甘肅不同產(chǎn)地黃芩莖葉和根對急性肝損傷小鼠的影響

楊志軍等

摘要：目的 觀察甘肅不同產(chǎn)地黃芩莖葉、根對急性肝損傷小鼠的影響，探討黃芩莖葉和根保肝作用的差異。方法 將昆明種小鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組及甘肅隴西、岷縣、渭源、漳縣產(chǎn)黃芩根和莖葉組。各組分別給予相應藥物灌胃，每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥2 h后，采用腹腔注射0.1%CCl4橄欖油溶液誘導肝損傷模型。造模18 h后，計算肝系數(shù)，檢測血清谷氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）活性及肝組織總抗氧化能力（T-AOC）水平。結果 與模型組比較，不同產(chǎn)地黃芩根組小鼠肝系數(shù)及血清中ALT、AST活性顯著降低（P<0.05），肝組織T-AOC水平升高（P<0.05）；同一產(chǎn)地根與莖葉組比較，各黃芩根組小鼠肝系數(shù)及血清中ALT、AST活性低于黃芩莖葉組（P<0.05），肝組織T-AOC水平高于黃芩莖葉組（P<0.05）。結論 黃芩根水煎液對CCl4誘導的急性肝損傷具有保護作用，而黃芩莖葉水煎液對急性肝損傷保護作用不明顯。

關鍵詞：甘肅；黃芩；莖葉；根；肝保護；小鼠

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2015）06-0061-03

黃芩始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品。本品性寒味苦，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎的作用。2010年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定黃芩藥用來源為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根[1]，但為擴大藥源，近年對其莖葉入藥的研究亦成為熱點。研究表明，黃芩苷、黃芩總黃酮、黃芩莖葉總黃酮對實驗性肝損傷具有一定的保護作用[2-4]。因此，本研究觀察甘肅4個不同產(chǎn)地黃芩根、莖葉對急性肝損傷小鼠的影響，以比較甘肅不同產(chǎn)地黃芩莖葉和根在保肝作用上的差異。

1 實驗材料

1.1 動物

2月齡SPF級昆明種小鼠132只，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半，蘭州大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK（甘）2011-0004。

1.2 藥物與制備

聯(lián)苯雙酯滴丸，北京協(xié)和藥廠，批號12090204。甘肅隴西、岷縣、渭源、漳縣所產(chǎn)黃芩，于10月中旬在當?shù)夭杉o葉，10 d后采集同一植株的根，均為二年生黃芩，經(jīng)甘肅中醫(yī)學院杜弢教授鑒定為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的根及莖葉。將不同產(chǎn)地的黃芩根、莖葉，分別陰干，除去雜質(zhì)，洗凈。將根大小分檔，置蒸制容器內(nèi)隔水加熱，蒸制“圓氣”后30 min，待質(zhì)地軟化，取出，晾干，切片；另將莖葉切制成段。分別取適量黃芩根、莖葉，第1次加10倍量水，浸泡30 min，文火煎煮50 min，過濾，第2次加8倍量水，文火煎煮40 min，過濾，合并2次濾液，水浴濃縮為含1 g原藥材/mL的濃縮液，高壓滅菌，4 ℃以下儲存，灌胃時配制成所需濃度的藥液。

1.3 主要試劑與儀器

四氯化碳（CCl4），分析純（上海凌峰化學試劑有限公司，批號120728）；橄欖油，化學純；谷氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、總抗氧化能力（T-AOC）及考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒，南京建成生物工程研究所。80-2型離心沉淀器（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠），BS110S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），MODEL680-酶標儀（美國伯樂公司），UV-2401PC紫外可見分光光度計（日本島津）。

2 實驗方法

2.1 分組與給藥

實驗小鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組及隴西、岷縣、渭源、漳縣產(chǎn)黃芩根組和黃芩莖葉組。正常組、模型組予生理鹽水0.2 mL/10 g灌胃，陽性對照組按150 mg/kg予聯(lián)苯雙酯灌胃，其余各給藥組予相應藥物6 g/kg灌胃，陽性對照組及各給藥組給藥容積均為0.2 mL/10 g。每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥2 h后，除正常組外，其余各組0.1 mL/10 g腹腔注射0.1%CCl4橄欖油溶液造模，正常組腹腔注射等量橄欖油。各組造模后禁食不禁水18 h。造模18 h后，從各組小鼠股動脈取血，隨后剝離肝臟，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱重。計算肝系數(shù)（肝臟質(zhì)量÷體質(zhì)量×100%）[5]。

2.2 谷氨酸氨基轉移酶、天冬谷草氨酸氨基轉移酶測定

血液靜置30 min后，2500 r/min離心10 min，吸取血清。按照ALT、AST試劑盒說明書測定酶活性。

2.3 總抗氧化能力測定

取0.5 g肝組織，冰浴下用生理鹽水制成10%的肝勻漿，2000 r/min離心10 min，取上清液，按試劑盒說明書操作。

3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析。實驗數(shù)據(jù)以—x±s表示，采用方差分析和顯著性檢驗，方差齊時，兩兩比較采用LSD檢驗，方差不齊時，采用Tamhance's T2檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

4 結果

4.1 不同產(chǎn)地黃芩莖葉、根對急性肝損傷小鼠血清谷氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶的影響

與正常組比較，模型組小鼠ALT、AST活性升高（P<0.05）；與模型組比較，不同產(chǎn)地黃芩根組、隴西產(chǎn)黃芩莖葉組小鼠ALT、AST活性降低（P<0.05）；同一產(chǎn)地根與莖葉組比較，各黃芩根組小鼠ALT、AST活性均低于黃芩莖葉組（P<0.05）。結果見表1。

4.2 不同產(chǎn)地黃芩莖葉、根對急性肝損傷小鼠肝系數(shù)、肝組織總抗氧化能力的影響

與正常組比較，模型組小鼠肝系數(shù)升高（P<0.05），肝組織T-AOC水平降低（P<0.05）；與模型組比較，各產(chǎn)地黃芩根組小鼠肝系數(shù)均降低（P<0.05），肝組織T-AOC水平均升高（P<0.05），而各產(chǎn)地黃芩莖葉組小鼠肝系數(shù)、肝組織T-AOC活性與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與同一產(chǎn)地黃芩莖葉組比較，黃芩根組小鼠肝系數(shù)均降低（P<0.05），肝組織T-AOC水平均升高（P<0.05）。結果見表2。

5 討論

近年黃芩在甘肅種植面積約4萬畝（1畝=666.67 m2），產(chǎn)量700多萬kg，甘肅隴西、渭源、漳縣、岷縣等已成為黃芩主要產(chǎn)地。雖然黃芩傳統(tǒng)藥用部位為根，然而，在我國北方各省及云南部分地區(qū)卻有將黃芩莖葉代茶飲用的近千年歷史，此茶被稱為“黃芩茶”或“黃金茶”。

肝損傷是由多種病因引起并且有多種因素參與的復雜過程。大量研究表明，在肝細胞病變過程中，自由基、酶及脂質(zhì)過氧化等均發(fā)揮重要作用。CCl4誘導的急性肝損傷模型是常用經(jīng)典模型之一。CCl4對肝細胞膜有直接溶解作用，但主要致毒機制與其活性代謝產(chǎn)物有關。CCl4在肝內(nèi)經(jīng)微粒體細胞色素P450代謝，生成活潑的三氯甲基自由基和氯自由基，這些自由基與細胞內(nèi)和細胞膜的大分子結合，使酶的功能喪失，細胞膜脂質(zhì)過氧化，破壞肝細胞膜結構和功能的完整[6-7]。當肝細胞受損害時，由于肝細胞壞死，細胞膜通透性增加，線粒體損傷，導致細胞內(nèi)的ALT、AST等轉氨酶釋放進入血液，使血液中ALT、AST活性增高，且ALT、AST活性的變化與肝細胞受損程度相一致，因此ALT、AST可作為診斷衡量早期肝損傷程度的主要酶類指標[8]。自由基學說認為，體內(nèi)自由基生成增加，導致自由基生成與清除的平衡被破壞，體內(nèi)過剩的自由基及引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應，會促進肝細胞損傷[9]。T-AOC是機體內(nèi)各種抗氧化系統(tǒng)功能的綜合反映，能體現(xiàn)機體抗氧化防御體系的整體狀態(tài)。體內(nèi)T-AOC水平越高，自由基清除速度越快。

本實驗結果顯示，模型組小鼠肝系數(shù)、血清中ALT、AST活性均升高，肝組織T-AOC水平降低，而預先給予不同產(chǎn)地黃芩根水煎液的各組小鼠肝系數(shù)及血清中ALT、AST活性均降低，肝組織T-AOC水平升高，表明黃芩根水煎液對CCl4誘導的急性肝損害具有一定的保護作用，其機制可能通過降低ALT、AST活性，提高肝組織總抗氧化能力，減輕肝損傷，從而達到保肝作用。4個不同產(chǎn)地黃芩莖葉組中，隴西產(chǎn)黃芩莖葉水煎液僅能降低小鼠ALT、AST活性，對肝系數(shù)、T-AOC無影響，而其他各組與模型組比較均無統(tǒng)計學意義，說明黃芩莖葉水煎液保肝作用不明顯。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：282-283.

[2] 陳忻，趙暉，張楠，等.黃芩苷對小鼠免疫性肝損傷的保護作用[J].中藥藥理與臨床，2006，22（34）：39-40.

[3] 李海燕，金向群，邸琳，等.黃芩苷預防撲熱息痛所致小鼠肝損傷的研究[J].中國實驗方劑學雜志，2008，14（5）：50-51.

[4] 李素婷，楊鶴梅，王寶源，等.黃芩莖葉總黃酮對大鼠慢性肝損傷的保護及機制研究[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2006，12（8）：582-584.

[5] 陳奇.中藥藥理研究方法學（第二版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社， 2006：31.

[6] 辛念，雄建新，韓淑英，等.蕎麥種子總黃酮對四氯化碳所致急性肝損傷的保護作用[J].第三軍醫(yī)大學學報，2005，27（14）：1456-1458.

[7] 趙春景，魏來.葛根素對CCl4所致大鼠急性肝損傷的保護作用[J].第三軍醫(yī)大學學報，2005，27（7）：625-627.

[8] 朱立革，殷小杰，唐仕歡，等.道地藥材和非道地藥材黃芩對小鼠急性化學性肝損傷的影響[J].齊齊哈爾醫(yī)學院學報，2010，31（7）：1009-1010.

[9] Knight JA. The process and theories of aging[J]. Ann Clin Lab Sci，1995，25（1）：1-12.

（收稿日期：2014-09-04）

（修回日期：2014-10-17；編輯：華強）