蛇膽的多種鑒別方法

周亞欣

蛇膽自古以來就是一味名貴藥材，廣泛應(yīng)用于臨床。蛇膽性涼，味苦微甘，有行氣祛痰，祛風(fēng)去濕之功效，用于治療咳嗽多痰、目赤腫痛、皮膚熱毒、口眼生瘡、肺熱咳嗽、胃熱疼痛、肝熱目赤、急性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和痔瘡等。市場上含蛇膽的中藥制劑較多，常見的有蛇膽川貝散、蛇膽陳皮末、蛇膽追風(fēng)丸、蛇膽川貝枇杷膏等。由于蛇膽具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，加上市場需求量大，自然資源遞減，市場上蛇膽的偽品時(shí)有發(fā)現(xiàn)，已報(bào)道的摻假物有雞、鴨、魚、豬、牛等動(dòng)物膽汁和淀粉糊、青菜汁、明膠液、色素以及熟地黃提取液等，以及油膽（用機(jī)油刺激蛇鼻腔或蛇體，使膽汁增多而質(zhì)差）或蜜膽或?qū)⑸吣懚啻谓?，再把蛇膽與酒液分別出售使膽汁稀薄質(zhì)差。因此，應(yīng)正確地鑒別各種蛇膽，從源頭上控制藥品質(zhì)量和保障用藥安全。

一、蛇膽的性狀鑒別

蛇膽的性狀鑒別是根據(jù)膽囊的外形特征、色澤、大小、質(zhì)地、膽蒂位置、膽管（形狀、長度及韌性）、膽汁稠度、氣味等進(jìn)行比較的鑒別方法。蔣碧英《真?zhèn)紊吣戣b別》描述了正品蛇膽的性狀鑒別要點(diǎn);張穗《十四種蛇膽及其常見偽劣品的外觀性狀鑒別》對14種蛇膽及其常見偽劣品進(jìn)行了外觀性狀鑒別。這種傳統(tǒng)手段簡單方便，可直觀地將蛇膽與一般偽品區(qū)別開來，在早期藥材收購、加工部門的現(xiàn)場鑒定中較常使用;但由于蛇膽的形態(tài)學(xué)特征往往因加工方法和條件不同而變化，鑒別效果因人不同（經(jīng)驗(yàn)、主觀影響等），因蛇而異（蛇的種類、大小、生理狀態(tài)等），因觀察環(huán)境（季節(jié)、光線等）而變化，誤差較大，現(xiàn)階段僅作為真?zhèn)舞b別的參考指標(biāo)。

二、蛇膽的顯微鑒別

根據(jù)蛇膽的組織殘片、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行顯微鑒別是蛇膽原藥材鑒別的方法之一。楊育民等《蛇膽和一些小動(dòng)物膽的鑒別》依據(jù)蛇膽內(nèi)含物的形狀、大小及顏色等顯微特征鑒別了蛇膽及其偽充品鑒別;陸惠文《常見蛇膽的組織學(xué)特點(diǎn)及顯微鑒別》根據(jù)蛇膽與偽品等各自的組織學(xué)特點(diǎn)將待檢膽囊標(biāo)本制成石蠟切片，經(jīng)HE染色和顯微觀察，鑒別了蛇膽（眼鏡蛇、金環(huán)蛇、灰鼠蛇等）與偽品蛇膽（雞膽、青魚膽等）。該法雖鑒別效果較好且簡便，但僅適用于仍保留有顯微特征的原料藥材和成藥。由于膽的內(nèi)含物隨著蛇的生理狀態(tài)不同而有差異，組織學(xué)特征也因切片的取材位置不同而不同，因此增加了鑒別的難度。此外，目前大多數(shù)含蛇膽成藥不保留蛇膽的顯微特征，故此法不宜推廣。

三、蛇膽的理化鑒別

蛇膽的主要成分有膽汁酸、膽色素、膽固醇、黏蛋白、無機(jī)鹽等，通常膽汁酸被認(rèn)為是其藥理作用的主要功效物質(zhì)。蛇膽膽汁酸主要為?；悄懰?、?；撬狴Z去氧膽酸、?；侨パ跄懰帷⑹懰?、游離膽酸等，目前多以這些成分為指標(biāo)對蛇膽汁進(jìn)行質(zhì)量控制。

理化鑒別中常用的分析方法有化學(xué)分析法和薄層色譜法。蔣三員等《蛇膽質(zhì)量鑒定的研究》通過比較蛇、雞、鴨、魚膽汁的比黏度、鉀、鈉含量等鑒別了蛇膽。黎源等《雞膽汁與蛇膽汁中氨基酸和微量元素的對比分析》對比了蛇膽汁和雞膽汁中的氨基酸及微量元素，發(fā)現(xiàn)蛇膽汁與雞膽汁均含有18種氨基酸，雞膽汁中除了?；撬岷柯缘陀谏吣懼?，其他氨基酸的種類和含量非常相似;蛇膽汁中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu的含量均略高于雞膽汁。黃曉文等《眼鏡蛇膽偽品的鑒別》通過膽囊外觀性狀，膽汁的K2Cr2O7沉淀、糠醛-硫酸顯色反應(yīng)以及薄層色譜法（TLC），鑒別了眼鏡蛇膽檢品，認(rèn)為該方法簡單、專屬性強(qiáng)，可作為真?zhèn)紊吣懙蔫b別方法。植達(dá)詩《真?zhèn)紊吣懙暮喴阻b別》用糠醛—硫酸法鑒別了蛇膽及其偽品雞膽、鴨膽、魚膽等;鐘榮華《蛇膽及其偽品的鑒別》用糠醛—硫酸法成功鑒別了蛇膽、雞膽、鴨膽和黃鱔膽等，認(rèn)為該法結(jié)果可靠，簡便易行，但不能鑒別蛇類種屬。薄層層析法由于具備色譜分離特性，因此更適合分析復(fù)雜樣品。孫方人等《廣東眼鏡蛇蛇膽的鑒別和質(zhì)量控制的研究》以?；悄懰釣閷φ沼帽訉游龇ǚ治隽搜坨R蛇蛇膽樣品并見到8個(gè)顯色斑點(diǎn);游勇基等《蟒蛇膽的薄層色譜鑒別》及唐元軍等《蟒蛇膽及其偽品的鑒別》分別用TLC法鑒別了蟒蛇膽;薛漓《一種新的蛇膽摻假品的鑒別》還用TLC法成功鑒別了蛇膽及特殊偽品——熟地黃提取液。此外，TLC法還被廣泛用于蛇膽復(fù)方制劑的鑒別研究。萬京樺等《蛇膽川貝枇杷膏中蛇膽汁鑒別方法的實(shí)驗(yàn)研究》構(gòu)建了蛇膽川貝枇杷膏中蛇膽汁的TLC法鑒別方法;陳德球《蛇膽川貝液中蛇膽的鑒別研究》用蛇膽汁及?；悄懰徕c作對照，采用TLC法鑒別蛇膽川貝液中的蛇膽;管玉民《蛇膽川貝液鑒別方法的改進(jìn)》用TLC法鑒別了蛇膽川貝液處方中的蛇膽汁;王倩等《蛇膽追風(fēng)丸的薄層色譜鑒別》用TLC法從蛇膽追風(fēng)丸中成功檢測出了蛇膽;蔣偉杰等《蛇膽菠蘿蛋白酶腸溶薄膜衣片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》用TLC法從蛇膽菠蘿蛋白酶腸溶薄膜衣片中鑒別出了蛇膽。綜上所述，?；悄懰岬瘸煞譃閷φ沼肨LC法可有效鑒別出復(fù)方制劑中的蛇膽，但不能區(qū)別蛇膽的種屬來源。

四、蛇膽的分子生物學(xué)鑒別

由于蛇膽保存和制劑加工過程中的處理方法往往破壞了蛇膽的完整性，因此依據(jù)性狀、顯微特征及理化性質(zhì)進(jìn)行鑒別有一定困難，分子生物學(xué)方法能克服上述問題，呈現(xiàn)更客觀的結(jié)果。眾所周知，物種的多樣性是基因多態(tài)性的結(jié)果，而基因多態(tài)性可在分子水平上檢測，它比在形態(tài)、組織和化學(xué)水平上檢測更能代表其變異類型的遺傳標(biāo)記。如王義權(quán)等《游蛇科（Colubridae）10種蛇的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA研究》將分子標(biāo)記技術(shù)運(yùn)用到蛇類藥材的鑒定研究中，對游蛇科10種蛇基因組DNA的多態(tài)性進(jìn)行了分子遺傳標(biāo)記的研究;WANG Yi-quan，ZHOU Kai-ya，XU Luo-shan，《et al. Authentication of Bungarus parvus and its adulterants by DNA molecular method using diagnostic primer》（《.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》）通過提取金錢白花蛇及其偽品藥材和原動(dòng)物樣品的模板DNA，分析其Cytb基因片斷鑒別了金錢白花蛇;沈曦等《幾種腹蛇12SrRNA和Cytb基因片段序列的初步研究》通過比較12SrRNA和Cytb基因的部分序列鑒別了幾種蝮屬蛇類;劉向華等《中藥材蛇膽的DNA分子標(biāo)記鑒定研究》從藥材蛇膽的膽衣和膽汁、原動(dòng)物棕黑錦蛇的肌肉和膽汁中提取DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增12SrRNA基因片段，鑒別了蛇類藥材。分子生物學(xué)鑒別方法雖能有效鑒別出蛇類藥材的種屬來源，目前在蛇類藥材的鑒別中應(yīng)用較廣，但由于市售蛇膽樣品的復(fù)雜性，蛇膽DNA的含量較低，故此法在蛇膽鑒別中的應(yīng)用較少，具體應(yīng)用方案還有待于進(jìn)一步完善。

綜上所述，蛇膽的鑒別雖歷史悠久，但由于技術(shù)方法的制約，目前各種方法均存在一定的缺陷，2010版藥典中亦缺乏較為全面的質(zhì)量控制方法。隨著研究手段的不斷進(jìn)步，運(yùn)用先進(jìn)的分子生物學(xué)手段，采用多種鑒別方法綜合驗(yàn)證、多指標(biāo)綜合控制，從而制定更完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是今后蛇膽質(zhì)量控制的必然趨勢。