白術(shù)對(duì)S180致肝腹水小鼠外周血中NO和iNOS的影響

歐 燕，袁洪霞，關(guān)富敏

重慶市綦江區(qū)人民醫(yī)院，重慶 401420

白術(shù)對(duì)S180致肝腹水小鼠外周血中NO和iNOS的影響

歐 燕，袁洪霞，關(guān)富敏

重慶市綦江區(qū)人民醫(yī)院，重慶 401420

目的：考察白術(shù)水煎劑對(duì)S180致肝腹水的小鼠外周血中NO和iNOS的影響，探討其抗腹水的作用機(jī)制。方法：將SPF級(jí)雄性昆明種小鼠，依體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組、腹水用藥組（白術(shù)水提取物高G、中Z、低劑量D3組）、陽性藥物組（陽性藥：環(huán)磷酰胺，CTX組）共6組，分別按照實(shí)驗(yàn)方案給予相應(yīng)受試藥物，S180造模，連續(xù)給藥7天，分取各組動(dòng)物靜脈血，測定相應(yīng)指標(biāo)含量或活性。結(jié)果：白術(shù)用藥組與CTX組對(duì)S180致肝腹水的小鼠均有抑制腫瘤的作用；與空白組相比，模型組小鼠外周血中NO和iNOS的含量明顯上升；與模型組相比，CTX組合白術(shù)G、Z、D組的NO和iNOS的含量都有所下降，但各組的NO和INOS降低率不同。結(jié)論：白術(shù)水煎劑主要通過調(diào)節(jié)外周血中NO和iNOS的含量來起到抗S180致肝腹水的作用。

白術(shù)水提物；肝腹水；NO；iNOS

白術(shù)具有“健脾燥濕，利水消腫”的功效，多用于水濕內(nèi)停之痰飲，或水氣外溢之水腫，近年研究白術(shù)抗腫瘤、抗炎、提高機(jī)體免疫力的實(shí)驗(yàn)報(bào)道較多。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，白術(shù)對(duì)肝腹水治療方面的試驗(yàn)研究較少，僅有幾篇文獻(xiàn)報(bào)道白術(shù)對(duì)正常小鼠的利尿作用，以及白術(shù)對(duì)肝腹水的臨床應(yīng)用觀察[1]。一氧化氮（N O）是一種存在于體內(nèi)各種細(xì)胞中的生物介質(zhì)，參與機(jī)體的多種生理病理過程[2]，早在1991年，Va l l a n ce[3]首先提出N O導(dǎo)致肝硬化高動(dòng)力循環(huán)的假說，認(rèn)為血清中N O產(chǎn)生、增加與肝硬化患者并發(fā)癥的發(fā)生有一定關(guān)系。因此，本實(shí)驗(yàn)主要以N O和i N O S為指標(biāo)來考察白術(shù)對(duì)S180致肝腹水的小鼠的影響，以期為從分子的角度來尋找肝腹水的發(fā)生機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：S P F級(jí)雄性昆明種健康小鼠60只，醫(yī)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：111實(shí)動(dòng)管制第17號(hào)，體質(zhì)量28～32g，瘤株：小鼠肉瘤S180。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 相關(guān)手術(shù)器械；萬分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司提供）；冷凍離心機(jī)。

1.3 試藥、試劑 環(huán)磷酰胺（批號(hào)20130202，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，臨用前用生理鹽水配成0.6 m g/mL)；白術(shù)（安徽海鑫中藥飲片有限公司，產(chǎn)地浙江）；生理鹽水（西南藥業(yè)）；無水乙醇等均為分析純；N O試劑盒（批號(hào)：A014-3）、i N O S三型同測試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 白術(shù)水煎液的制備[4]取白術(shù)100 g，加蒸餾水適量，浸泡30分鐘，煎煮2次，每次1小時(shí)，過濾，合并2次濾液，濃縮并定容至200mL，相當(dāng)于生藥濃度50%，并取適量50%白術(shù)水煎液，用蒸餾水分別稀釋到31.8%、15.9%以及5.3%生藥濃度，裝瓶備用，低溫保存。以30g成年小鼠與70 kg成人體表面積換算，30 g小鼠灌胃31.5%、15.7%、5.3%生藥濃度的白術(shù)水煎液1mL相當(dāng)于70 kg成人劑量60 g/d(高劑量組)、30 g/d(中劑量組)、10g/d(低劑量組)。

2 實(shí)驗(yàn)方法[5]

2.1 模型復(fù)制及取材[6]腹腔接種小鼠肉瘤S180細(xì)胞小鼠6～7天后腹水形成明顯，將生長7天的腹水模型種鼠頸椎脫臼處死，蠟版固定，用碘伏、75%乙醇腹部局部消毒，在無菌條件下取出乳白色濃稠活體腹水，與生理鹽水注射液1∶3稀釋，移植于用75%乙醇消毒的受試小鼠，給右前腋窩皮下準(zhǔn)確接種瘤液0.2mL。小鼠連續(xù)給藥7天，最后一次給藥8小時(shí)后眼球采血，室溫靜置2小時(shí)，冷凍離心機(jī)4℃，3 500 r p m，離心10分鐘，分離血清，備用；取血后立即處死動(dòng)物，稱體重后頸椎脫臼處死小鼠，完整剝?nèi)×鰤K。

2.2 分組及給藥 所有動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)3天按體重分層隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、腹水用藥組（白術(shù)水提取物高、中、低劑量3組，分別標(biāo)示為白術(shù)G、Z、D組）、陽性藥物組（陽性藥：環(huán)磷酰胺0.6 m g/mL，按20 m g/kg灌胃，標(biāo)示為C T X組）共6組，每組10只。各實(shí)驗(yàn)組自實(shí)驗(yàn)當(dāng)天開始按規(guī)定給藥量灌胃給予相應(yīng)藥物。實(shí)驗(yàn)分組及試藥劑量設(shè)置見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)分組及試藥劑量設(shè)置

2.3 觀測指標(biāo)[7]

2.3.1 抑瘤率 稱取除空白組外各組瘤塊的重量，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率=（模型組平均瘤重-給藥組平均瘤重）／模型組平均瘤重×100%

2.3.2 NO含量測定 10%生理鹽水血漿，321500 r p m離心10分鐘，取上清，采用硝酸還原酶法，按照N O試劑盒說明書測定組織和血液的N O含量。

2.3.3 iNOS活性測定 根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行相關(guān)預(yù)試，選取最佳測定濃度，測定組織i N O S。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用S P SS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以(±s)表示，采用A N OVA分析，組間多重比較進(jìn)行L S D-t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的組間采用非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各藥物組對(duì)S180致肝腹水的小鼠的抑瘤率統(tǒng)計(jì) 與模型組相比，各用藥組的瘤重均較模型組輕（P＜0.05）。見表2。

表2 各藥物組對(duì)S180致肝腹水的小鼠肉瘤的影響

3.2 各藥物組對(duì)S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量及iNOS活性的影響 與模型組相比，各實(shí)驗(yàn)組均可明顯降低肝腹水的小鼠外周血中N O含量及i N O S活性(P＜0.05)，環(huán)磷酰胺組降低N O達(dá)53.1%(P＜0.05)，降低i N O S達(dá)74.1%，白術(shù)G組降低N O為47.5%(P＜0.05)，降低i N O S達(dá)72.3%，其他各組N O值均呈下降趨勢(shì)。見表3-4及圖1-2。

表3 各藥物組對(duì)S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量影響

圖1 各藥物組對(duì)S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量影響

表4 各藥物組對(duì)對(duì)S180致肝腹水的小鼠外周血中iNOS含量的影響

圖2 各藥物組對(duì)S180致肝腹水的小鼠外周血中iNOS含量的影響

4 討論

N O是一種免疫分子和炎癥介質(zhì)，也是一種自由基，但又具有細(xì)胞毒性，可引起多種病理生理效應(yīng)，與血管擴(kuò)張、免疫、抗腫瘤、蛋白質(zhì)合成等有關(guān)[8]。N O S活性增高及N O濃度的增加與炎癥程度呈平行關(guān)系。體內(nèi)N O S有結(jié)構(gòu)型N O S(c N O S)和誘導(dǎo)型N O S(i N O S)2種[9]。c N O S先天性存在，生成N O數(shù)量較少，產(chǎn)生迅速。i N O S在生理情況下基本不表達(dá)，當(dāng)受到某些細(xì)胞因子、病原微生物或腫瘤細(xì)胞刺激后，即被激活，大量產(chǎn)生i N O S，且持續(xù)時(shí)間長。i N O S催化的N O對(duì)細(xì)胞有殺傷毒性及促炎作用。此前有研究證實(shí)了肝硬化肝功能損害程度與N O水平密切相關(guān)，肝臟儲(chǔ)備功能越差，N O水平越高。

[1] 宿廷敏，王敏娟，阮時(shí)寶.白術(shù)的化學(xué)成分及藥理作用研究概述[J].貴陽學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008，3(2):32-35.

[2] 姜虹，劉麗娜，谷玲，等.一氧化氮、內(nèi)皮素和內(nèi)毒素與肝硬化腹水及肝功能[J].醫(yī)師進(jìn)修雜志，2003，7(4):26-27.

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The Influenceof BaiZhu on NO and INOS in PeripheralBlood ofM ice w ith S180-induced Liver Ascites

OU Yan,YUAN Hongxia,GUAN Fumin
Chongqing Municipality Qijiang District People's Hospital,Chongqing 401420,China

Objective:To investigate theeffectsof BaiZhu(Atractylodesmacrocephala)decoction on NO and i-NOS in peripheral blood of mice w ith S180-induced liver ascites.Methods:The m ice were randomized into six groups:the blank group,themodelgroup,liverascitesmedication groups(high dosage group of BaiZhu decoction G, moderate dosage group of BaiZhu decoction Z and low dosage group of BaiZhu decoction D3)and positivemedicine groups(positivemedicine:cyclophospham ide,CTX group),all them ice received the correspondingmedicine according to experimental program,themodelwas prepared with S180,treated for seven consecutive days,and the blood was drawn out from different groups to detect the contents and the activity of the corresponding indexes.Results: BaiZhu and CTX could inhibit tumorof them icew ith S180-induced liverascites;compared w ith the blank group,NO and iNOS in peripheral blood ofm ice increased obviously in themodel group;compared w ith themodel group,the contentsof NO and iNOS in peripheralblood ofm ice deceased in G,Z and D groupsof CTX,but the decrease ratesofNO and iNOS in peripheralblood ofm ice in all the groupswere different.Conclusion:BaiZh u decoction could fightagainstascitesofmice suffering from S180-induced liverascites through regulating the contentsof NO and iNOS in peripheralblood.

BaiZhu decoction;liverascites;NO;iNOS

R285.5

A

1004-6852(2015)08-0015-03

2014-10-25

歐燕(1987—)，女，碩士學(xué)位，藥劑師。研究方向：臨床藥學(xué)。