某肉雞場新城疫和禽流感抗體監(jiān)測與調(diào)查分析

何飛 付太銀 朱明霞

摘 ?要：為調(diào)查肉雞新城疫、禽流感H5亞型（Re-6株）和H9亞型的免疫效果，從山東省某肉雞場采集血樣120份，利用微量紅細胞凝集試驗（HI）進行抗體水平監(jiān)測。結(jié)果表明：試驗雞ND的抗體水平在33d前維持在6個滴度以上、8個滴度以下，33d后多在8個滴度以上，有的超過10個滴度;H9在12d、19d大都在4～6之間，26d時有所升高，33d時迅速升高至9個滴度以上;H5在12d時為7、8個滴度，19～26d時下降至5～2個滴度之間，33d時個別雞只抗體水平有所增加。該結(jié)果為規(guī)模化肉雞場有效預防和控制這3種主要疫病提供了科學依據(jù)。

關(guān)鍵詞：肉雞;新城疫;禽流感H5亞型;禽流感H9亞型;抗體監(jiān)測

中圖分類號：S858.312.4 ? ? 文獻標識碼：B ? ? 文章編號：1673-1085（2015）04-0036-04

肉雞呼吸道疾病屬多病因呼吸道病綜合征，常造成肉雞養(yǎng)殖的嚴重損失，死淘率可達30%以上，并造成發(fā)病雞生長遲緩、胴體降級或廢棄，而成為危害肉雞養(yǎng)殖業(yè)的重要疾病[1，2]。肉雞呼吸道病病因極為復雜[3～5]，然而眾多研究發(fā)現(xiàn)，對規(guī)模化肉雞養(yǎng)殖危害最大的還是新城疫和禽流感。Lewis等[6]研究發(fā)現(xiàn)在目前普遍采用疫苗免疫的情況下，ND在部分地區(qū)流行依然嚴重，且表現(xiàn)出新的流行病學特點，如高免雞群發(fā)病等。于康震等[7]對部分地區(qū)商品雞及養(yǎng)雞專業(yè)村禽流感血清學調(diào)查，發(fā)現(xiàn)H9亞型陽性雞群占禽流感陽性雞群總數(shù)的93.7%，證實禽流感、尤其是中等毒力以下H9亞型禽流感在中國的廣泛存在，是目前影響中國養(yǎng)禽業(yè)的主要禽流感病毒亞型，所以對肉雞而言，H9被稱為“萬病之源”。而H5亞型禽流感主要威脅肉種雞，所以在肉種雞往往要做好H5亞型的免疫，以保證商品肉雞有足夠的母源抗體。為更有效地控制這三種疾病對肉雞的威脅，本研究采用紅細胞凝集試驗和紅細胞凝集抑制試驗對某規(guī)模化肉雞場的120份血樣進行新城疫、H5和H9亞型禽流感抗體水平監(jiān)測，分析抗體水平的消長規(guī)律，制定出一套科學的適合該肉雞場的免疫程序。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?儀器 ?96孔微量反應板、移液槍、恒溫箱。

1.1.2 ?試劑 ?①試驗試劑：阿氏液（紅細胞保存液）、PBS液、1%雞紅細胞懸液均自配;②生物制品：雞新城疫血凝抑制試驗抗原由青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)，批號為（20130301），禽流感病毒H5（Re-6株）和禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原為哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，批號分別為2013002、2013002.

1.2 ?方法

1.2.1 ?樣品采集 ?試驗期內(nèi)每周（第1、2、3、4、5周）分別從2個試驗舍（2號舍、4號舍）的前、中、后共挑選不同呼吸道癥狀的活雞12只，采集血樣，進行抗體監(jiān)測，共采集血樣120份。

1.2.2 ?血樣的處理 ?將血液樣品2000～2500r/min離心15min，用移液槍吸取血清加入滅菌的0.5ml離心管，置-20℃冰箱保存。

1.2.3 ?雞紅細胞懸液的配制 ?用加有抗凝劑的注射器采集未免疫的健康公雞血液，用pH值7.2的0.01mol/l的PBS液洗滌3次，每次均以1000r/min離心10min，洗滌后用PBS液配成1%（V/V）的紅細胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 ?檢測方法 ?禽流感血凝抑制（HI），抗體效價的測定，參照GB/T18936-2003，新城疫血凝抑制（HI），抗體效價的測定，參照GB/T16550-2008。

1.2.5 ?該肉雞場的免疫程序 ?1日齡：新支二聯(lián)弱毒疫苗、傳支弱毒苗噴霧;法氏囊弱毒疫苗、新流二聯(lián)油苗頸部皮下注射;9日齡新支流三聯(lián)油苗頸部皮下注射;22日齡免新城疫弱毒苗飲水。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?2號舍抗體監(jiān)測結(jié)果 ?見圖1。

由圖1可知：①2號舍12～26d，ND抗體水平維持在6log2以上，8log2以下，26d后均在7log2以上，33日齡有個別達到9log2;②2號舍H9抗體水平12～26d間始終維持在6log2以上，26d后上升到10log2以上;③2號舍H5抗體水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，33日齡又有所升高。

2.2 ?4號舍抗體監(jiān)測結(jié)果 ?見圖2。

由圖2可知：①4號舍12d、19d和26dND抗體水平維持在6log2以上、8log2以下，而33d多數(shù)在8log2以上，有的達到10log2以上;②4號舍H9抗體水平12d到26d間始終維持在6log2以上，26d后上升到10log2以上;③4號舍H5抗體水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，此后1周又上升到6log2。

2.3 ?2號舍、4號舍抗體比較 ?由圖1、圖2可知：①2號、4號舍ND抗體水平始終維持在6log2以上，8log2以下;②2號、4號舍H5抗體水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，此后一周4號舍H5抗體水平又上升到6log2;③2號、4號舍H9抗體水平12～26日齡間始終維持在6log2以上，26日齡后均上升到10log2以上。

2.4 ?試驗舍死亡情況統(tǒng)計 ?見圖3。

由圖3可知：試驗期間2舍和4舍死亡率在26日齡前大體相等，27日齡后2號舍死亡率顯著上升。

3 ?討論與分析

3.1 ?2號舍和4號舍ND的抗體水平在33d時多在8個滴度，有的超過10個滴度，疫苗免疫該日齡一般不會超過8個滴度，所以懷疑有可能存在新城疫感染。

3.2 ?H9的抗體水平在12d、19d大都在4～6個滴度之間，26d時有所升高，33d時忽然迅速升高，大都高于9個滴度，懷疑是由于感染H9野毒所致，確切原因還有待于病原分離與鑒定。

3.3 ?H5的抗體水平在12d時為7、8個滴度，說明雛雞均具有很高的母源抗體，19～26d時下降至5～2個滴度之間，但33d時檢測有的雞只抗體水平有所增加，不能排除有H5感染的可能。

3.4 ?根據(jù)死亡情況統(tǒng)計可知：26d以前2個雞舍死亡趨勢和數(shù)目大致相當，同時符合肉雞生長期內(nèi)死亡規(guī)律，但27d后2號舍死亡率急劇上升，應綜合各方面因素查找死亡誘因，以減少經(jīng)濟損失。

4 ?結(jié)論

根據(jù)本次研究結(jié)果和實踐經(jīng)驗，對規(guī)?；怆u場而言，控制新城疫、H5和H9亞型禽流感，重點應落實在一個“防”字，在預防方面應著重做好以下幾個方面工作：

4.1 ?做好種雞的飼養(yǎng)管理和免疫預防，保證種雞和雞苗的健康。

4.2 ?做好孵化以及出苗的各項相關(guān)工作，防止雞苗在出殼后第一環(huán)境的感染。

4.3 ?做好肉雞場的各項飼養(yǎng)管理工作，保證場區(qū)清潔，做好疫病凈化和病雞隔離工作，確保場區(qū)內(nèi)無這三種病原存在，確保所有進場的車輛、人員、物品都是安全的，確保攜有病原的人員和物品與雞群徹底隔開。

參考文獻：

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