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    NO、ET-1在低壓缺氧時腦血流量調(diào)節(jié)中的作用

    2015-06-01 12:30:53周玉峰黃曉龍張健民張凡喜
    中國實驗診斷學 2015年6期
    關鍵詞:血流量腦組織含水量

    周玉峰,黃 梅,黃曉龍,張健民,張凡喜

    (1.中國人民解放軍第324醫(yī)院神經(jīng)外科,重慶400020;2.重慶通信學院門診部,重慶400035)

    NO、ET-1在低壓缺氧時腦血流量調(diào)節(jié)中的作用

    周玉峰1,黃 梅2,黃曉龍1,張健民1,張凡喜1

    (1.中國人民解放軍第324醫(yī)院神經(jīng)外科,重慶400020;2.重慶通信學院門診部,重慶400035)

    目的 本文主要探討急性低壓缺氧時NO和ET-1對腦血流量變化的調(diào)節(jié)作用。方法 大鼠隨機分為平原組和急性低壓缺氧組,用電磁血流量計測定腦血流量,用Gess法和放免法分別測量血漿和腦NO2-、ET-1含量,用雙波長分光光度法測量NOS活性。結(jié)果 急性低壓缺氧時腦血流量、腦含水量、血漿和腦組織NO2-、ET-1含量、NOS活性明顯增高(P<0.05),腦ET-1/NO2-比值明顯下降(P<0.05)。結(jié)論 急性低壓缺氧時,腦血流量增加,ET-1、NO均參與了腦血流量變化的調(diào)節(jié),NO血管舒張作用大于ET-1收縮作用。

    大鼠;缺氧;腦血流量;一氧化氮;內(nèi)皮素-1

    (Chin J Lab Diagn,2015,19:0888)

    腦組織代謝以有氧化謝為主,當各種負荷增加時,腦血流量依賴其自動調(diào)節(jié)功能在一定灌注壓范圍內(nèi)可保持恒定不變,以保證腦組織的正常功能。有關急性缺氧條件下腦血流量改變和調(diào)節(jié)的研究多集中在常壓缺氧及缺血缺氧方面,而在低壓缺氧方面研究較少。目前研究表明一氧化氮(nitric oxide,NO)和內(nèi)皮素-1(endothelin-1,ET-1)均參與急性缺氧腦血流量變化的調(diào)節(jié)[1-4],但多研究NO或ET-1各自的作用,且結(jié)果不盡相同。機體處于急性低壓缺氧時,同時研究腦NO和ET-1含量的變化及相互關系對腦血流量的調(diào)節(jié)作用,報道很少。本文實驗研究了急性低壓缺氧大鼠的腦血流量、腦含水量、血漿、腦組織NO、ET-1的含量,探討了NO、ET-1在腦血流量變化中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    健康Wistar大鼠,雌雄不拘,體重242.51± 23.57g,共20只,隨機分為平原組(Control,n=10)和急性低壓缺氧組(AH,n=10)。急性低壓缺氧組在模擬海拔5 000m(間斷減壓,8h/d)3天。

    1.2 方法

    兩組各10只大鼠分別在平原(海拔308m)和高原(海拔4 000m),在10%烏拉坦(1ml/100g體重)麻醉下,分離頸總動脈并結(jié)扎頸外動脈,用電磁血流量計(MFV-3200型)測量近頭端的頸總動脈血流量(此時頸總動脈的血流量主要反應腦血流量)。然后,頸總動脈抽血測血氣和血球壓積(Hct)并取血2ml分離血漿測血生化指標,然后迅速開顱,取出適量的相同部位大腦組織,置液氧中凍存用于測組織生化指標,然后快速取皮層組織約25mm3,分析天平稱濕重、50℃烘箱內(nèi)干燥至恒重,按公式(濕重—干重)/濕重×100%計算腦組織含水量。參照曾強等人[5]及NO檢測試劑盒(第三軍醫(yī)大學臨床微生物教研室)、ET-1放免藥盒(北京東亞免疫技術研究所)說明書的方法測定血漿和腦組織NO2-、ET-1含量。參照Knowles等人[6]及一氧化氮氧合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性測試盒(軍事醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所)說明書的方法測定腦NOS活性。

    1.3 統(tǒng)計學處理

    2 結(jié)果

    2.1 急性低壓缺氧對血氣參數(shù)、腦含水量及腦血流量的影響

    急性低壓缺氧引起各組動物血氧分壓、二氧化碳分壓、血氧飽和度顯著下降,pH無明顯變化;急性低壓缺氧時腦含水量、腦血流量明顯增加(表1)。

    表1 缺氧對血氣參數(shù)、腦含水量及腦血流量的影響(±s,n=10)

    表1 缺氧對血氣參數(shù)、腦含水量及腦血流量的影響(±s,n=10)

    *P<0.05與對照組相比

    指標對照組急性低壓缺氧組pH血氧分壓(kPa)二氧化碳分壓(kPa)血氧飽和度(%)血球壓積(Hct)腦含水量(%)腦血流量(ml/min)7.272±0.064 11.95±1.09 6.54±1.02 96.23±1.59 0.39±0.05 74.88±1.57 7.79±0.57 7.288±0.043 7.34±0.68*5.37±0.41*83.10±3.12*0.41±0.03 78.84±1.63*10.11±0.98*

    2.2 急性低壓缺氧對血漿、腦組織NO2-、ET-1含量、腦組織NOS活性及腦組織ET-1/NO2-比值的影響

    急性低壓缺氧引起血漿、腦組織NO2-、ET-1含量增加,腦組織NOS活性增加;腦組織ET-1/NO2-比值下降(表2)。

    表2 缺氧對血漿、腦組織NO2-、ET-1含量、腦組織NOS活性及腦組織ET-1/NO2-比值的影響(±s,n=10)

    表2 缺氧對血漿、腦組織NO2-、ET-1含量、腦組織NOS活性及腦組織ET-1/NO2-比值的影響(±s,n=10)

    *P<0.05與對照組相比

    指標對照組急性低壓缺氧組血漿NO2-(μmol/L)腦組織NO2-(nmol/mg)腦組織NOS(nmol/min.g)血漿ET-1(pg/ml)腦組織ET-1(pg/mg)腦組織ET-1/NO2-35.44±2.89 3.74±1.91 0.18±0.12 20.88±1.92 32.54±4.56 9.01±1.15 53.34±6.42*7.24±2.63*0.42±0.23*31.15±2.57*42.73±5.71*6.12±0.82*

    3 討論

    本研究結(jié)果與以往文獻報道一致[4,7],我們觀察到,在摸擬高原,大鼠腦含水量、腦血流量明顯增加。急性低壓缺氧時腦血流量的變化調(diào)節(jié)機制目前不十分清楚,目前主流觀點神經(jīng)因素在腦血流量調(diào)節(jié)中不起主導作用得到共識,各種血管活性物質(zhì)在腦血流量的調(diào)節(jié)所起作用的研究越來越受到重視。

    國內(nèi)外資料表明NO和ET-1參與急性缺氧時腦血流量的調(diào)節(jié)。Van Mil等人[4]發(fā)現(xiàn),健康志愿者吸入氮氧混合氣體導致缺氧,腦血流量明顯增加,而用NO抑制劑L-NMM能夠使腦血流量降至正常水平。鄭寧等人[7]也發(fā)現(xiàn),常壓急性缺氧豚鼠腦組織含水量、血漿NO和ET-1水平均有所上升,以NO上升為主。以往研究主要是測定血漿水平,不能完全反應腦部NO、ET-1含量,直接測定腦組織NO2-、ET-1含量及NOS活性,國內(nèi)外研究甚少。我們研究表明,血漿NO2-含量、腦組織NO2-含量及NOS活性顯著增加,這表明急性低壓缺氧時,無論從代謝產(chǎn)物還是酶活性方面均證明NO合成增多,導致腦血流量增加。急性低壓缺氧如何導致NO合成增多的原因目前不明確,有人研究表明,缺氧內(nèi)皮細胞內(nèi)游離鈣濃度會迅速增加,從而激活NO合酶引起NO合成增多[2]。急性缺氧時,有人觀察到,小鼠一氧化氮合酶基因表達增強,NO合成增加,從而舒張腦血管,導致腦血流量增加[8]。本人也觀察到急性低氧時內(nèi)皮細胞分泌NO增加,舒張腦血管,是機體的一種重要防御機制,同文獻報道一致。

    以往文獻和本人均觀察到急性缺氧能夠引起血漿、腦組織ET-1增加[7,8]。急性缺氧時ET-1合成增加的原因是低氧刺激動脈化學感受器使交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮,刺激了ET分泌,同時,內(nèi)皮細胞膜通透性增加或破裂,ET-1大量釋放入血。急性低壓缺氧時觀察NO和ET-1相互關系及對腦血流量的調(diào)節(jié),國內(nèi)外少見報道。我們觀察到,急性低壓缺氧時,NO、ET-1明顯增加,由于NO具有舒張血管作用,而ET-1具有收縮血管作用,因此ET-1此時的作用可能是抑制腦血管過度舒張。同時我們也觀察到腦ET-1/NO2-比值下降,表明急性低壓缺氧時,NO腦血管舒張作用大于ET-1收縮作用。正常條件下,ET與NO的合成和釋放處于動態(tài)平衡,但在急性低壓缺氧時NO和ET-1均增加,NO合成多于ET-1,因此急性低壓缺氧時腦血流量的調(diào)節(jié)以NO舒張血管為主。

    [1]Fabian RH,Perez Polo JR,Kent TA.Perivascular nitric oxide and superoxide in neonatal cerebral hypoxia-ischemia[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol,2008,295(4):H1809.

    [2]Park L,Thornhill J.Phosphoramidon-sensitive endothelin-con-verting enzymes modulate cerebral blood flow and neural damage of hypoxic rats[J].Neurosci-Lett,2001,301(2):95.

    [3]Lo AC,Chen AY,Hung VK,et al.Endothelin-1overexpression leads to further water accumulation and brain edema after middle cerebral artery occlusion via aquaporin 4expression in astrocytic end-feet[J].J Cereb Blood Flow Metab,2005,25(8):998.

    [4]Van Mil AH,Spilt A,Van Buchem MA,et al.Nitric oxide mediates hypoxia-induced cerebral vasodilation in humans[J].J Appl Physiol,2002,92(3):962.

    [5]曾 強,李振甲,余霞君,等.內(nèi)皮素的放謝免疫分析[J].解放軍醫(yī)學雜志,1991,16:403.

    [6]Knowles RG,Salter M,Brooks SL,et al.Anti-in-flammatory glucocorticoids inhibit the induction by endotoxin of nitric oxide synthase in the lung,liver and aorta of the rat[J].Biochem Biophys Res Commun,1990,172:1042.

    [7]鄭 寧,賁曉明,黃紹光,等.急性低壓缺氧性腦水腫血漿內(nèi)皮素和一氧化氮含量變化及高壓氧干預治療[J].上海醫(yī)學,1999,22(11):667.

    [8]劉鳳云,王曉勤,陳秋紅,等.低氧環(huán)境下大鼠與高原鼠兔血液中NO與ET-1比較[J].解放軍預防醫(yī)學雜志,2005,23(3):191.

    Roles of nitric oxdide and endothelin-1 regulation of cerebral bood flow during acute hypoxia


    ZHOU Yu-feng1,HUANG Mei2,HUANG Xiao-long1,et al.(1.Department of Neurosurg,Hospital 324 of PLA,Chongqing400020,China;2.Department of Clinic,Chongqing Communication Institute,Chongqing400035,China)

    Objective The article was to investigate the roles of nitric oxide(NO)and enothelin-1(ET-1)in regulation of cerebral blood flow(CBF)during acute hypoxia.Methods Rats were divided into normoxic group(Control)and acute hypoxia(AH),CBF were measured by electromagnetic blood flowmeter,the changes of plasm NO2-,ET-1contents,brain NO2-,ET-1contents and NOS activity were observed.Results Acute hypoxia caused an increase in CBF,plasm NO2-,ET-1contents,brain NO2-、ET-1contents and NOS activity,the ratio of ET-1/NO2-in the brain were decreased,as compared with the control group.Conclusion NO and ET-1may be involved in the regulation of CBF in acute hypoxia,but the NO-dependent vasodilation was stronger than the ET-1-dependent vasoconstriction.

    Rat;Hypoxia;Cerebral blood flow;Nitric oxide;Endothelin-1

    R331.3;R364.4

    A

    2014-08-11)

    1007-4287(2015)06-0888-03

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