健脾消食1號對脾虛大鼠胃排空及胃腸激素的影響

潘程程，李 巖

健脾消食1號對脾虛大鼠胃排空及胃腸激素的影響

潘程程，李 巖*

目的 建立功能性消化不良脾虛大鼠的模型，研究健脾消食1號對其胃排空及血清胃腸激素的影響，探討該方可能的作用機制。方法 60只SD大鼠，隨機分為4組：空白對照組、模型恢復組、莫沙必利組、健脾消食1號組。除空白對照組外，其余大鼠均采用勞倦過度加飲食失節(jié)法建立脾虛證大鼠模型，連續(xù)25 d，各組分別進行生理鹽水、莫沙必利、健脾消食1號灌胃，連續(xù)1周，取材，測量胃排空率、胃腸激素。結(jié)果 與模型恢復組比較，健脾消食1號組胃排空增加，血清GAS增加，SS下降。結(jié)論 健脾消食1號可影響脾虛大鼠血清胃腸激素釋放，促進胃排空，這可能是其臨床作用的機制之一。

健脾消食1號；功能性消化不良；脾虛；胃腸激素；胃排空率

0 引言

功能性消化不良(Functional dyspepsia,FD)指上腹部疼痛和/或燒灼感、餐后飽脹不適和早飽感的癥狀源于胃十二指腸區(qū)域,但缺乏可能解釋上述癥狀的器質(zhì)性、系統(tǒng)性和代謝性疾病的一組臨床綜合征。不同國家的流行病學研究調(diào)查顯示,FD發(fā)病率高，療效不佳，已成為困擾人們生活和工作的疾病[1-3]。其發(fā)病機制復雜，與胃動力異常、內(nèi)臟高敏感性、幽門螺桿菌感染、心理因素、胃腸激素、胃酸分泌過多、基因因素等多種因素相關，其中胃腸動力異常和胃腸激素在發(fā)病過程中起重要作用[4-5]。本文以FD脾虛大鼠為研究對象，觀察健脾消食1號對其胃排空及血清胃泌素(GAS)、P物質(zhì)(SP)、生長抑素(SS)的影響，從而探討該方治療FD脾虛證的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康SPF級雄性SD大鼠60只，體重(200±20)g，由中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院實驗動物中心提供[許可證號：SCXK(遼)2003-0013]。

1.1.2 藥物與制備 健脾消食1號，由太子參10 g、茯苓20 g、炒白術15 g、炙甘草10 g、砂仁10 g、炒雞內(nèi)金10 g、厚樸15 g、炒麥芽10 g、焦山楂10 g組成，購于遼寧中醫(yī)藥大學藥局，按照中藥常規(guī)煎法制成相當于生藥1.1 g/mL的煎劑，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?枸櫞酸莫沙必利，5 mg/片，住友制藥有限公司，批號:2814C，每日給藥前用蒸餾水配制成0.15 g/L的溶液； 硫噴妥鈉，上海新亞藥業(yè)有限公司，批號：020102，使用前用滅菌注射用水配制成2.5%溶液。

1.1.3 實驗試劑與儀器 羧甲基纖維素，宜興市通達化學有限公司，批號:1107013； 營養(yǎng)性半固體糊的制備[6]：取5 g羧甲基纖維素溶于100 mL蒸餾水中，分別加入奶粉8 g、糖4 g、淀粉4 g,2 mL碳素墨水及蒸餾水，配成半固體糊150 mL，置冰箱中冷藏保存，使用前2 h取出，恢復常溫。Rat GAS Elisa 試劑盒(R&D Systems Inc.,USA)；Rat SS Elisa 試劑盒(R&D Systems Inc.,USA)；Rat SP Elisa 試劑盒(R&D Systems Inc.,USA)；電子天平(0.01 g)：TE612-L，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；低速離心機：SC-3612，安徽中科中佳科學儀器有限公司； 吸收光酶標儀：ELx808，Biotek,USA。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用飲食失節(jié)+力竭游泳方法造模：雙日自由進食水，喂飼精煉豬油(1.5 mL/100 g)1次，單日禁食不禁水，喂飼甘藍10～15 g/只，以達到飲食不節(jié)；并在單日將大鼠置于盛有溫水[水溫(22±1) ℃，水深50 cm]的塑膠桶中游泳至力竭(大鼠水中旋轉(zhuǎn)、運動協(xié)調(diào)性明顯下降，水淹沒鼻尖，身體下沉，至再次浮出水面超過10 s，連續(xù)3次[7-8])1次，以達到勞倦過度，共25 d。大鼠出現(xiàn)活動減少、倦臥少動、扎堆、瞇眼、拱背、反應遲鈍、皮毛干枯欠光澤,捉拿時反抗無力,進食減少、漸見體型瘦弱、體重下降或增長緩慢，軟便或便溏,造模成功[9]。

1.2.2 分組及處理 大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為空白對照組、模型恢復組、莫沙必利組和健脾消食1號組,每組15只。除空白對照組正常飼養(yǎng)外,其余三組均造模，造模成功后給藥，健脾消食1號、莫沙必利根據(jù)人和鼠給藥劑量換算公式[10]進行計算，健脾消食1號組予健脾消食1號7.2 mL/(kg·d)，莫沙必利組予莫沙必利7.2 mL/(kg·d)，模型恢復組和空白對照組予生理鹽水7.2 mL/(kg·d)，共1周。

1.2.3 觀察指標及方法 胃腸激素測定:末次給藥后禁食不禁水，24 h后予半固體糊2 mL灌胃，1 h后硫噴妥鈉(40 mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉,迅速打開腹腔，于腹主動脈采血,靜置,3 000 r/min離心15 min,取上清液,-20 ℃保存。參照試劑盒步驟用ELISA法檢測血清中GAS、SP、SS的濃度。胃排空率測定: 采血后立即結(jié)扎賁門和幽門,剪取胃,稱胃全質(zhì)量,沿胃大彎剪開胃體,洗去胃內(nèi)容物后,拭干后稱胃凈質(zhì)量。按公式：胃排空率=1-[(胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量)/灌胃質(zhì)量]×100%。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠胃排空率比較 與空白對照組比較，模型恢復組胃排空率降低(P<0.01)；莫沙必利組、健脾消食1號組雖略有降低，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與模型恢復組比較，莫沙必利組、健脾消食1號組胃排空率提高(P<0.01，P<0.05)。莫沙必利組與健脾消食1號組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 各組大鼠胃排空率比較

注：與空白對照組比較，**P<0.01；與模型恢復組比較，#P<0.05，##P<0.01

2.2 各組大鼠血清胃腸激素比較 與空白對照組比較，模型恢復組的血清GAS、SP降低(P<0.05)，SS升高(P<0.01)。與模型恢復組比較，莫沙必利組的GAS、SP升高(P<0.01，P<0.05)，SS降低(P<0.05)；健脾消食1號組的GAS升高(P<0.05)，SS降低(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠血清胃腸激素比較

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型恢復組比較，#P<0.05，##P<0.01

3 討論

FD是臨床常見的功能性胃腸疾病，包括餐后飽脹不適、早飽、上腹痛、上腹燒灼感，可分為餐后不適綜合征(PDS)和上腹痛綜合征(EPS)。一項全球性調(diào)查統(tǒng)計顯示，以上腹痛為診斷標準的消化不良患病率為7%～34.2%，以上消化道癥狀為標準的消化不良患病率高達23%～45%[11]。因其病情反復、療效欠佳，嚴重影響人們生活質(zhì)量并增加患者的精神及經(jīng)濟負擔。FD的發(fā)病機制亦成為學者們研究的熱點，目前認為主要與胃動力異常、心理因素、胃酸分泌過多、內(nèi)臟高敏感性、幽門螺桿菌感染、基因因素、成長環(huán)境、飲食、生活方式等因素有關，治療上主要為促動力藥、抑酸藥、抗抑郁藥等[12-13]。

現(xiàn)代中醫(yī)認為，F(xiàn)D可歸于嘈雜、胃脘痛、痞證等范疇[14]，其病位在胃，涉及肝、脾，目前研究多認為FD與脾胃關系最為密切，因勞倦傷脾、飲食傷胃等多因素使脾胃運化失職、脾胃氣機升降失常所致，脾胃虛弱是發(fā)病基礎，因而補益脾胃應貫穿本病整個治療過程[15-18]。我們根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗以及既往的藥理研究[19-23]、參照《太平惠民和劑局方》的經(jīng)典方劑四君子湯加減組方，擬定健脾消食1號，本方以太子參、白術、茯苓健脾益氣，焦山楂、炒麥芽、雞內(nèi)金健胃消食，砂仁、厚樸行氣導滯，炙甘草調(diào)和諸藥，共奏健脾滲濕、消食行氣之功效，使脾氣健運，恢復脾胃受納與健運之職，進而改善脾虛癥狀。 胃腸激素是由胃腸內(nèi)分泌細胞合成和釋放的多種活性物質(zhì),對胃腸運動調(diào)節(jié)的機制比較復雜，主要通過內(nèi)分泌、旁分泌、自分泌方式及神經(jīng)遞質(zhì)作用調(diào)節(jié)胃腸運動，其分泌紊亂是功能性胃腸病的發(fā)病機制之一。GAS是調(diào)節(jié)胃腸動力的一種激素[24]，其既可以增強食管下括約肌的收縮活動[25]，減少胃食管反流，又可以促進胃蠕動[26]。有研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性胃泌素的釋放可升高餐后胃電頻率，進而增強胃收縮性[27-28]。胃泌素對胃體、胃竇、幽門均有收縮作用，其中胃竇最強，胃體最弱[29-30]，這與近端胃保持緊張性收縮、遠端胃的節(jié)律性收縮相吻合，進而促進胃排空[31]。SP作為神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)因子發(fā)揮作用，其對胃腸縱行肌和環(huán)行肌有雙重收縮效應[32-33]，有研究表明，SP能顯著增加大鼠的內(nèi)臟敏感性，促進排泄[34],進一步研究發(fā)現(xiàn)，SP主要是作用于小腸Cajal細胞(ICC)[35]，通過NK-1受體[36]影響小腸移行性復合運動(MMC)的發(fā)生頻率和持續(xù)時間[37]，發(fā)揮對胃腸運動的調(diào)節(jié)作用，進而促進糞便排泄。SS是一種廣泛分布于消化道系統(tǒng)的腦腸肽，對多種生理功能均具有抑制性作用。其既可以通過神經(jīng)內(nèi)分泌作用直接起效，還可通過抑制其他胃腸激素而間接性抑制胃腸[38]。大量研究證實，生長抑素可延緩胃排空，對全腸道推進活動有強大的抑制效應，進而降低排便次數(shù)[39-42]。Abdu等[43]通過鼠離體空腸研究發(fā)現(xiàn)，生長抑素可通過影響啟動胃腸運動的腸道神經(jīng)元電活動,減少小腸的移行性復合運動。

本研究結(jié)果顯示，模型恢復組大鼠胃排空率減慢，血清GAS、SP含量明顯下降，血清SS含量明顯升高，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義，這與文獻報道一致[30-31，44]，而經(jīng)1周治療后,健脾消食1號組、莫沙必利組胃排空率顯著增加，血清GAS、SP含量增加，SS含量下降，除血清SP外，均有統(tǒng)計學意義。綜上所述，F(xiàn)D的發(fā)病與胃腸動力障礙和胃腸激素分泌紊亂有關，健脾消食1號可以調(diào)節(jié)脾虛大鼠血清GAS、SP、SS含量，這可能是其治療FD的作用之一，為臨床上應用健脾消食1號治療FD提供了一定的理論和實驗依據(jù)，但其具體是通過哪條調(diào)節(jié)通路而發(fā)揮作用有待于進一步實驗探討。

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Effect of Jianpixiaoshi Ⅰ decoction on gastrointestinal hormones and gastric emptying rate of rat with spleen deficiency

PAN Cheng-cheng, LI Yan*

( Department of Gastroenterology, Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

Objective To observe the effect of Jianpixiaoshi I decoction (JPXS-1)on serum levels of gastrin (GAS),substance P(SP),somatostatin(SS) and gastric emptying rate (GER) in ratswith spleen deficiency-functional dyspepsia (FD),and to analyze the mechanisms.Methods Sixty male SD rats were randomly divided into four groups: blank control group(BCG,n=15),model recovery group(MRG,n=15),mosapride group(MG,n=15),Jianpixiaoshi I group(JPXSG,n=15).Except the BCG,FD was induced in rats of another groups by swimming to exhaustion every other day and alternative feeding of cabbage and lard for 25 d.MG and JPXSG rats were then intragastrically administered with mosapride and JPXS-1 for 7d (once daily),BCG and MRG rats were given equal volume of physiological saline.All rats were fasted for 24h with free access to water when the treatment was discontinued.The GER was detected,the concentration of serum GAS,SP and SS were measured by ELSIA.Results The GER and level of GAS in JPXSG were higher than those of MRG (P<0.05),and the level of SS in JPXSG was lower than that of MRG (P<0.05).Conclusion JPXS-1 could influence the release of gastrointestinal hormones (included GAS and SS)and promote gastric emptying in FD rats,and it might be the mechanism for the treatment of FD.

Jianpixiaoshi I(JPXS-1);Functional dyspepsia(FD);Spleen deficiency; Gastrointestinal hormones;Gastric emptying rate (GER)

2014-12-23

中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院消化內(nèi)科，沈陽 110004

遼寧省科學技術廳藥物源頭科研基金

10.14053/j.cnki.ppcr.201506003

*通信作者