EDTA—K2導(dǎo)致血小板假性減少的現(xiàn)象

劉小慶

[摘要] 目的 針對(duì)臨床偶見(jiàn)的EDTA抗凝劑引起的假性血小板減少病例，分析原因從中發(fā)現(xiàn)及找出能夠糾正其減少的方法。 方法 對(duì)10例血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板低于50×109/L患者分別采用不同抗凝劑不同檢測(cè)方法在不同時(shí)間段進(jìn)行血小板測(cè)定。 結(jié)果 隨著時(shí)間的推移，EDTA抗凝血的血小板測(cè)定值明顯下降。 結(jié)論 如遇血小板減少應(yīng)慎發(fā)報(bào)告，采用多種方法排除一切可能的影響，力求為臨床醫(yī)生的診治提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，避免由于血小板假性減少導(dǎo)致的誤診、誤治。

[關(guān)鍵詞] 血小板假性減少；EDTA抗凝劑；血小板計(jì)數(shù)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.11 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2015）19-0123-03

目前隨著門(mén)診及住院患者越來(lái)越多，檢驗(yàn)科的工作量越來(lái)越大，自動(dòng)化分析儀很受檢驗(yàn)工作者的歡迎。全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀因具有檢測(cè)快速、操作方便、結(jié)果重復(fù)性好、效率高等優(yōu)點(diǎn)而在臨床血液分析中得到廣泛應(yīng)用，檢驗(yàn)人員對(duì)其越來(lái)越依賴(lài)。但即便血細(xì)胞分析儀有上述優(yōu)點(diǎn)也還不能完全取代血細(xì)胞檢測(cè)時(shí)人工計(jì)數(shù)及文類(lèi)數(shù)，這其中尤以血小板的計(jì)數(shù)為主。由于血小板存在黏附、聚集的生理特點(diǎn)，更容易引起全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的計(jì)數(shù)偏差，所以我們?cè)谌粘５臋z驗(yàn)工作中，要認(rèn)真觀察圖譜和分析儀器所提供的各類(lèi)數(shù)據(jù)，如果出現(xiàn)異常的血小板直方圖且檢測(cè)結(jié)果異常，或異常的血小板計(jì)數(shù)與臨床癥狀不吻合時(shí)，應(yīng)用及時(shí)人工計(jì)數(shù)、涂片染色鏡檢或改用枸櫞酸鈉抗凝進(jìn)行檢測(cè)，以獲取準(zhǔn)確的檢測(cè)數(shù)據(jù)，力求為臨床醫(yī)生的診治提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)論，避免血小板假性減少所致的誤診、誤治。同時(shí)還可避免不必要的檢驗(yàn)（如骨髓穿刺等）。近年來(lái)關(guān)于EDTA-K2抗凝引起血小板假性減少的報(bào)道屢屢出現(xiàn)，我院也出現(xiàn)多例因用EDTA-K2抗凝而假性血小板減少的病例，本文對(duì)此進(jìn)行初步探討研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月～2013年12月我院住院患者10例，男4例，女6例，均為EDTA-K2抗凝標(biāo)本，利用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀做血常規(guī)檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)低于50×109/L，且血小板直方圖明顯不夠順滑，并提示有血小板的分布異常。及時(shí)與臨床溝通后均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)皮膚黏膜出血點(diǎn)和紫癜等出血體征。

1.2 儀器與試劑

日本Sysmes-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑；EDTA-K2抗凝管；奧林巴斯雙筒顯微鏡；草酸銨稀釋液；瑞氏-吉姆薩染液。

1.3 方法

為明確血小板的減少是否為EDTA-K2干擾所致，試驗(yàn)步驟如下：①分別采集10例患者末梢血20 μL加入0.38 mL草酸銨稀釋液中，按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版嚴(yán)格操作[1]，計(jì)數(shù)3次取平均值作為最終報(bào)告結(jié)果。與此同時(shí)取末梢血推制血涂片，染色鏡檢，觀察血涂片中血小板數(shù)量及分布、聚集情況。②分別采集10例患者2 mL靜脈血于EDTA-K2抗凝管中，充分混勻后，分別在5、15、30、60 min[2]四個(gè)不同時(shí)間段用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)，每份標(biāo)本檢測(cè)3次，取平均值作為最終報(bào)告結(jié)果，同時(shí)在各時(shí)間段用抗凝血推制血涂片染色鏡檢，觀察血涂片中血小板數(shù)量及分布、聚集情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SSPS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)或方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

10例標(biāo)本的血涂片鏡檢所見(jiàn)基本一致且均有如下表現(xiàn)：①末梢血的血涂片與抗凝血5 min時(shí)的血涂片，可見(jiàn)血小板散在分布且形態(tài)大小正常，整片未見(jiàn)血小板聚集現(xiàn)象。②抗凝血15 min時(shí)的血涂片可見(jiàn)血小板散在分布，血片尾部及邊緣可見(jiàn)小簇血小板聚集。③抗凝血30 min時(shí)的血涂片可見(jiàn)血小板形成大小不等的聚集，分布在血片尾部及邊緣，血小板的散在分布情況較5、15 min的血片有明顯的減少。④抗凝血60 min的血涂片可見(jiàn)血小板形成大簇的聚集，幾乎不見(jiàn)散在的血小板，見(jiàn)圖1。

從表1可知隨著時(shí)間的逐漸推移，EDTA-K2抗凝血所檢測(cè)血小板數(shù)量明顯下降，血小板聚集現(xiàn)象越發(fā)明顯。15 min、30 min、60 min抗凝血的血小板數(shù)量與5 min抗凝血的血小板數(shù)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。末梢血手工計(jì)數(shù)血小板數(shù)與全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)5 min抗凝血的血小板數(shù)相比， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），由此可認(rèn)為EDTA-K2抗凝血如能在5 min內(nèi)完成檢測(cè)，就能有效避免EDTA-K2引起的血小板計(jì)數(shù)假性減少的情況，得到較為真實(shí)的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果。

圖1 60 min的血涂片，可見(jiàn)大片血小板聚集現(xiàn)象（×1000）

3 討論

血小板在止血與血栓的過(guò)程中有著重要的生理作用，主要在體內(nèi)參與止血及血栓形成，因而血小板數(shù)量異?；蚬δ苋毕菔浅鲅院脱ㄐ约膊〉闹匾∫蛑?。為此血小板計(jì)數(shù)是臨床常用于出血性疾病診斷治療的檢測(cè)項(xiàng)目之一[3]，計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確與否對(duì)臨床判斷出血趨勢(shì)、分析治療效果有著非常重要的意義。1993年國(guó)際血液標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)文件建議血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析宜用EDTA鹽，EDTA鹽能與血液中的凝血因子Ⅳ（鈣離子）形成穩(wěn)定的螯合物，從而阻斷凝血的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)達(dá)到抗凝的效果，同時(shí)EDTA鹽對(duì)血細(xì)胞的形態(tài)大小影響很小，EDTA-K2還能夠增加血小板表面所帶電荷，從而能有效防止血小板聚集現(xiàn)象的產(chǎn)生，但與此同時(shí)亦有報(bào)道稱(chēng)EDTA-K2能誘導(dǎo)血小板聚集，臨床稱(chēng)之為EDTA依賴(lài)性血小板假性減少癥（EDP）[4]。

導(dǎo)致EDTA-K2抗凝血的血小板計(jì)數(shù)減少的原因多樣，主要有以下幾點(diǎn)：①使用EDTA-K2作為抗凝劑可造成血小板活化引起血小板糖膜的改變，從而導(dǎo)致血小板膜表面某種隱匿性抗原構(gòu)象發(fā)生改變而暴露出抗原決定簇，暴露的抗原可與患者血漿中的某些自身抗體相結(jié)合[5]，這些血小板的自身抗體可以是IgM、IgG或IgA免疫反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。這些抗原抗體復(fù)合物不僅可以改變血小板表面電荷，還能激活血小板膜上的磷脂酶C和磷脂酶A2，進(jìn)而水解血小板膜磷脂釋放膠原、凝血酶原、花生四烯酸、5-TH等活性物質(zhì)，從而不同程度地活化血小板纖維蛋白原受體，促使血小板與纖維蛋白原受體結(jié)合而聚集成團(tuán)[6]，導(dǎo)致血小板假性減少。此現(xiàn)象偶見(jiàn)正常人，一般多見(jiàn)于自身免疫性疾病患者。②由免疫介導(dǎo)的，在EDTA-K2基礎(chǔ)上發(fā)生的，自身抗血小板抗體導(dǎo)致血小板相互凝聚，同時(shí)血小板的膜糖蛋白[7]和冷抗血小板自身抗體直接作用，與血小板結(jié)合后的自身抗體FC端和淋巴細(xì)胞膜或單核細(xì)胞膜上的FC受體相結(jié)合發(fā)生衛(wèi)星現(xiàn)象[8]；這也是導(dǎo)致EDTA-K2抗凝血放置時(shí)間越長(zhǎng)，血小板聚集現(xiàn)象越嚴(yán)重的主要原因。③EDTA-K2抗凝血中，血小板黏附于中性粒細(xì)胞的表面，其原因是中性粒細(xì)胞表面的IgG或FC片段和EDTA相互作用，非特異性結(jié)合于血小板膜糖蛋白所致[9]，這種非特異性的結(jié)合與藥物和疾病無(wú)關(guān)，這些黏附于中性粒細(xì)胞表面的血小板被血細(xì)胞分析儀作為白細(xì)胞而誤計(jì)，造成血小板假性減少。④高膽固醇和高三酰甘油血癥時(shí)，血小板也易發(fā)生聚集[10]，無(wú)論是血細(xì)胞分析儀測(cè)定還是手工計(jì)數(shù)均會(huì)出現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)減少，但血涂片染色中可見(jiàn)聚集的血小板。其原因是高血壓、糖尿病患者由于存在血管內(nèi)膜損傷現(xiàn)象導(dǎo)致在體內(nèi)引起血小板不易解散的聚集，從而血小板計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。⑤EDTA-K2會(huì)使血小板外形發(fā)生變化，血小板外膜游離端向外伸展，在周?chē)纬蓚巫?。偽足間相互纏繞形成血小板可逆性聚集，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性減少。

有報(bào)道稱(chēng)用EDTA-K2作為抗凝劑在體外導(dǎo)致血小板凝聚成塊的發(fā)生率為0.09%～0.21%[11]，多發(fā)生于某些腫瘤、自身免疫性疾病、膿毒血癥、環(huán)境溫度或抗血小板藥物[12]的應(yīng)用等情況?？傊?，造成血小板計(jì)數(shù)假性減少的原因復(fù)雜，檢驗(yàn)工作者在日常工作中，無(wú)論工作量多大，都要認(rèn)真對(duì)待每一份標(biāo)本[13]，遇到血小板減少的標(biāo)本，都要多與臨床溝通和觀察血細(xì)胞分析儀給出的報(bào)警提示[14]，結(jié)合手工計(jì)數(shù)和血涂片染色鏡檢，或采取其他的相應(yīng)措施進(jìn)行糾正。有報(bào)道認(rèn)為在EDTA-K2抗凝管中加入丁胺卡那霉素或氟化鈉可有效抑制血小板聚集現(xiàn)象的發(fā)生[15]。確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[16]，減少患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神負(fù)擔(dān)，避免醫(yī)療矛盾的產(chǎn)生。

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（收稿日期：2015-04-03）