DC/CIK細胞治療對白細胞、紅細胞、血小板和淋巴細胞的影響

安東建

[摘要] 目的 探討DC/CIK細胞治療對白細胞、紅細胞、血小板和淋巴細胞的影響。 方法 對接受DC/CIK細胞治療的63例癌癥患者的血細胞資料進行回顧性分析。結果 在第一療程DC/CIK細胞治療前和第二療程DC/CIK細胞治療后，63例患者的WBC、RBC、PT和LYM的數(shù)量變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結論 DC/CIK細胞治療幾乎沒有血液學毒副反應，臨床應用安全。

[關鍵詞] 樹突狀細胞；細胞因子誘導的殺傷細胞； 白細胞；紅細胞；血小板；淋巴細胞

[中圖分類號] R392 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）19-0016-03

在可以預見的將來，每年將有數(shù)以百萬計的人診斷出癌癥[1]。手術、放療、化療仍是主要的治療方法，但死亡率很高[2]。與傳統(tǒng)的手術、放療、化療相比，腫瘤免疫治療毒副反應輕微，療效較好，逐漸成為第四種治癌方法[3]。DC/CIK 細胞（dendritic cell，DC，樹突狀細胞/cytokine induced killer cell，CIK，細胞因子誘導的殺傷細胞）治療是臨床較為普遍應用的過繼性細胞免疫治療技術，抗腫瘤作用強大、還能降低腫瘤進展的風險、延長生存[4]。然而，作為一種新的細胞治療技術，其對WBC、RBC、PT和LYM究竟有何影響，臨床少有報道。為此，回顧性分析2011年1月～2012年6月期間接受DC/CIK細胞治療的63例癌癥患者的血細胞資料，探討DC/CIK細胞治療與WBC、RBC、PT和LYM的相互影響，以保障其臨床應用的安全。

1 對象與方法

1.1 研究對象

63例晚期腫瘤患者均經(jīng)過病理學或細胞學檢查確診。男44例，女19例。年齡21～72歲。鼻咽癌2例，肺癌36例，乳腺癌4例，食管癌1例，胃癌2例，結腸癌4例，直腸癌2例，肝癌4例，宮頸癌1例，腎癌3例，淋巴瘤2例，惡性黑色素瘤2例。

1.2 方法

1.2.1 DC/CIK細胞培養(yǎng)[5] 依據(jù)我院生物實驗室的標準流程，在患者簽字同意后，經(jīng)上肢靜脈抽取患者靜脈血100 mL。隨后，采用淋巴細胞分離液逐步分離出單個核細胞。反復用生理鹽水洗滌單個核細胞3 次。將分離出的單個核細胞分別進行DC及CIK細胞的培養(yǎng)。①DC細胞培養(yǎng)：第一日，用含細胞因子IL-4、TNF的培養(yǎng)基培養(yǎng)DC細胞。每隔一天技術員采用半量換液一次。第十日，細胞培養(yǎng)成熟，此時再將CIK細胞混合，共同培養(yǎng)。②CIK細胞培養(yǎng)：第一日，用含細胞因子IFN-γ、抗CD3單抗等無血清生長培養(yǎng)基培養(yǎng)CIK細胞。24 h后加入含細胞因子IL-1和IL-2等無血清生長培養(yǎng)基。按要求需每2～3天更換培養(yǎng)基一次，并補加IL-2。第十日，CIK細胞與DC細胞共同培養(yǎng)。為了解有無微生物感染，在第十二日抽取樣本進行細菌、霉菌檢測。第十五日，DC/CIK細胞培養(yǎng)成熟。最后，將培養(yǎng)成熟的細胞平均分成6袋，每日一袋靜脈回輸給患者。

1.2.2 DC/CIK細胞回輸 經(jīng)外周靜脈，患者每天靜脈輸注DC/CIK細胞一次，每次回輸細胞的總數(shù)在（1.5～2.0）×109。我們規(guī)定6 d為一個療程，每療程細胞總數(shù)≥9×109。每個患者均接受2個療程的治療。

1.3 觀察指標

所有患者在第一療程DC/CIK細胞回輸之前和第二療程DC/CIK細胞回輸之后，均進行血常規(guī)檢查。WBC計數(shù)單位及正常值為（4.0～10.0）×109/L，RBC計數(shù)單位及正常值為男性（4.0～5.5）×1012/L、女性（3.5～5.0）×1012/L，PT計數(shù)單位及正常值為（100～300）×109/L，LYM計數(shù)單位及正常值為（0.8～2.0）×109/L。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用配對t檢驗，檢驗水準α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

DC/CIK細胞治療前后，63例癌癥患者WBC、RBC、PT和LYM等血細胞計數(shù)的變化無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1 63例患者接受DC/CIK細胞治療前后血細胞計數(shù)的變化（x±s）

3 討論

血液是流動于心血管內(nèi)的液態(tài)組織，又稱外周血，由RBC、WBC、PT和血漿組成[6]。各類血細胞均起源于造血干細胞[7]。

WBC為無色、有核的細胞，在血液中一般呈球形。WBC的主要功能是機體的防御和免疫功能[8，9]。WBC所具有的變形、游走、趨化、吞噬和分泌等特性是執(zhí)行防御功能的生理基礎[7]。近年文獻報道，白細胞計數(shù)與癌癥死亡率[10]、肺癌發(fā)病[11]等密切相關。由此可見，維持WBC在正常范圍內(nèi)變化，保持相對平衡，臨床意義重大。本研究證實，63例癌癥患者在DC/CIK細胞治療前后白細胞計數(shù)的差異并無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明DC/CIK細胞治療對WBC幾乎沒有細胞毒作用。

正常成熟RBC無核，呈雙凹園碟形，其主要功能是運輸氧氣和二氧化碳[7]。RBC水平的高與低，必然導致人體生理病理學改變。如，RBC分布寬度增加與癌癥死亡風險增加有關[12]；輸注衰老的RBC有促進癌癥進展的風險[13]；RBC減少可引起癌癥患者貧血，嚴重影響抗癌治療的進行。然而，DC/CIK細胞治療并不抑制RBC，這就解釋了DC/CIK細胞治療前后RBC的差異并無統(tǒng)計學意義（P>0.05）的原因。

PT體積小，無細胞核，呈雙面微凸的圓盤狀。血小板維持血管壁的完整性，具有粘附、釋放、聚集、收縮和吸附等生理特性，參與凝血和止血過程[7]。在某些病理情況下，血小板也與腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲和進展相關[14]。我們的研究表明，DC/CIK細胞治療前后PT的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

LYM 分為T淋巴細胞、B淋巴細胞和自然殺傷細胞（natural killer，NK）三類。T淋巴細胞和B淋巴細胞分別與細胞免疫和體液免疫有關，而NK細胞是機體天然免疫的重要執(zhí)行者[7]。人體的免疫功能在抗腫瘤免疫中發(fā)揮著重要的作用。除此之外，循環(huán)T淋巴細胞和輔助性淋巴細胞計數(shù)可能還是預測腫瘤對放化療療效的有效標志物[15]?；诒狙芯康慕Y果，我們沒有發(fā)現(xiàn)DC/CIK細胞治療前后LYM 的差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

CIK細胞是一群異質(zhì)性且同時具有 T細胞和NK細胞表型的免疫效應細胞。在臨床前試驗和動物腫瘤模型中，CIK細胞表現(xiàn)出強大的抗腫瘤活性，增殖速度快，對多種腫瘤有殺傷作用[16]。DC細胞是目前已知的功能最強的抗原提呈細胞[17]。它將腫瘤抗原提呈到T淋巴細胞，然后誘導特異性細胞毒性T細胞抵抗腫瘤抗原。CIK細胞能夠直接殺傷腫瘤細胞，兩種細胞聯(lián)合應用可提高抗腫瘤效果[18]。DC/CIK細胞治療安全有效，副作用十分輕微[19]。與此相反，抗腫瘤的放療和化療雖能治愈部分腫瘤患者，但因其重大的毒副反應，相當一部分患者不能耐受，因而拒絕放化療或被迫中斷放化療，多數(shù)患者最終死于腫瘤進展。通過對本組63例癌癥患者血細胞的分析發(fā)現(xiàn)，RBC、WBC、PT、LYM在DC/CIK細胞治療前后的變化并無統(tǒng)計學差異，說明DC/CIK細胞治療的安全性，也為日后大規(guī)模臨床應用DC/CIK細胞治療奠定了堅實的基礎。

綜上所述，DC/CIK細胞治療幾乎沒有血液學毒副反應，其可能的原因是DC/CIK細胞治療對正常骨髓及脾細胞無細胞毒活性[20]。DC/CIK細胞治療特別適合手術、放療、化療后癌癥患者的輔助治療或因年老、體弱根本不能耐受放療、化療的癌癥患者。

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（收稿日期：2015-04-10）