GC-MS測定利夫康洗液中蛇床子素的含量

陳琴華，朱 軍，黃麟杰，余 飛

·藥學(xué)研究·

GC-MS測定利夫康洗液中蛇床子素的含量

陳琴華，朱 軍*，黃麟杰，余 飛

目的 建立快速、靈敏的氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法，測定利夫康洗液中蛇床子素的含量。方法 色譜條件：DB-5MS (30 m×0.32 mm，0.25 μm)石英毛細(xì)管色譜柱；程序升溫條件為140 ℃保持2 min，以10 ℃/min升至280 ℃，保持6 min；進(jìn)樣口和接口溫度為280 ℃。樣品水浴蒸干，乙酸乙酯溶解，應(yīng)用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行測定。結(jié)果 蛇床子素在1.0～50 μg/mL線性關(guān)系良好，r=0.999 1，精密度為2.01%，平均回收率為97.26%，檢測限為1.0 ng/mL。結(jié)論 本方法簡便、快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以用于利夫康洗液中蛇床子素的含量測定。

利夫康洗液；蛇床子素；氣相色譜-質(zhì)譜

0 引言

利夫康洗液由苦參、黃柏、蛇床子、白鮮皮、黃連、地膚子、花椒、赤芍、板藍(lán)根、何首烏、土茯苓等11味中藥組成，具有清熱燥濕、殺蟲止癢的功效，常用于真菌性、滴蟲性陰道炎以及濕疹、接觸性皮炎和體股癬[1]。蛇床子為主要構(gòu)成中藥，具有溫腎助陽、祛風(fēng)、燥濕、殺蟲之功效，主要用于治療滴蟲性陰道炎、銀屑病等[2-4]。蛇床子素是蛇床子中主要有效成分之一，是從蛇床子中提取的主要香豆素類化合物，現(xiàn)代藥理試驗研究證明，其具有抗滴蟲、抗心律失常、性激素樣和抗炎等作用[5-7]。目前對蛇床子素的測定主要有分光光度法[8]、熒光法[9]、薄層掃描法[10]和HPLC法[11-12]。由于蛇床子素具有一定的揮發(fā)性，氣相色譜也可用來定量測定蛇床子素[13]。隨著質(zhì)譜的發(fā)展，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)在中藥揮發(fā)性成分定量測定的應(yīng)用越來越廣泛[14-15]，為了控制該洗液的質(zhì)量，筆者采用GC-MS法測定利夫康洗液的主要有效成分-蛇床子素，為其質(zhì)量評價提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

GCMS-QP2010型氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津)，工作站GCMSsolution 2.10，DB-5 (30 m×0.32 mm，0.25 μm)毛細(xì)管氣相色譜柱(安捷倫)；KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器(蘇州江東精密儀器有限公司)；HP-01溶劑過濾器(杭州賽析科技有限公司)；日本島津AEU-210電子天平；TG16G離心儀。

蛇床子素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110822-200406，20 mg，供含量測定)；利夫康洗液(西安太極藥業(yè)有限公司，批號：131108)；高純氦氣(昆山普克萊斯實用氣體有限公司，純度≥99.999%)；乙酸乙酯(分析純，西安化學(xué)試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 DB-5 (30 m×0.32 mm，0.25 μm)毛細(xì)管氣相色譜柱為分析柱；以高純氦氣為載氣，流速2.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度：280 ℃，程序升溫：起始溫度140 ℃，保持2 min，以10 ℃/min速率升溫至280 ℃，保持6 min；進(jìn)樣量為1 μL，接口溫度280 ℃，EI源溫度200 ℃，電子轟擊能量為70 eV，采集延時2.5 min；進(jìn)樣方式不分流進(jìn)樣，m/z為244(蛇床子素)。

2.2 溶液的配制 對照品溶液：取蛇床子素對照品約10 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，作為蛇床子素對照品儲備液。精密吸取適量，用甲醇稀釋得50 μg/mL的工作溶液。供試品溶液：精密吸取利夫康洗液20 mL，置水浴(95 ℃)中揮干，加10 mL乙酸乙酯，完全溶解后用0.45 μm微孔濾膜濾過，得供試品溶液。陰性對照品溶液：按照利夫康洗液的處方組成，稱取獨(dú)缺蛇床子的陰性樣品適量，100 mL甲醇超聲提取，置水浴(95 ℃)中揮干，加入適量乙醚完全溶解后，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液適量，分別注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析。供試品溶液色譜圖中，在與對照品溶液相應(yīng)的位置上有一相同的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時間無吸收峰，表明陰性對照對測定無干擾。色譜圖見圖1。從圖1可見，利夫康洗液的其他成分在該色譜條件下不影響蛇床子素的測定，因此，其專屬性較強(qiáng)，可以用于利夫康洗液中蛇床子素的測定。

圖1 離子監(jiān)測色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 取一定量的蛇床子素對照品溶液，配置一系列濃度的對照品溶液，其濃度分別為1.0、1、5、10、20、50 μg/mL，按“2.1”項下分析條件進(jìn)樣1 μL，以蛇床子素的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、蛇床子素對照品濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，記錄色譜圖?；貧w方程：Y=4 652 X-6 002，r=0.999 0。結(jié)果表明，蛇床子素在1.0～50 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，S/N=3時，測得蛇床子素的檢測限為1.0 ng/mL。

2.5 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗 取20 μg/mL蛇床子素對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，計算蛇床子素對照品峰面積的RSD為1.76%，表明該方法精密度良好。

取同一批樣品(批號:130408)，共5份，按“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算利夫康洗液中蛇床子素的含量。結(jié)果平均含量為10.2 μg/mL，RSD為2.12 %，表明該方法重復(fù)性良好。

取同一批樣品(批號:130408)，按“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8 h進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計算蛇床子素對照品峰面積RSD為2.01 %。說明蛇床子在利夫康洗液溶液中12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗 精密量取10 mL已知含量的利夫康洗液 (含蛇床子素10.2 μg/mL) 5份，分別加入蛇床子素對照品(40 μg/mL) 0.5 mL，混勻，按“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備樣品，并按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，按外標(biāo)法，以峰面積計算回收率，其平均回收率為97.26%，RSD為2.01%。見表1。

表1 蛇床子素加樣回收率

2.7 樣品的測定 取利夫康洗液適量，按“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備3份，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析。用GC-MS-SIM法測定蛇床子素的含量。在利夫康洗液中，蛇床子素的含量分別為10.1、10.2、10.4 μg/mL，平均含量為10.23 μg/mL。

3 討論

中藥質(zhì)量評價和控制是制約中藥現(xiàn)代化發(fā)展的關(guān)鍵[16]。中藥成分復(fù)雜，而中成藥又多為中藥復(fù)方組成，其組分雖然較多，但每一組分的含量較低，靈敏度低的分析方法難以達(dá)到要求。因此，可應(yīng)用GC-MS的高靈敏度與高分離效能進(jìn)行成藥的分析[17]。

本研究首次采用GC-MS選擇離子監(jiān)測法測定利夫康洗液中蛇床子素的含量，從色譜圖可以看出，該方法專一性強(qiáng)，相關(guān)系數(shù)和回收率均達(dá)到了含量測定的要求，而且檢測限低(1.0 ng/mL)，是可以用來測定蛇床子素的較好的方法。

在供試品處理中，選用溶劑時，曾考慮應(yīng)用乙酸乙酯和乙醚，但是乙醚容易揮發(fā)，重復(fù)性較差，因此選擇乙酸乙酯。在處理樣品時，將樣品直接在水浴上蒸干，然后采用乙酸乙酯溶解，上清液進(jìn)樣分析，這樣可以避免使用過多的有機(jī)溶劑來萃取利夫康洗液中的蛇床子素。

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Quantitative determination of osthole in lifukang lotion by GC-MS

CHEN Qin-hua,ZHU Jun*,HUANG Lin-jie,YU Fei

(Institute of Pharmaceutical Analysis and Drug Screening,Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,China)

Objective To develop a rapid and sensitive GC-MS method for the determination of osthole in lifukang lotion.Methods GC-MS conditions: DB-5MS capillary column (30 m×0.32 mm×0.25 μm); column temperature program: 140 ℃ held 2 min,and then programmed to 280 ℃ at 10 ℃/min for 6 min; interface and inlet temperature: 280 ℃.The sample was evaporated and dissolved by acetic ether.Quantitative determination of analysis was performed by GC-MS.Results The linear range of osthole was 1.0～50 μg/mL (r=0.999 1).The recovery rate was 97.26%,RSDwas 2.01%,and the limit of quantitation was 1.0 ng/mL.Conclusion The method is convenient and rapid,with good sensibility and accuracy,it can be used to determine the content of osthole in lifukang lotion.

Lifukang lotion; Osthole; GC-MS

2014-07-02

湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院藥物分析與篩選研究所，湖北 十堰 442008

十堰市科技局項目(2013st033、14Y55)；湖北省衛(wèi)生和計劃生育委員會計劃項目(2013Z-B04)；湖北省2011協(xié)同創(chuàng)新中心基金(4)

10.14053/j.cnki.ppcr.201504015

*通信作者