干燥綜合征肺功能變化特點(diǎn)及其與T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8、BTLA的相關(guān)性分析

劉健 萬(wàn)磊 朱福兵 黃傳兵 汪元 方利 章平衡 談冰

【摘 要】目的：觀察干燥綜合征患者肺功能參數(shù)與T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8與B、T淋巴細(xì)胞衰減因子（BTLA）的變化，探討干燥綜合征患者肺功能變化與T、B細(xì)胞的關(guān)系。方法：選取干燥綜合征患者120例設(shè)為觀察組，同時(shí)選取健康體檢者60例設(shè)為對(duì)照組。采用肺功能儀檢測(cè)干燥綜合征患者肺功能，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干燥綜合征患者外周血CD3、CD4、CD8表面BTLA表達(dá)，觀察干燥綜合征患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的變化。結(jié)果：干燥綜合征患者肺功能降低率為77.5%；與對(duì)照組比較，觀察組肺功能參數(shù)、CD3+ BTLA+ T、CD4+ BTLA+ T、CD8+ BTLA+ T細(xì)胞降低（P < 0.05或P < 0.01）；相關(guān)性分析顯示，肺功能參數(shù)FEV1/ FVC與PLT、體倦乏力積分呈負(fù)相關(guān)，MEF25-75與病程、少氣懶言積分呈負(fù)相關(guān)，MEF50與腮腺腫大積分呈負(fù)相關(guān)，PEF與病程呈負(fù)相關(guān)，DLCO與病程、超敏

C-反應(yīng)蛋白、口干咽燥積分、面色萎黃積分呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05或P < 0.01）。FEV1/FVC與IgG呈正相關(guān)，PEF與淚膜破裂時(shí)間、CD8+ BTLA+ T cell呈負(fù)相關(guān)，DLCO與唾液流率、CD4+ BTLA+ T cell呈正相關(guān)

（P < 0.05或P < 0.01）。結(jié)論：干燥綜合征患者存在肺功能下降，且肺功能降低與CD3、CD4、CD8等T細(xì)胞亞群、BTLA表達(dá)失衡有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 干燥綜合征；肺功能；T細(xì)胞亞群；B、T淋巴細(xì)胞衰減因子；免疫

干燥綜合征（sj?gren's syndrome，SS）是一種主要累及外分泌腺的慢性炎癥性自身免疫性疾病。本病臨床除有涎腺和淚腺受損功能下降而出現(xiàn)口干、眼干外，尚有其他外分泌腺及腺體外其他臟器受累而出現(xiàn)多系統(tǒng)損害的癥狀，如呼吸系統(tǒng)等[1]。其中合并肺間質(zhì)病變?cè)谂R床上較為常見(jiàn)，肺間質(zhì)病變是SS臨床分期、疾病評(píng)估、治療預(yù)后的重要指

標(biāo)[2-3]。SS繼發(fā)肺間質(zhì)病變臨床表現(xiàn)之一是肺功能水平的降低，因此，應(yīng)及早進(jìn)行肺功能水平的檢測(cè)，及時(shí)診斷，并予以早期治療。SS發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8與B、T淋巴細(xì)胞衰減因子（BTLA）的表達(dá)失衡可能是其發(fā)病的重要機(jī)制之一[4-5]。本研究通過(guò)觀察SS患者肺功能水平與CD3、CD4、CD8、BTLA表達(dá)的關(guān)系，以期探討SS肺功能降低的可能機(jī)制。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2011年10月至2013年10月

在本院就診的SS患者120例，設(shè)為觀察組。男

18例，女102例；年齡30～75歲，平均（58.36±

22.52）歲；病程1～25年，平均（10.37±6.15）年。

另選取本院體檢中心，經(jīng)體檢和免疫學(xué)檢查排除自身免疫性疾病，身體健康、無(wú)明顯器質(zhì)性疾病者60例，設(shè)為對(duì)照組。男15例，女45例；年齡20～60歲，平均（32.25±17.52）歲。兩組在性別、年齡等方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 符合2002年制訂的SS國(guó)際分類（診斷）標(biāo)準(zhǔn)[6]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)；②通過(guò)本院倫理審查委員會(huì)審批，患者愿意并簽署知情

同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ①頸頭面部放療史，丙肝病毒感染，AIDS，淋巴瘤，結(jié)節(jié)病，GVH病，抗乙酰膽堿藥的應(yīng)用者（如阿托品、蓖若堿、澳丙胺太林、顛茄等）；②合并有肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者；③發(fā)病前有精神障礙家族史和發(fā)病后有意識(shí)障礙的患者；④妊娠或哺乳期婦女。

2 方 法

2.1 肺功能測(cè)定 肺功能檢測(cè)項(xiàng)目為一秒用力呼氣容積（forced expiratory volume in 1 second，

FEV1）、一秒用力呼氣容積占用力肺活量比值（FEV1/FVC）、用力最大呼氣流量（peak expiratory flow，PEF）、最大呼氣中段流量（maximal mid-expiratory flow，MEF25-75）、用力呼氣50%流量 （maximal mid-expiratory flow velocity in pulmonary vital capacity 50%，MEF50）、用力呼氣25%流量（maximal mid-expiratory flow velocity in pulmonary vital capacity 25%，MEF25）、一氧化碳彌散功能（DLCO）。所有患者立位檢查，每項(xiàng)指標(biāo)重復(fù)測(cè)量3次，取平均值。為了消除性別、年齡、身高、體質(zhì)量等因素對(duì)肺功能測(cè)定值的影響，以上參數(shù)均以實(shí)測(cè)值/正常預(yù)計(jì)值（%）表示，各參數(shù)皆以實(shí)測(cè)值/正常預(yù)計(jì)值 < 80%為異常。

2.2 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)測(cè)定 血常規(guī)采用Sysmex K-4500型全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行測(cè)定；紅細(xì)胞沉降率（ESR）采用魏氏法測(cè)定；免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、類風(fēng)濕因子（RF）、α1酸性糖蛋白（α1-AGP）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）采用日立7060型全自動(dòng)生化

分析儀進(jìn)行測(cè)定。以上指標(biāo)均由本院檢驗(yàn)中心進(jìn)行檢測(cè)。

2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD3、CD4、CD8 T細(xì)胞表面BTLA表達(dá) 取全血5 mL，采用以下熒光標(biāo)記的單抗進(jìn)行染色：CD4-APC-y7 /CD8-Percp/CD3-PE-cy7/BTLA-PE；CD4-APC-Cy7/CD8-FITC/CD3-PE-cy7及相應(yīng)同型對(duì)照。按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，用Epics XL流式細(xì)胞儀檢測(cè)，F(xiàn)lowJo軟件進(jìn)行分析。以FSC、SSC、CD3定義T淋巴細(xì)胞，分析CD3+、CD4+、CD8+ T細(xì)胞表面BTLA表達(dá)水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)為連續(xù)性變量以表示，樣本均采用Kolmogorov-Smirnov正態(tài)性檢驗(yàn)；兩組間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，各指標(biāo)之間關(guān)系采用Spearman相關(guān)性分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 SS患者肺功能異常率變化 SS患者中均有不同程度的彌散功能障礙，肺功能降低93例，占全部患者的77.50%；其中，不同程度的限制性通氣障礙72例，占全部患者的60.00%，占肺功能降低患者的77.41%；混合型通氣障礙21例，占全部患者的17.50%，占肺功能降低患者的22.58%。

3.2 兩組肺功能水平比較 與對(duì)照組比較，觀察組患者肺功能參數(shù)FEV1/FVC、PEF、MEF25-75、

MEF50、MEF25及DLCO明顯降低（P < 0.05或

P < 0.01）。見(jiàn)表1。

3.3 兩組實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 與對(duì)照組比較，觀察組患者唾液流率、淚膜破裂時(shí)間、外周血CD3+ BTLA+ T cell、CD4+ BTLA+ T cell、CD8+ BTLA+

T cell及血清Hb表達(dá)降低，超敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、IgG升高（P < 0.05或P < 0.01）。見(jiàn)表2。

3.4 SS患者肺功能變化與癥狀體征、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示，肺功能參數(shù)FEV1/FVC與PLT、體倦乏力積分呈負(fù)相關(guān)，MEF25-75與病程、少氣懶言積分呈負(fù)相關(guān)，MEF50與腮腺腫大積分呈負(fù)相關(guān)，PEF與病程呈負(fù)相關(guān)，DLCO與病程、hs-CRP、口干咽燥積分、面色萎黃積分呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05或P < 0.01）。FEV1/ FVC與IgG呈正相關(guān)，PEF與淚膜破裂時(shí)間、CD8+ BTLA+ T cell正負(fù)相關(guān)，DLCO與唾液流率、CD4+ BTLA+ T cell呈正相關(guān)（P < 0.05或P < 0.01）。見(jiàn)表3。

4 討 論

SS是一種彌散性結(jié)締組織病，極易繼發(fā)肺臟受累，據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，其肺部受累率最高可以達(dá)到90%。SS肺部病變表現(xiàn)形式主要為小氣道病變、肺間質(zhì)纖維化、間質(zhì)性肺炎、肺動(dòng)脈高壓等，其中又以肺間質(zhì)纖維化最為重要。SS肺部病變以小氣道病變及間質(zhì)性肺炎為主，肺間質(zhì)纖維化是SS最常見(jiàn)、最嚴(yán)重的并發(fā)癥[7-8]。SS肺間質(zhì)病變可導(dǎo)致感染、呼吸衰竭，是SS患者死亡的主要原因之一。

SS肺部病變臨床表現(xiàn)為咳嗽、活動(dòng)后氣喘、發(fā)熱，部分人群會(huì)出現(xiàn)胸痛，查體雙肺底可聞及Velco啰音[9]。極易被忽視而造成漏診、誤診[10]，實(shí)驗(yàn)室檢查與臨床表現(xiàn)并不一致，肺功能及影像學(xué)在早期均存在不同程度的ILD表現(xiàn)，且SS-ILD的發(fā)生與疾病的活動(dòng)性及嚴(yán)重性相關(guān)[11-12]。因此，早期診治原發(fā)病尤為重要。SS肺部病變的診斷主要包括：①胸片。早期無(wú)臨床表現(xiàn)，僅表現(xiàn)為肺紋理增粗模糊。②肺功能。在影像學(xué)出現(xiàn)異常以前可有肺活量及彌散量下降。③肺HRCT。其敏感性高于普通胸片，此種檢查手段早期變化不明顯。④肺活檢。是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但屬創(chuàng)傷性檢查，痛苦大，患者難以接受。因此，通過(guò)檢測(cè)肺功能水平對(duì)于早期診斷SS肺部病變意義重大。SS肺功能檢查的敏感性高于肺HRCT檢查。通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)，SS患者肺功能改變主要表現(xiàn)為小氣道功能障礙，其次為限制性通氣功能障礙、混合性通氣功能障礙、阻塞性通氣功能障礙和功能障礙，以伴有彌散功能障礙為主。本次研究結(jié)果與張玉紅等[13]的研究相一致。

SS是一種自身免疫性疾病，主要由于機(jī)體的免疫功能失調(diào)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫的高敏感性[14]。SS肺部病變發(fā)病機(jī)制尚未明確，可能是多因素綜合作用的結(jié)果，其中，T、B細(xì)胞表達(dá)失衡可能是SS肺部病變機(jī)制之一[15]。T細(xì)胞亞群（CD3、CD4、CD8）和BTLA表達(dá)紊亂促使SS免疫調(diào)節(jié)功能失常[16]。T細(xì)胞是淋巴細(xì)胞的主要組成部分，它具有多種生物學(xué)功能，能直接殺傷靶細(xì)胞，輔助或抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，對(duì)特異性抗原和促有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)以及產(chǎn)生細(xì)胞因子等。CD3、CD4、CD8細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，與靶細(xì)胞特異性結(jié)合，破壞靶細(xì)胞膜，直接殺傷靶細(xì)胞；同時(shí)釋放淋巴因子，最終使免疫效應(yīng)擴(kuò)大和增強(qiáng)。BTLA對(duì)T、B細(xì)胞的活化起負(fù)調(diào)節(jié)作用，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，維持自身免疫穩(wěn)定中起著十分重要的作用。SS患者外分泌腺浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中，60%～70%是T淋巴細(xì)胞，20%～25%為B淋巴細(xì)胞。已經(jīng)證實(shí)T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞在SS發(fā)病中有重要作用。本研究顯示，SS患者外周血中CD3+ BTLA+ T cell、CD4+ BTLA+ T cell、CD8+ BTLA+ T cell降低，T細(xì)胞亞群在BTLA表面的表達(dá)降低可能是SS發(fā)生發(fā)展的因素之一。相關(guān)性分析亦顯示，肺功能參數(shù)PEF與CD8+ BTLA+ T cell呈負(fù)相關(guān)，DLCO與CD4+ BTLA+ T cell呈正相關(guān)。說(shuō)明T、B細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)控作用減弱，免疫復(fù)合物易沉積于肺組織，細(xì)胞及組織侵入肺泡腔或毛細(xì)血管，使彌散距離增大及肺毛細(xì)血管床和血流量減少，致彌散功能下降，從而出現(xiàn)肺功能降低。

綜上所述，SS肺功能降低的機(jī)制復(fù)雜，本次研究旨在初步探討CD3、CD4、CD8細(xì)胞等T細(xì)胞亞群及BTLA與SS肺功能的關(guān)系，下一步將觀察SS肺功能降低患者外周血中CD3、CD4、CD8細(xì)胞與BTLA不同分群的表達(dá)，進(jìn)一步揭示SS肺功能降低的可能機(jī)制。

5 參考文獻(xiàn)

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì).干燥綜合征診斷及治療指南[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14（11）：766-768.

[2] Kumar P，Jaco MJ，Pandit AG，et al.Miliary sarcoidosis with secondary Sj?gren's syndrome[J].J Assoc Physicians India，2013，61（7）：505-507.

[3] Pathak V，Resnick JM，Islam T.Bilateral pulmonary nodules and mediastinal lymphadenopathy in a patient with Sj?gren's syndrome[J].WMJ，2014，113（1）：32-34.

[4] Kern J，Drutel R，Leanhart S，et al.Reduction of T cell

receptor diversity in NOD mice prevents development of type 1 diabetes but not Sj?gren's syndrome[J].PLoS One，2014，9（11）：e112467.

[5] Nusser A，Nuber N，Wirz OF，et al.The development of autoimmune features in aging mice is closely associated with alterations of the peripheral CD4+ T-cell compartment[J].Eur J Immunol，2014，44（10）：2893-2902.

[6] 董怡.2002年修訂的干燥綜合征國(guó)際分類（診斷）標(biāo)準(zhǔn)[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2002，6（4）：257.

[7] Zhang R，Sun T，Song L，et al.Increased levels of serum galectin-3 in patients with primary Sj?gren's syndrome：associated with interstitial lung disease[J].Cytokine，2014，69（2）：289-293.

[8] Ismael S，Wermert D，Dang-Tran KD，et al.Severe excessive dynamic airway collapse in a patient with primary Sj?gren's syndrome[J].Respir Care，2014，59（10）：156-159.

[9] 高惠英，李小峰，張莉蕓，等.原發(fā)性干燥綜合征合并間質(zhì)性肺病的臨床特征[J].中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志，2009，3（1）：39-42.

[10] 肖波，李偉峰，謝潮鑫，等.原發(fā)性干燥綜合征合并間質(zhì)性肺疾病17例臨床分析[J].臨床肺科雜志，2010，15（5）：640-642.

[11] 王麗.原發(fā)干燥綜合征合并肺間質(zhì)病變的臨床特點(diǎn)分析[J].臨床肺科雜志，2013，18（2）：336-337.

[12] 王萍.原發(fā)性干燥綜合征合并肺間質(zhì)病變的護(hù)理體會(huì)[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2012，30（9）：177.

[13] 張玉紅，李瑩萍.93例干燥綜合征患者肺功能及肺CT臨床分析[J].新疆醫(yī)學(xué)，2011，41（4）：69-71.

[14] Kvarnstr?m M，Ottosson V，Nordmark B，et al.Incident cases of primary Sj?gren's syndrome during a 5-year period in Stockholm County：a descriptive study of the patients and their characteristics[J].Scand J

Rheumatol，2014（15）：1-8.

[15] Jin L，Yu D，Li X，et al.CD4+CXCR5+follicular helper T cells in salivary gland promote B cells maturation in patients with primary Sj?gren's syndrome[J].Int J Clin Exp Pathol，2014，7（5）：1988-1996.

[16] Karnell JL，Mahmoud TI，Herbst R，et al.Discerning the kinetics of autoimmune manifestations in a model of Sj?gren's syndrome[J].Mol Immunol，2014，62（2）：277-282.