犬皮下注射麻保沙星生物利用度的研究

阮祥春，季 輝，彭 麟，高修歌，張冠軍，江善祥＊

（1.安徽農業(yè)大學動物科技學院，安徽合肥 230036；2.南京農業(yè)大學動物醫(yī)學院，江蘇南京 210095）

氟喹諾酮類藥物被廣泛的應用于各種動物的細菌感染性疾病。麻保沙星是第3代氟喹諾酮類動物專用的抗菌藥物。對絕大多數革蘭陽性菌具有較強的抗菌活性，對革蘭陰性菌更為敏感，對多數厭氧菌則比氧氟沙星有更高的活性，尤其是對陽性芽胞桿菌；一些對林可霉素、強力霉素及磺胺等藥物產生部分耐藥性的病原菌對麻保沙星仍然敏感。臨床上已被用于治療犬的深部和淺表皮膚感染、泌尿道感染、貓的皮膚及軟組織感染、急性上呼吸道感染。另外，麻保沙星對牛的一些致病菌如溶血性巴氏桿菌、多殺性巴氏桿菌等也有較高活性。麻保沙星在牛、犬［1］、豬［2-3］、羊、鹿［4］、肉雞、兔［5-6］、海龜［7］體內的藥動學特征研究表明，該藥內服及非胃腸道給藥后吸收迅速且完全，分布廣泛，血漿及組織中的濃度高，消除半衰期長，生物利用度較高。通過本試驗研究健康犬皮下注射麻保沙星的藥物動力學及生物利用度，旨在為獸醫(yī)臨床制定合理的給藥方案提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 麻保沙星凍干粉由南京農業(yè)大學獸醫(yī)藥理實驗室自制，規(guī)格：0.1g／瓶，含量：99.2%；氧氟沙星對照品由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供，含量98.2%，批號：H0090912；麻保沙星對照品為上海安譜科學儀器有限公司生產，含量100.1%；乙腈，色譜級為德國CNW公司產品；肝素鈉、三乙胺、磷酸、等為國產分析純。

1.1.2 試驗用動物 健康史賓格犬18只，公母兼有，體重9kg～15kg，由南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供，飼料由江浦農場飼料廠提供，不含任何抗菌藥物。購回后常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水、采食，臨床觀察1周后，做常規(guī)體檢功能正常，臨床健康者用于試驗。隨機分為2組，分別用于靜注、皮下注射給藥的藥動學試驗。試驗前16h起至給藥后4h間禁食，僅自由飲水。

1.1.3 儀器設備 Ailgent 1200型高效液相色譜儀、Sigma3K15型低溫高速離心機為德國Sigma公司產品；WH-3型微型漩渦混合儀為上海滬西分析儀器廠產品；BS-210S型電子分析天平為北京賽多利斯天平有限公司產品；DC12H型氮吹儀為上海安譜科學儀器有限公司產品。

1.2 方法

1.2.1 給藥方案與血樣采集 一組按2mg／kg單次皮下注射麻保沙星凍干粉，即0.2mL／kg，另外一組靜脈注射給藥；空白血樣在給藥前采集，后分別于5、10、15、30、45min，1、1.5、2、4、6、8、12、24、36、48、72h從前肢頭靜脈采血，每次約2mL，分離血漿，-20℃冰箱保存待測。間隔2周后兩組交叉給藥，同樣方法采血。

1.2.2 血漿中麻保沙星濃度的測定 參照Schneider［8］和李云峰［2］報道的方法，并稍作 改動。取300μL含藥血漿加至離心管中，加入10μg／mL的內標物氧氟沙星對照品溶液15μL，加入2mL二氯甲烷，混合渦旋3min。10 000r／min離心10min后，取下層二氯甲烷層，氮吹儀40℃吹干，200μL流動相溶解，混合渦旋2min溶解，12 000r／min離心5min，取上清進樣20μL。色譜條件：色譜柱為Agilent（5μm，4.6×250mm），流動相為乙腈：0.02mol／L磷酸溶液（500mL＋0.5mL三乙胺）＝13.5∶86.5，流速為0.8mL／min，柱溫35℃，檢測波長295nm。在上述色譜條件下能將麻保沙星、氧氟沙星與血漿中其他組分分開，麻保沙星最低檢測限為0.02μg／mL ，定量限為0.04μg／mL。麻保沙星、氧氟沙星的色譜峰保留時間分別為9.3、11.3min（圖1）。經本方法測定，麻保沙星的絕對回收率分別為85%～115%，標準曲線在0.04μg／mL～4μg／mL范圍內（標準曲線方程為Y＝1.25X-0.015 3（R2＝0.999 9））線性關系良好，批內、批間變異系數分別為2.03%和3.77%。

圖1 麻保沙星高效液相色譜檢測方法圖譜Fig.1 The detection method of marbofloxacin with HPLC

1.2.3 方法數據處理 方法學驗證考察數據采用SPSS16.0軟件分析處理；藥動學數據處理及生物等效性檢驗采用3P97藥動學軟件分析，并對生物利用度進行計算。生物利用度（AUC0-t）sc、（AUC0-t）iv分別為皮下注射和靜脈給藥后的藥時曲線下面積。

2 結果

健康犬單劑量皮下注射麻保沙星后，在1h左右達到了最大的血藥濃度，說明麻保沙星給藥后能迅速的被機體組織所吸收。具體的靜脈、皮下不同時間血藥濃度的實測值見表1。靜注給藥的最佳藥物動力學模型為無吸收三室開放模型，肌注及內服給藥的最佳藥物動力學模型均為一級吸收二室開放模型，藥時曲線見圖2。

表1 皮下、靜脈注射后麻保沙星的血藥濃度Table 1 The plasma concertrations of marbofloxacin after subcutaneous and intravenous adminstrations

圖2 皮下、靜脈藥時曲線圖Fig.2 Drug concentration-time curves after subcutaneous and intravenous administrations

根據各血樣測定的數據，利用3P97藥代動力學軟件進行麻保沙星的藥代動力學的分析，所得的參數見表2。本試驗結果顯示，健康犬皮下注射單劑量麻保沙星后，0.97h左右達到峰值，且吸收半衰期為0.19h左右，表觀分布容積（V／F）為1.63L／kg左右，生物利用度（F）達66.72%，表明其吸收較快，分布較廣。

表2 皮下、靜脈注射后麻保沙星的藥代動力學參數Table 2 Pharmacokinetics parameters of marbofloxacin after subcutaneous and intravenous administrations

3 討論

3.1 皮下注射給藥的藥代動力學特征

張玲玲等［9］報道以2.75mg／kg體重比較了口服與肌肉注射麻保沙星2中劑型在犬體內的藥代動力學研究。肌肉注射與口服麻保沙星的藥時，符合一級吸收一室開放模型，與皮下一級吸收二室開放模型有差異，但與日本對蝦肌肉注射和口服在體內動力學模型一致［10］。肌肉注射與口服麻保沙星吸收半衰期為0.52h和0.41h，比皮下注射麻保沙星吸收半衰期為0.19h要長。但是，與泌乳期奶牛肌肉注射0.17h、家兔肌肉注射 0.24h［6］、豬肌肉注射0.27h［2］等報道的相接近。肌肉注射和口服的消除半衰期分別為4.4h和6.25h，小于皮下注射的7.21h，比泌乳期奶牛肌肉注射t1／2ke＝2.53h、家兔肌肉注射t1／2ke＝2.17h［6］的要長，但比豬肌肉注射時t1／2ke＝17.39h［2］要短。本試驗說明皮下注射麻保沙星比肌肉注射和口服的吸收要快，消除要慢。

3.2 檢測方法準確性

喹諾酮類藥物在獸醫(yī)臨床上有著廣泛的應用，其檢測的方法和手段也比較的多，殘留檢測方法發(fā)展的更為迅速。由微生物方法發(fā)展到色譜、單克隆抗體等方法，當初的單一檢測喹諾酮類藥物到喹諾酮類藥物的多殘留檢測［11-12］。本試驗所采用的檢測方法，是在前人的基礎上略微進行了改動，與林仙軍［13］所報道的有差異，但是方法是針對不同的樣品來進行檢測。本方法完全滿足本試驗的要求。

3.3 療效預測

對于氟喹諾酮類等濃度依賴型藥物，根據大量的人及動物體內、體外的研究結果，AUC／MIC值和Cmax／MIC值是預測藥物療效的重要指標，即當AUC／MIC值為100h～125h時，預測有效率可達80%，Cmax／MIC值大于8～10時臨床效果較好［1］。Cmax／MIC有較高的比值就能避免細菌對麻保沙星耐藥性的產生［7］。據報道，麻保沙星對革蘭陰性細菌的 MIC值在0.016μg／mL～0.5μg／mL，對革蘭陽 性 細 菌 的 MIC 值 在 0.18 μg／mL ～0.25μg／mL［14］。因此，皮下注射麻保沙星的對革蘭陰性細菌的 AUC／MIC值為26.26h～820.625h，Cmax／MIC為2.26～70.625之間，而對革蘭陽性細菌的AUC／MIC值為52.52h～72.44h，Cmax／MIC為4.52～6.28之間。說明針對某些革蘭陰性病原菌 MIC50為低于0.131μg／mL，麻保沙星能取得良好的治療，但是按照2mg／kg單次皮下注射對于革蘭陰性細菌的MIC高于0.131μg／mL值及革蘭陽性就不一定能取得很好的療效。此預測只是理論上角度去分析，具體在臨床中的應用，由于耐藥性的出現［15］，還需要針對具體的細菌，根據其 MIC和MBC值來指導臨床實際應用劑量。

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