)

陳金波，Email：chenjinbo6720@126.com

R747.2

A

1006-2963 (2015)01-0034-07

2014-04-16)