廣東地區(qū)地中海貧血患兒血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體水平的研究

張 力，高秀蓉，顏慕霞，李彥媚

（廣州市婦女兒童醫(yī)療中心血液科血液實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510623）

廣東地區(qū)地中海貧血患兒血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體水平的研究

張 力＊，高秀蓉，顏慕霞，李彥媚

（廣州市婦女兒童醫(yī)療中心血液科血液實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510623）

目的 研究廣東地區(qū)不同類(lèi)型地中海貧血（地貧）患兒血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（sTfR）水平與患兒臨床表現(xiàn)的關(guān)系。方法 對(duì)14例靜止型α地貧，47例標(biāo)準(zhǔn)型α地貧，27例血紅蛋白H（HbH）病，14例異常血紅蛋白Constant Spring（HbCS）復(fù)合HbH病，59例β地貧雜合子，31例β地貧純合子或雙重雜合子和50例正常健康兒童的血紅蛋白（Hb）含量，血清鐵（SI）水平及sTfR水平進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 靜止型α地貧患兒的sTfR水平與正常對(duì)照相比無(wú)顯著性差異，標(biāo)準(zhǔn)型α地貧患兒與輕型β地貧患兒sTfR水平略高于正常對(duì)照，以上三類(lèi)地貧患兒Hb含量輕度減低或正常。血紅蛋白H病患兒Hb含量低于正常對(duì)照，sTfR水平高于正常對(duì)照。重型β地貧患兒Hb含量明顯低于正常對(duì)照，sTfR水平則明顯高于正常對(duì)照與輕型α及β地貧患兒。結(jié)論 ①?gòu)V東地區(qū)不同類(lèi)型地貧患兒血清sTfR水平升高程度不同，其與臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度一致。②sTfR可作為一項(xiàng)監(jiān)測(cè)地貧患兒體內(nèi)紅系增生程度及重型β地貧治療效果的指標(biāo)。

地中海貧血；血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體；臨床表現(xiàn)

（Chin J Lab Diagn，2015，19：0969）

廣東地區(qū)是地中海貧血（地貧）的高發(fā)區(qū)，α地貧雜合子的發(fā)生率為7.3%，β地貧雜合子的發(fā)生率為3.4%，兩者合計(jì)超過(guò)10.0%［1］。地貧患兒由于體內(nèi)紅系增生及紅細(xì)胞在骨髓中的無(wú)效生成可造成鐵代謝的異常，由此引起一系列血色病。血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（soluble transferrin receptor，sTfR.）是一項(xiàng)反映機(jī)體紅系增生程度的可靠指標(biāo)，目前國(guó)外對(duì)于地貧患者體內(nèi)紅系增生及sTfR的水平等有一定程度的研究［2］。國(guó)內(nèi)在這方面特別是廣東地區(qū)地貧患兒sTfR水平的研究報(bào)道甚少。在本次研究中，我們對(duì)廣東地區(qū)192例地貧患兒的sTfR水平進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 一般資料 192例地貧患兒均為廣東籍，男141例，女51例，相互間無(wú)親緣關(guān)系，全部患兒經(jīng)α及β地貧基因分析確定其地貧基因缺陷類(lèi)型。排除缺鐵性貧血疾?。?］。同時(shí)排除其它血液系統(tǒng)疾病及感染性疾病。均未接受過(guò)輸血治療。50例正常對(duì)照兒童選自幼兒園體檢的正常健康兒童。

1.1.2 貧血程度 輕度貧血：Hb 90g／L－正常下限；中度貧血：Hb 60－89g／L；重度貧血：Hb 30－59 g／L；極重度貧血：Hb＜30g／L。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 所有患兒均采集入院后（若門(mén)診患兒則選擇未經(jīng)治療者）治療前首次采集空腹靜脈血，健康體檢者則為體檢時(shí)的空腹血，血常規(guī)，血紅蛋白分析，地貧基因診斷用EDTA—K抗凝血，鐵代謝指標(biāo)檢測(cè)用非抗凝血。

1.2.2 血常規(guī)分析 采用美國(guó)ABBOTT公司的CDl700血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀及其配套試劑，檢測(cè)血紅蛋白（hemoglobin，Hb.）含量。

1.2.3 Hb分析 采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC.）法，儀器為美國(guó)BIO－RAD公司的VariantⅡHPLC儀檢測(cè)HbA2與HbF等含量。

1.2.4 α地貧基因診斷 使用DNA快速提取試劑盒（深圳創(chuàng)益生物科技公司）從EDTA抗凝血中提取基因組DNA。采用GAP－PCR方法診斷中國(guó)人常見(jiàn)的東南亞型（－－SEA）基因缺失、－α4.2和－α3.7基因缺失等3種缺失型α地貧，采用反向點(diǎn)雜交（RDB）法對(duì)3種中國(guó)人常見(jiàn)的α地貧非缺失型點(diǎn)突變進(jìn)行檢測(cè)，包括αCS（CDl42），TAA→CAA；αQS（CDl25），CTG→CCG與αWS（CD122），CAC－CAG。α地貧基因診斷試劑盒由深圳創(chuàng)益生物科技公司提供，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和結(jié)果判斷。

1.2.5 β地貧基因診斷 采RDB方法檢測(cè)患兒DNA樣本中17種中國(guó)人常見(jiàn)的β地貧點(diǎn)突變類(lèi)型。β地貧基因診斷試劑盒由深圳創(chuàng)益生物科技公司提供，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和結(jié)果判斷。

1.2.6 SI水平的檢測(cè) SI水平采用干化學(xué)法測(cè)定，使用強(qiáng)生公司的VITROS 250干化學(xué)分析儀及配套試劑；SF的測(cè)定采用化學(xué)發(fā)光免疫法，儀器IMMULITE 1000及其配套試劑均來(lái)源于天津德普公司。

1.2.7 sTfR水平檢測(cè) 采用透射免疫比濁法，試劑由芬蘭Orion Diagnostic公司提供，在日立7170A全自動(dòng)生化儀上測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包完成。計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。采用t檢驗(yàn)和單因素的方差分析，取P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 α地貧基因分析結(jié)果

共檢出4種α突變，分別為－－SEA，－α4.2，－α3.73種基因缺失與血紅蛋白Constant Spring（（HbCS）點(diǎn)突變（αCSα／）。其中靜止型α地貧14例，標(biāo)準(zhǔn)型α地貧47例，HbH病27例，HbCS復(fù)合血紅蛋白H病14例。

2.2 β地貧基因分析結(jié)果

共檢出8種突變類(lèi)型，分別為CD41－42，IVS－Ⅱ－654，TATAbox－28，CD17，CD 71－72（＋A），βE 26，CD 27－28，CD71－72（＋T）。其中β地貧雜合子59例，β地貧純合子或雙重雜合子31例。

2.3 地貧患兒sTfR水平檢測(cè)結(jié)果

靜止型α地貧患兒sTfR水平與正常對(duì)照相比無(wú)顯著性差異，標(biāo)準(zhǔn)型α地貧與β地貧雜合子sTfR水平略高于正常對(duì)照，HbH病患兒的sTfR水平高于正常對(duì)照，其中HbCS復(fù)合HbH病患兒的貧血程度又比缺失型HbH病患兒嚴(yán)重，其sTfR水平也高于缺失型HbH病患兒，β地貧純合子或雙重雜合子sTfR水平明顯升高。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 192例地貧患兒紅細(xì)胞參數(shù)與機(jī)體鐵狀況指標(biāo)結(jié)果（±s）

表1 192例地貧患兒紅細(xì)胞參數(shù)與機(jī)體鐵狀況指標(biāo)結(jié)果（±s）

注 與正常對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與靜止型α地貧組比較，2）P＜0.01；與標(biāo)準(zhǔn)型α地貧組比較，3）P＜0.01；與HbH病組比較，4）P＜0.01；與HbCS復(fù)合HbH病組比較，5）P＜0.01；與β地貧雜合子組比較，6）P＜0.01。

組別例數(shù)（n）Hb（g／L）sTfR（mg／L）SI（μmol／L）50 135.0±14.0 1.93±0.37 12.21±3.01 14 113.0±13.0 2.07±0.31 13.52±4.11準(zhǔn)型α地貧47 110.0±12.0 2.99±0.391）2）14.27±4.37 HbH病27 99.0±13.0 5.54±1.351）2）3）6）14.95±5.23 HbCS復(fù)合HbH病14 73.0±9.0 9.09±2.131）2）3）4）6）15.23±5.49 β地貧雜合子59 109.0±12.0 3.41±0.511）2）14.78±4.71 β地貧純合子或雙重雜合子31 54.0±11.0 12.23±2.631）2）3）4）5）6）27.74±12.291）2）3）4）5）6）正常對(duì)照靜止型α地貧

3 討論

轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（transferrin receptor，TfR.）是機(jī)體介導(dǎo)鐵代謝的主要蛋白質(zhì)之一，在鐵的運(yùn)輸，轉(zhuǎn)化和利用中起著重要的作用。其是一種跨膜糖蛋白，主要存在于骨髓紅系前體細(xì)胞的表面，包括細(xì)胞內(nèi)，跨膜部分和細(xì)胞外3個(gè)部分，在蛋白水解酶的作用下，TfR失去細(xì)胞內(nèi)和跨膜部分，以單體形式游離于外周血中，形成sTfR。sTfR在外周血中的含量與骨髓紅系前體細(xì)胞表面的TfR總量成正比。TfR的表達(dá)是建立在mRNA水平上由鐵來(lái)調(diào)控，反映紅細(xì)胞生成速度和鐵儲(chǔ)存狀況，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)鐵缺乏時(shí)，TfR mRNA的穩(wěn)定性增加，使TfR表達(dá)增加，從而增加細(xì)胞對(duì)鐵的攝取。在機(jī)體沒(méi)有鐵缺乏的情況下，sTfR水平的變化只依賴(lài)于骨髓紅系的增生程度［4］?？勺鳛楣撬杓t系增生的量化標(biāo)準(zhǔn)。

α或β地貧由于α或β基因的缺陷使體內(nèi)α或β鏈合成減少或缺如，導(dǎo)致α：β鏈出現(xiàn)不平衡，正常合成的β或α鏈由于無(wú)相應(yīng)的α或β鏈與之結(jié)合形成α2β2（HbA）四聚體，而游離于紅細(xì)胞內(nèi)形成β或α鏈4四聚體，進(jìn)而形成β或α包涵體，此包涵體附著于紅細(xì)胞膜上，對(duì)紅細(xì)胞膜造成損害，影響骨髓中紅細(xì)胞的分化成熟，造成紅細(xì)胞無(wú)效生成和溶血，這就是引起地貧臨床表現(xiàn)的分子病理生理學(xué)基礎(chǔ)［5］。從本次研究結(jié)果來(lái)看，靜止型α地貧只缺失1個(gè)α基因，其α：β鏈不平衡的程度最輕，患兒Hb含量只是輕度減低或正常，sTfR水平與正常對(duì)照相比無(wú)明顯差異。標(biāo)準(zhǔn)型α地貧缺失2個(gè)α基因，患兒sTfR水平略高于正常對(duì)照。HbH病缺失3個(gè)α基因，患兒存在輕度至中度的貧血，sTfR水平升高達(dá)到正常對(duì)照的2倍多?？梢?jiàn)，sTfR水平可從一個(gè)側(cè)面間接地反映患兒臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度。同時(shí)，我們還觀察到HbCS復(fù)合HbH病患兒的貧血程度比缺失型HbH病患兒更嚴(yán)重，其sTfR水平也高于缺失型HbH病患兒。我們分析這主要是因?yàn)镠bCS復(fù)合HbH病患兒體內(nèi)除了有過(guò)剩的β鏈，還有αCS鏈對(duì)紅細(xì)胞膜造成損害所致［6］。而HbCS屬于不穩(wěn)定血紅蛋白，在體外容易降解，雜合子含量一般只有0.5－2.0%，用常用的電泳檢查方法極易漏診［7］。HbCS復(fù)合HbH病在廣東地區(qū)的發(fā)生率又較高［8］。所以，我們建議臨床醫(yī)生在日常工作中如遇到臨床表現(xiàn)比一般缺失型血紅蛋白H病嚴(yán)重，sTfR水平明顯高于缺失型H病，而一般實(shí)驗(yàn)室檢查如電泳又診斷為缺失型血紅蛋白H病的患兒，應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步檢查如HbCS基因分析確定患兒是否合并有HbCS，以免漏診的情況發(fā)生。

β地貧純合子或雙重雜合子由于體內(nèi)幾乎沒(méi)有β鏈的合成，α：β鏈不平衡的程度最為嚴(yán)重，患兒均有中度至重度的貧血，Hb含量明顯減低，sTfR水平明顯升高達(dá)正常對(duì)照6倍多，SI也明顯升高達(dá)正常對(duì)照2倍多。而β鏈合成只是部分不足的β地貧雜合子sTfR水平只輕度升高，SI水平與正常對(duì)照無(wú)明顯差異。說(shuō)明β地貧純合子或雙重雜合子患兒體內(nèi)骨髓紅系增生異常旺盛，對(duì)鐵的吸收增加，而紅細(xì)胞在骨髓中的的無(wú)效生成使機(jī)體對(duì)鐵的利用率降低，過(guò)量的鐵在機(jī)體內(nèi)蓄積造成了機(jī)體鐵負(fù)荷超載。我們前期的研究表明定期接受規(guī)則輸血治療的重型β地貧患兒的血清鐵蛋白（serum ferritin，SF）與sTfR水平遠(yuǎn)低于重型β地貧未接受輸血患兒的SF與sTfR水平，貧血癥狀與鐵負(fù)荷超載狀況得到明顯改善，患兒的sTfR水平間接反映了患兒機(jī)體的鐵負(fù)荷情況［9］。sTfR水平可作為一項(xiàng)監(jiān)測(cè)β地貧純合子或雙重雜合子治療效果的指標(biāo)。

廣東地區(qū)是地貧的高發(fā)區(qū)，不同類(lèi)型地貧臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度，治療方法及預(yù)后情況均不同。我們希望通過(guò)本次對(duì)不同類(lèi)型地貧sTfR水平的研究，為臨床上提供一項(xiàng)能準(zhǔn)確反應(yīng)地貧患兒病情及有效監(jiān)測(cè)地貧治療效果的指標(biāo)。

［1］全國(guó)血紅蛋白病調(diào)查協(xié)作組.20個(gè)省，市，自治區(qū)60萬(wàn)人血紅蛋白病調(diào)查［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，1983，63（6）：382.

［2］Khatami S，Dehnabeh SR，Mostafavi E，et al.Evaluation and comparison of soluble transferrin receptor in thalassemia carriers and iron deficient patients［J］.Hemoglobin，2013，37：387.

［3］張之南，沈悌主編.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.第3版.北京：科學(xué)出版社，2007，29－35.

［4］Ricchi P，Ammirabile M，Costantini S，et al.A useful relationship between the presence of extramedullary erythopoeisis and the level of the soluble form of the transferrin receptor in a large cohort of adule patients with thalassemia intermedia：aprospective study［J］.Ann Hematol，2012，91：905.

［5］Pensri P，Pornpan S，Surai H，et al.A correlation of erythrokinetics，ineffectiveerythropoiesis，and erythroid precursor apoptosis in Thai patients with thalassemia［J］.Blood，2000，96：2606.

［6］Schrier SL，Bunyaratvej A，Khuhapinant A，et al.The unusual pathobiology of hemoglobin Constant Spring red blood cells［J］.Blood，1997，89：1762.

［7］孫曼娜，熊 符，張新華，等.血紅蛋白Constant Spring的表型與基因型分析［J］.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2010，27（5）：481.

［8］張 力，區(qū)小冰，顏慕霞.血紅蛋白H病的高效液相色譜與血液學(xué)特點(diǎn)分析［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)雜志，2010，14（9）：1417.

［9］張 力，區(qū)小冰，顏慕霞.血清可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體作為機(jī)體鐵負(fù)荷指標(biāo)的研究［J］.臨床血液學(xué)雜志，2010，23（12）：710.

Study on Soluble transferrin receptor in children with thalassemia in GuangDong Province

ZHANG Li，GAO Xiu－rong，YAN Mu－xia，et al.（Department of Hematology，Guangzhou Women and Children’s Hospital，Guangzhou510623，China）

Objective To investigate the relationship of soluble transferrin receptor（sTfR）value and clinical manifestation in children with thalassemia in GuangDong Province.Methods 192Blood samples from 14chidren with silent αthalassemia，47children with standardαthalassemia，27children with HbH disease，14children with HbH－CS disease，59children withβthalassemia trait，31children withβthalassemia major and 50normal individuals were detected for the values of hemoglobin（Hb），serum iron（SI）and sTfR，and the results were statistically analyzed.Results There was no distinct difference between the chidren with silentαthalassemia and normal controls on the values of sTfR.The values of sTfR in chidren with standardαthalassemia andβthalassemia trait were slightly higher than those of normal controls.The values of sTfR in chidren with HbH disease were higher than those of normal controls.And the values of sTfR in chidren withβthalassemia major were significantly higher than those of other groups.Conclusion ①Children with different genotype thalassemia have different sTfR values and sTfR values are associated with clinic manifestation.②The sTfR level could be used as an index of clinic treatment effects in children with thalassemia major.

thalassemia；soluble transfferin receptor；clinical manifestation

R556

A

張力，男，副主任技師，研究方向：小兒貧血的診斷及鑒別診斷。

2014－09－10）

1007－4287（2015）06－0969－03

＊通訊作者