同期發(fā)情處理在安化本地水牛繁殖的應(yīng)用

彭志剛

（湖南省安化縣滔溪鎮(zhèn)動物防疫站，湖南安化413515）

同期發(fā)情是指利用某些激素制劑人為地調(diào)控并調(diào)整一群雌性動物發(fā)情周期的進程，使之在預(yù)定的時間內(nèi)集中發(fā)情，以便有計劃地、合理地組織人工授精和胚胎移植工作的技術(shù)。不同動物發(fā)情行為有所差異，但其本質(zhì)是體內(nèi)生殖激素相互作用，內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的過程，前列腺素（PG）、HCG、LRH-A3和GnRH等激素能夠能夠調(diào)節(jié)控制性腺激素分泌以及卵泡波的發(fā)育模式，適當(dāng)?shù)膽?yīng)用這些激素以及選擇合適的處理方式，能夠同期發(fā)情的發(fā)情率以及同期化配種的受胎率。

安化縣當(dāng)?shù)厮闉I湖水牛，屬于沼澤型水牛，沼澤型水牛占全球水?？偭康?3%，目前湖南存欄近180萬頭，其中能繁母牛80萬頭。不同牛品種對于同期發(fā)情處理的效果有所差別，同品種牛在不同的生長發(fā)育階段對于同期發(fā)情處理的效果有存在差異。由于水牛喜泡水，污水可能會隨著同期發(fā)情處理中的裝置進入生殖道，造成感染影響同期發(fā)情效果，所以我們需要根據(jù)水牛生殖道外環(huán)境和繁殖生理的差異，深入研究影響水牛發(fā)情的各種因素，制定有效的同期發(fā)情方案。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

所有用于試驗的母水牛為安化縣農(nóng)戶分散飼養(yǎng)。白天為放養(yǎng)為主，夜間少量補飼玉米和干稻草。試驗牛群處理前首先進行直腸檢查，確認子宮、卵巢發(fā)育正常，并詢問其繁殖史，無長期不發(fā)情、不孕、習(xí)慣性流產(chǎn)等生殖疾病的母牛個體。

1.2 時間和地點

試驗時間為2012年10月至2015年3月，試驗地點為安化縣。

1.3 藥品來源

試驗所用激素均為寧波某藥業(yè)公司產(chǎn)品。氯前列醇鈉注射液(Cloprostenol Sodium Injection)，每支2mL含0.2mg。注射用絨促性素（HCG）凍干制劑，每支1 000IU。注射用促黃體素釋放激素A3（LRH-A3）凍干制劑，每支200IU。注射用戈那瑞林（GnRH)凍干制劑，每支 100mg。

1.4 試驗分組

1.4.1 定時輸精法對母水牛同期發(fā)情及受胎率的影響

采用定時輸精法處理程序，第0d肌注GnRH 100mg，第 7d肌注 4mL PG，第 9d肌注 GnRH 100mg。處理組為定時輸精配種，即注射GnRH后18h～20h定時輸精，6h后復(fù)配一次。對照組為觀察發(fā)情后適時輸精（6～12h），6h后復(fù)配一次。觀察記錄同期發(fā)情率和受胎率。

1.4.2 配種后注射HCG、LRH-A3和GnRH對母水牛受胎率的影響

采用兩次PG肌注法，觀察發(fā)情后，第一次配種后肌注 H CG 2 000IU或 LRH-A3 50μg，或GnRH 100mg。未使用HCG、LRH-A3和GnRH為對照組。觀察記錄同期發(fā)情率和受胎率。

1.4.3 同期發(fā)情處理對青年母牛和經(jīng)產(chǎn)母牛發(fā)情率和受胎率的影響

已試驗?zāi)概０辞嗄昴概：徒?jīng)產(chǎn)母牛分組，將之前試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計。研究在同期發(fā)情處理情況下青年母牛和經(jīng)產(chǎn)母牛發(fā)情率和受胎率的差異。

1.5 發(fā)情判斷標(biāo)準和人工授精

母水牛發(fā)情鑒定主要以母牛相互爬跨，外陰腫脹充血，陰道內(nèi)粘膜充血潮紅，并伴有清亮粘液流出并等現(xiàn)象，試驗用牛在激素注射后96h(4d)內(nèi)表現(xiàn)出明顯發(fā)情癥狀即判斷為同期化發(fā)情。試驗配種用精液為湖南省畜牧獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的摩拉水牛冷凍細管精液，解凍后活力為0.3以上，一次輸精量為1支(0.22～0.25mL)。采用直腸把握法子宮頸深部輸精。妊娠檢查在輸精3個月后進行直腸把握或B超孕檢。

1.6 統(tǒng)計分析

本試驗組間差異的顯著性分析均采用SPSS 9.0統(tǒng)計軟件和卡方檢驗(χ2)分析。

2 結(jié)果

2.1 定時輸精法對母水牛同期發(fā)情及受胎率的影響

表1 不同的輸精方式對牛受胎率的影響

采用定時輸精法處理程序進行同期發(fā)情處理。注射GnRH后18h～20h定時輸精的定時輸精法受胎率為23.53%。注射GnRH后觀察發(fā)情癥狀適時輸精處理組受胎率為37.04%。兩組差異顯著（p＜0.05）。詳情見表1。

2.2 肌肉注射HCG、LRH-A3和GnRH對母水牛受胎率的影響

表2 HCG、LRH-A3和GnRH對母水牛受胎率的影響

由表2可以看出，在同期發(fā)情處理后，在第一次配種后注射HCG、LRH-A3或GnRH，受胎率分別為32.43%、29.17%和38.46%。對照組受胎率為21.05%，要顯著低于HCG和GnRH處理組（p＜0.05）。其他各組差異不顯著（p＞0.05）。

2.3 青年牛與經(jīng)產(chǎn)牛在同期發(fā)情效果上的差異研究

表3 青年牛與經(jīng)產(chǎn)牛在同期發(fā)情效果上的差異對比

從表3中看出，青年母牛的同期發(fā)情率為51.52%，顯著低于經(jīng)產(chǎn)牛的73.58%，兩組差異顯著（p＜0.05）。青年母牛的配種受胎率和總體受胎率為47.06%和24.24%，與經(jīng)產(chǎn)牛的46.15%和33.96%差異不顯著（p＞0.05）。

3 討論

3.1 定時輸精法對水牛受胎率的影響

通常所說的定時輸精計數(shù)是按“GnRH+PGF+GnRH+定時人工輸精配種”程序的同期排卵定時輸精（TAI）技術(shù)，這一處理過程又稱作定時輸精程序（Ovsynch/TAI）[1]。定時輸精計數(shù)最早在奶牛上應(yīng)用，但在水牛上相關(guān)的應(yīng)用報道極少。

覃錫勇等（2009）報道，采用“GnRH+PGF+GnRH+16～18 h后人工輸精配種”的同期發(fā)情定時輸精配種程序，夏季發(fā)情率為63.6%，受胎率為16.7%。秋季發(fā)情率為70.8%，受胎率為33.3%[2]。此方法的平均受胎率為25%，低于自然發(fā)情配種和觀察發(fā)情后配種的平均受胎率。

在本研究中，定時輸精法受胎率為23.53%，與覃錫勇報道的水平基本接近。此方法受胎率要顯著低于注射GnRH后觀察發(fā)情癥狀適時輸精處理組的受胎率。歸其原因，我們認為，這與水牛發(fā)情排卵的自身特點有很大的關(guān)系。雖然水牛卵泡的生長發(fā)育與奶牛十分相似，但其在發(fā)情周期中的卵泡波數(shù)量、卵泡波發(fā)生點與黃牛和奶牛差異很大。此外，水牛存在十分顯著的季節(jié)性發(fā)情的特點，即夏季發(fā)情率低（或為隱性發(fā)情）[3]。一般情況下，水牛持續(xù)的發(fā)情時間為16～20h左右，但在夏季發(fā)情時間會明顯縮短，沒有足夠冷配經(jīng)驗的配種員和養(yǎng)殖戶對發(fā)情配種時機很難把握，從而沒有在最佳時機配種，導(dǎo)致錯過一個情期或者受胎率不高。因此，在適當(dāng)?shù)臅r機配種對水牛的受胎率至關(guān)重要。而判斷最佳配種時機的最為有效和準確的方法還是通過外陰部紅腫、粘液變化和相互爬跨。湖南大部分農(nóng)戶的飼養(yǎng)條件下，在青年、經(jīng)產(chǎn)母牛混雜的群體，僅通過GnRH后16～18h配種，很難到達理想的配種效果。

3.2 注射HCG、LRH-A3、GnRH對母水牛受胎率的影響

促性腺激素釋放激素（GnRH）是由下丘腦弓狀核的神經(jīng)內(nèi)分泌小細胞分泌，當(dāng)受到外界性刺激或高級中樞神經(jīng)遞質(zhì)刺激時，可經(jīng)垂體門脈系統(tǒng)進入垂體前葉，促進垂體前葉分泌促黃體素（LH）和促卵泡素（FSH）[4]。LRH-A3（促排 3號）是 GnRH的類似物（GnRH-A），其作用與GnRH相似[4]。在配種前或配種時給母牛注射一定量的外源GnRH及其類似物，可以誘導(dǎo)動物的下丘腦-垂體-性腺軸作用，使垂體釋放LH和FSH。在內(nèi)源性LH在FSH共同作用下，卵巢上的卵泡破裂排卵，從而增加卵母細胞與精子受精的機率，從而可以在一定程度上提高母牛的受胎率。HCG制劑主要以孕婦尿液中提取，生物學(xué)作用類似于LH。在妊娠母體內(nèi)，起到維持妊娠黃體組織的功能。在家畜中注射外源性HCG，可以起到促進卵泡成熟和排卵的作用[5]。

吳師等[6]在水牛配種后注射HCG，平均受胎率為53.58%，對照組的平均受胎率為40.08%，提高了13.5%。蔣如明等[7]在同期發(fā)情母水牛第一次輸精時肌注HCG或LRHA3，均得到了較理想的發(fā)情率和受胎率。

在本試驗中，同期發(fā)情處理后第一次配種后注射HCG和LRH-A3，受胎率均對照組，這與蔣如明等人的研究結(jié)果相近。同時，本研究首次采用100mg的GnRH注射濱湖水牛，受胎率達到了32.43%，比對照組高出了10%以上。說明在注射GnRH對提高濱湖水牛同期發(fā)情后的排卵率和受胎率有一定的效果。

3.3 母牛胎次因素對同期發(fā)情發(fā)情率和受胎率的影響

在水牛的同期發(fā)情處理中，年青牛與經(jīng)產(chǎn)牛是否存在發(fā)情率和受胎率的差異一直是沒有定論。有研究認為青年母水牛在同期發(fā)情處理后，發(fā)情率和受胎率與經(jīng)產(chǎn)母牛沒有顯著差異[8]。原因是青年母牛在達到性成熟后，其生殖道環(huán)境要優(yōu)于經(jīng)產(chǎn)母牛，因此發(fā)情率和受胎率較高。

但也有研究報道，利用集中同期發(fā)情處理方法，經(jīng)產(chǎn)母水牛明顯優(yōu)于處女水牛[7,9]。在本研究中，安化本地水牛青年母牛的同期發(fā)情率為顯著低于經(jīng)產(chǎn)牛的，但受胎率方面沒有顯著差異。我們認為主要原因可能是我們處理的青年水牛中，有一定數(shù)量的個體卵巢仍未完全發(fā)育成熟。為完全性成熟的個體可能對外源性激素不太敏感，因此發(fā)情率不高。同時也有研究認為，母牛年齡并不是判斷適應(yīng)配種的標(biāo)準，而母牛的體重才使判斷是否適宜配種的指標(biāo)。因此，與成熟或經(jīng)常母牛而言，青年母牛的第一次配種后的受胎率較低[10]。

4 結(jié)論

（1）現(xiàn)階段利用定時輸精法應(yīng)用于安化本地水牛同期發(fā)情處理，效果不理想；（2）在安化本地水牛同期發(fā)情處理中，第一次配種后注射一定劑量HCG和GnRH能夠提高受胎率；(3)安化本地水牛經(jīng)產(chǎn)母牛同期發(fā)情處理后發(fā)情率高于青年母牛。

[1]姚國良.定時輸精程序（Ovsynch/TAI）在奶牛繁殖上的應(yīng)用效果[J].中國奶牛,2008,(12):33-35.

[2]覃錫勇,譚正準,黃鍵,等.利用激素生源2+1對水牛同期發(fā)情處理效果的觀察[J].中國牛業(yè)科學(xué),2009,35(4):36-38.

[3]宋黎建.雜交奶水牛發(fā)情排卵規(guī)律與調(diào)控及妊娠診斷技術(shù)研究[D].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文,2012:3-5.

[4]王一涵,田秀娥,江中良,等.GnRH及其類似物在動物繁殖中的應(yīng)用概述[J].中國畜牧雜志，2013,49(3):89-92

[5]張嘉保,周虛.動物繁殖學(xué)（第一版）[M].長春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1999:23-25.

[6]吳師,李華慧,覃現(xiàn)才,等.人絨毛膜促性腺激素（HCG）對雜交黃牛、水牛受胎率的影響[J].畜牧與飼料科學(xué),2011,32(2):66-67.

[7]蔣如明,韋英明,凌澤繼.氯前列烯醇、孕酮陰道栓單獨或結(jié)合其它激素處理本地母水牛后的發(fā)情和受胎情況[J].中國畜牧雜志,2003,39(6):17-18.

[8]貴州畜牧獸醫(yī)研究所.應(yīng)用前列腺素及其類似物對水牛同期發(fā)情試驗初報[J].中國畜牧雜志,1979,(1):15-17.

[9]韋英明,蔣如明,凌澤繼.不同同期發(fā)情方法對水牛發(fā)情和受胎效果的影響[J].中國畜牧雜志,2006,42(1):35-36.

[10]趙開典.影響母牛受胎率的因素 [J].草食家畜,1999,104(3):32-35.