臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中模擬陽性標(biāo)本的制作與應(yīng)用

侯艷香，王曉琴，任吉蓮

(山西醫(yī)科大學(xué)汾陽學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，山西 汾陽032200)

《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)》是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中最基本的課程，基本任務(wù)是采用先進(jìn)的檢驗(yàn)方法，對(duì)離體的血液、尿液、糞便、羊水、腦脊液、漿膜腔積液和脫落細(xì)胞等標(biāo)本進(jìn)行理學(xué)、化學(xué)、顯微鏡形態(tài)學(xué)檢查等，其檢查結(jié)果為了滿足臨床篩檢診斷疾病的需要[1，2]。

臨床典型病理標(biāo)本多具有傳染性，污染大，收集困難，不易保存，不能滿足學(xué)生實(shí)驗(yàn)的需求量?？紤]對(duì)學(xué)生健康的安全，兼顧與臨床標(biāo)本檢測效果的一致性，在多年的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，自制模擬標(biāo)本替代病理性標(biāo)本，收到了相同的教學(xué)效果[3]?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 尿化學(xué)常規(guī)檢查

1.1.1 基礎(chǔ)尿液的制作 稱取氯化鈉1g，尿素17g，磷酸二氫鉀0.25g，磷酸氫二鈉1g，牛肉膏2g(改觀顏色)加蒸餾水至1000 ml，充分混勻。經(jīng)測定pH值7.0，比重1.030，尿八聯(lián)試帶目測陰性，符合正常尿液的標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 蛋白尿定性實(shí)驗(yàn) (1)模擬蛋白尿的制作：在5 杯 100ml基礎(chǔ)尿液中各加入 0.2ml、0.5ml、1.5 ml、4.0ml、8.0ml總蛋白含量為 70g/L 注射液(廠家：中生北控生物科技股份有限公司),充分混勻。(2)蛋白尿加熱乙酸法定性實(shí)驗(yàn)[4]：在試管中加模擬蛋白尿至管高2/3處；用試管夾夾住管口1/3～1/4處，在酒精燈上加熱尿液上1/3段，煮沸即止；輕輕直立試管，在黑色背景下觀察煮沸部分有無渾濁；滴加5%乙酸溶液2～4滴，再煮沸立即觀察結(jié)果；實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 蛋白尿加熱乙酸法定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.1.3 糖尿定性實(shí)驗(yàn) (1)模擬糖尿的制作：在5杯100 ml基礎(chǔ)尿液中各加入 0.15g、0.30g、0.80g、1.60 g、2.50g葡萄糖，充分混勻。(2)糖尿班氏法定性實(shí)驗(yàn)：在試管中加班氏試劑2.0ml，搖動(dòng)試管在酒精燈上加熱至沸騰，觀察試劑有無顏色及性狀變化，若試劑仍為透明藍(lán)色，可進(jìn)行定性實(shí)驗(yàn)；向班氏試劑中加模擬糖尿液0.2ml(約4滴)，充分混勻；繼續(xù)煮沸1～2min，加熱時(shí)注意顏色變化，自然冷卻后觀察結(jié)果；實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

1.1.4 酮尿定性實(shí)驗(yàn)[5](1)模擬酮尿的制作：在3杯100ml基礎(chǔ)尿液中各加入 0.2ml、0.5ml、1.0ml丙酮，充分混勻。(2)酮尿改良Lange(朗格)法定性實(shí)驗(yàn)：在試管中加模擬酮尿2.0ml；稱取30mg亞硝基鐵氫化鈉粉末加入，充分混勻；加入2.0mmol/L乙酸溶液0.5ml，充分混勻；將試管傾斜，沿管壁緩慢加入濃氨水1.0ml，使其覆蓋于上部；靜置后觀察兩液交界面顏色的變化，出現(xiàn)紫色環(huán)且數(shù)分鐘不褪色者為陽性；實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表2 糖尿班氏法定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 酮尿改良Lange法定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.1.5 妊娠尿定性實(shí)驗(yàn) (1)模擬妊娠尿的制作：在100 ml基礎(chǔ)尿液中加入1支5000單位注射用絨毛膜促性腺激素，充分混勻。(2)HCG試帶(膠體金法)定性實(shí)驗(yàn):將測試帶標(biāo)有箭頭的一段插入模擬妊娠尿中，深度不可超過標(biāo)志線，5s后取出平放；5min內(nèi)肉眼觀察結(jié)果，試帶上對(duì)照線和檢測線均為紅色為陽性。若試帶上僅在對(duì)照線位置上出現(xiàn)一條紅色線為陰性，檢測出基礎(chǔ)尿液為陰性；若試帶上對(duì)照線和檢測線均不顯色，表示試帶失效[6]。

1.1.6 尿液有形成分檢查 (1)模擬成分尿的制作：吸取生理鹽水2ml于試管中，加40%甲醛1滴和10μl全血充分混勻，制成紅細(xì)胞懸液。將EDTA-K2抗凝全血2ml(學(xué)生自采測定血比積靜脈血)轉(zhuǎn)為溫氏管中，以2000r/min離心10min后，用滴管吸取白細(xì)胞層于小試管中，加入1ml 2%的冰乙酸(溶解破壞紅細(xì)胞)，混勻后離心，棄上液，用生理鹽水洗滌試管底部的白細(xì)胞2～3次后，加入2ml生理鹽水，制成白細(xì)胞懸液。按基礎(chǔ)尿液：白細(xì)胞懸液：紅細(xì)胞懸液為2:2:1的比例混勻制成模擬成分尿[7]。(2)顯微鏡下模擬成分尿觀察：取模擬成分尿1滴于玻片上，加蓋玻片后，顯微鏡檢查。鏡下觀察到紅細(xì)胞呈雙凹圓盤形，有弱折光性；白細(xì)胞胞質(zhì)清晰透明，核明顯[8]。

1.2 糞便常規(guī)檢查

1.2.1 模擬糞便的制作 稱取雜色面粉2g,用蒸餾水調(diào)成糊狀作為基質(zhì)，添加瓊脂粉、菜泥、肉泥各少許，用竹簽攪拌均勻；用滴管吸取離心后抗凝血溫氏管中的白細(xì)胞層和微量紅細(xì)胞層加入基質(zhì)混勻[9]。

1.2.2 糞便隱血定性實(shí)驗(yàn) 用竹簽挑取少許模擬便于濾紙上；滴加10g/L鄰聯(lián)甲苯胺乙酸溶液和3%過氧化氫各1～2滴于濾紙的標(biāo)本上；加入試劑后2min內(nèi)顯藍(lán)色為陽性。其判斷結(jié)果程度分別為：2min仍不顯色，為陰性；10s顯淺藍(lán)色漸變藍(lán)色為(+)；顯淺藍(lán)褐色，且逐漸加深為(++)；立即顯藍(lán)褐色為(+++)；立即顯藍(lán)黑褐色為(++++)[10]。

1.2.3 顯微鏡下模擬糞便有形成分觀察 在潔凈玻片上滴加1～2滴生理鹽水，用竹簽挑取少許模擬糞便混合制成涂片，涂片的面積應(yīng)占2/3,厚度以能透視紙上字跡為佳；加蓋玻片后置于顯微鏡下觀察結(jié)果，鏡下可見白細(xì)胞、紅細(xì)胞、脂肪滴、食物殘?jiān)瘸煞帧?/p>

1.3 腦脊液常規(guī)檢查

1.3.1 模擬腦脊液的制作 稱取氯化鈉3.0g，氯化鎂 0.3g,氯化鉀 0.1 g，氯化鈣0.2g，碳酸氫鈉 1.0g，葡萄糖0.3 g，磷酸氫二鈉0.2g加蒸餾水至1000 ml，充分混勻制成基礎(chǔ)腦脊液。加入血清5ml和提取的白細(xì)胞懸液的不同量，制成不同陽性程度，充分混合至4℃冰箱保存。

1.3.2 腦脊液蛋白質(zhì)定性實(shí)驗(yàn) (潘迪氏實(shí)驗(yàn))吸取飽和苯酚溶液2ml至試管中；用尖滴管垂直滴加模擬腦脊液標(biāo)本1～2滴；黑色背景下立即用肉眼觀察結(jié)果。若清晰透明，不呈現(xiàn)云霧狀為-；呈灰白霧狀為+；呈云霧狀沉淀++；呈白色絮狀沉淀為+++；立即形成白色凝塊為++++[11]。

1.3.3 顯微鏡下模擬腦脊液檢查 用微量吸管吸取混勻的模擬腦脊液，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中計(jì)數(shù)；以加入白細(xì)胞懸液量的多少，腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)總數(shù)為(0~20)×106/L；白細(xì)胞分類為單個(gè)核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。

2 結(jié)果

模擬尿液、糞便、腦脊液標(biāo)本化學(xué)定性實(shí)驗(yàn)均能顯示出陽性指標(biāo)的現(xiàn)象和顏色變化(+～++++)，顯微鏡下有形成分檢查也均能觀察到細(xì)胞和形態(tài)。

3 討論

《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)》主要是通過陽性標(biāo)本傳遞疾病的信息及提供診斷依據(jù)，是一門實(shí)踐性、技術(shù)性、科學(xué)性很強(qiáng)的專業(yè)課程[12]。實(shí)驗(yàn)教學(xué)中主要培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力和臨床檢驗(yàn)技能，建立涵蓋基本技能實(shí)驗(yàn)、基礎(chǔ)訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新型實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容體系，并在實(shí)踐教學(xué)中互相融合[13]。

采用模擬標(biāo)本替代病理標(biāo)本具有成本低廉、生物安全性好、取材方便、制作簡單、保存時(shí)間長、重現(xiàn)性好、仿真度高的特點(diǎn)，讓學(xué)生自己動(dòng)手制備標(biāo)本和操作實(shí)驗(yàn)，既加強(qiáng)了學(xué)生的實(shí)踐能力和觀察能力，又激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和求知欲望，有利于學(xué)生建立臨床成就感，注重實(shí)用性和應(yīng)用性，與臨床崗位無縫接軌[14]。更重要的是能避免師生與病人體液直接接觸，對(duì)預(yù)防實(shí)驗(yàn)室安全，保障師生健康至關(guān)重要[15]。因此該實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法值得推廣和應(yīng)用。

[1]劉成玉,羅春麗,吳曉蔓,等.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2012:1-4;135-218.

[2]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].南京：東南大學(xué)出版社,2008:267-290.

[3]余方友.實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)帶教中常見問題及其解決方法[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(3):265-266.

[4]汪浩,方奮,吳亞俊.模擬蛋白尿的實(shí)驗(yàn)方法和體會(huì)[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2007,25(3):110-111.

[5]孫燕冰,張春,肖劍章.檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)標(biāo)本的制備與保存[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,(2B):206-207.

[6]潘麗娟.早早孕試紙?jiān)谘迦私q毛膜促性腺激素測定中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(2):189.

[7]趙翠紅,段如春.模擬標(biāo)本在尿液有形成分檢驗(yàn)實(shí)踐教學(xué)中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012,9(16):2045-2046.

[8]何艷,姚琴.模擬尿標(biāo)本在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)訓(xùn)教學(xué)中的應(yīng)用[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2013,31(8):95-96.

[9]任吉蓮,薛翠娥.模擬糞便標(biāo)本的制作[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2007,14(26):3566-3567.

[10]黃勝,梁華英,何艷,等.三種糞便隱血試驗(yàn)的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(1):69-70.

[11]何艷，史林飛.模擬腦脊液在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用探索[J].科教文匯旬刊,2012,11(27):153.

[12]周瑜,陳謀翔.檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生參加實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備有利提高專業(yè)素質(zhì)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(6):656.

[13]馬越云,楊柳,岳喬紅,等.“三重-立體”實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)教學(xué)模式的探索[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,36(7):659-661.

[14]張軍力,種新力.實(shí)驗(yàn)診斷模擬標(biāo)本的制作[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,5(2):109-110.

[15]蔣麗莉,黃輝,鄧均,等.臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革探討[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2009,25(24):3832-3833.