胃癌及結(jié)直腸癌患者外周血CD45RA+和CD45RO+T細(xì)胞變化特征

王 巍 宋玉國 張付喜 (北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011)

CD45分子作為眾多的人類白細(xì)胞表面抗原之一，至少有5種亞型，CD45RA分子和CD45RO分子是其中2種較有意義的亞型。未致敏的T細(xì)胞表面選擇性高表達(dá)的是CD45RA，而CD45RO則是活化T細(xì)胞及記憶T細(xì)胞的表面標(biāo)志。因此對(duì)兩種表型的檢測可以間接地反映出T細(xì)胞的免疫功能狀態(tài)。而T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在腫瘤免疫中發(fā)揮著最為重要的作用。本文旨在研究外周血中T細(xì)胞表面兩種分子的表達(dá)與胃癌及結(jié)直腸癌的發(fā)病及進(jìn)展程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年4～11月我院普通外科收治的胃癌及結(jié)直腸癌病人共50例作為試驗(yàn)組，年齡38～84歲，平均(60.8 ±11.0)歲，男性34例，女性16例，胃癌24例，結(jié)直腸癌26例。按照國際最新TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為:Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期20例。所有病人術(shù)前均經(jīng)過胃鏡或腸鏡檢查及病理活檢明確診斷，術(shù)前檢查無其他重大疾病，未經(jīng)過放化療或免疫治療。TNM分期均經(jīng)手術(shù)及術(shù)后病理證實(shí)。另選擇我院體檢中心體檢健康人26例作為對(duì)照組，年齡40～79歲，平均(61.4±10.2)歲，男17例，女9例，兩組年齡性別比較無顯著差異(P＞0.05)。

1.2 儀器與試劑 儀器:美國Beckman公司EPICSXL型流式細(xì)胞儀。試劑:CD45RA-FITC，CD45RO-PE，美國 Beckman公司;溶血?jiǎng)?A:甲酸1.2 ml，加 H2O至1 L;溶血?jiǎng)?B:碳酸鈉6.0 g、氯化鈉14.5 g、硫酸鈉31.2 g，加 H2O 至 1 L。

1.3 外周血中CD45RA+T細(xì)胞和CD45RO+T細(xì)胞的測定在患者知情同意的情況下，于晨起后空腹?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行肘部靜脈采血1 ml，放于EDTA-K2抗凝管內(nèi)混勻備檢。取一只流式細(xì)胞儀專用試管，加入 CD45RA-FITC 20 μl、CD45RO-PE 20 μl、抗凝全血100μl，室溫避光標(biāo)記20 min;加入溶血?jiǎng)〢 600μl，放在振蕩器上振蕩8 s，立即加入溶血?jiǎng)〣 260μl，混合后加入4 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)，1 000 r/min離心5 min，棄去上清液，加入1 ml PBS，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測分析。

2 結(jié)果

胃癌和結(jié)直腸癌病人的外周血T細(xì)胞CD45RA、CD45RO及CD45RA/CD45RO比值與對(duì)照組比較均無差異(P均＞0.05)。與Ⅰ～Ⅱ期患者比較，Ⅲ～Ⅳ期患者的CD45RA升高，CD45RO降低，CD45RA/CD45RO比值升高(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，Ⅲ ～Ⅳ期患者的 CD45RA升高，CD45RO降低，CD45RA/CD45RO比值升高(P＜0.05)。胃癌及結(jié)直腸癌組外周血T細(xì)胞CD45RA、CD45RO及CD45RA/CD45RO比值均無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

表1 各組的CD45RA、CD45RO及二者比值比較(±s)

表1 各組的CD45RA、CD45RO及二者比值比較(±s)

與Ⅲ～Ⅳ期組比較:1)P＜0.05

組別 n CD45RA(%)CD45RO(%) RA/RO 比值試驗(yàn)組50 45.3±10.7 41.4±9.9 1.20±0.54胃癌組 24 48.0±10.6 39.6±7.8 1.28±0.45結(jié)直腸癌組 26 42.7±10.3 43.0±11.5 1.12±0.61Ⅰ～Ⅱ期 30 41.5±9.41) 45.4±9.01) 0.96±0.341)Ⅲ～Ⅳ期 20 50.9±10.7 35.3±8.2 1.55±0.61對(duì)照組26 43.9±6.6 40.9±7.2 1.13±0.36

3 討論

對(duì)于胃癌和結(jié)直腸癌患者外周血中腫瘤標(biāo)記物的研究一直是熱點(diǎn)。除了常用的對(duì)CEA、CA19-9、CA125的檢測，近些年還有關(guān)于 MG7-Ag、M2-PK、CA72-4、中期因子(MK)檢測的報(bào)道。根據(jù)報(bào)道證實(shí)，人們還沒有找到一種在特異性、敏感性方面都十分理想，并能確切的符合病人病情發(fā)展程度的指標(biāo)〔1，2〕。腫瘤患者的免疫狀態(tài)也是研究的熱點(diǎn)。

CD45RA分子和CD45RO分子是白細(xì)胞分化抗原CD45的兩種亞型，其形成是由于CD45分子肽鏈胞外區(qū)氨基端外顯子的不同剪接，T細(xì)胞在發(fā)育成熟的過程中表達(dá)不同的亞型〔3〕。在外周血中，T細(xì)胞在接觸抗原而被活化后，細(xì)胞膜表面的CD45RA表達(dá)減弱或消失，CD45RO表達(dá)增強(qiáng)。CD45RA+T細(xì)胞稱為純真性T細(xì)胞，不能發(fā)揮較強(qiáng)的免疫功能;CD45RO+T細(xì)胞稱為活化/記憶性T細(xì)胞，表現(xiàn)為輔助免疫、免疫殺傷和免疫記憶功能〔4〕。因此將兩種分子標(biāo)志作為區(qū)分初始T細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞的檢測標(biāo)志之一，其數(shù)量的改變可反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的變化情況。近年來有關(guān)兩種分子在病毒感染性、過敏性疾病病人外周血中表達(dá)的研究可見報(bào)道〔5～7〕，在胃癌及結(jié)直腸癌病人外周血中表達(dá)情況的研究并不多見。

分析Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ患者檢測結(jié)果與張國慶等〔8〕對(duì)大腸癌外周血中淋巴細(xì)胞表型報(bào)道的變化趨勢相符合，病人在腫瘤的相對(duì)早期，由于腫瘤對(duì)免疫系統(tǒng)的激活，機(jī)體對(duì)腫瘤進(jìn)行以T細(xì)胞免疫為主的免疫反應(yīng)，試圖對(duì)異常變異的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行清除，使得表達(dá)CD45RA的初始T細(xì)胞被活化成為效應(yīng)T細(xì)胞及記憶T細(xì)胞，故CD45RA表達(dá)下降，而CD45RO表達(dá)增強(qiáng)。隨著腫瘤的進(jìn)展，一方面可能是由于腫瘤細(xì)胞通過分泌抑制性因子等機(jī)制對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫抑制，干擾阻礙T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化?；蚰[瘤細(xì)胞的大量、快速生長超過了機(jī)體的免疫效應(yīng)能力，機(jī)體出現(xiàn)所謂免疫枯竭，出現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的“漏逸”。另一方面，外周血中的活化的免疫細(xì)胞可能向腫瘤組織局部進(jìn)行浸潤轉(zhuǎn)移。對(duì)直腸癌腫瘤微環(huán)境的研究表明，腫瘤組織中的淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯高于正常組織〔9〕。這或許造成了外周血中免疫細(xì)胞的減少，有關(guān)外周血中及腫瘤組織微環(huán)境中免疫細(xì)胞的變化趨勢的相互關(guān)系尚需要進(jìn)一步研究。由于上述機(jī)制使得兩種抗原的表達(dá)趨勢出現(xiàn)倒轉(zhuǎn)。

本文結(jié)果說明兩種消化道腫瘤在抗原表達(dá)上可能具有共性，分析健康組與試驗(yàn)組檢驗(yàn)結(jié)果原因與對(duì)照組比較，Ⅰ～Ⅱ期病人與Ⅲ～Ⅳ期病人的呈現(xiàn)相反的變化趨勢，故平均后使得病人總體的檢測結(jié)果與對(duì)照組檢測結(jié)果無顯著差異。在一定程度上說明檢測CD45RA及CD45RO本身并不具有診斷價(jià)值，尚不能將其作為特異性指標(biāo)進(jìn)行腫瘤篩查。對(duì)于已經(jīng)診斷明確的胃及結(jié)直腸腫瘤患者，對(duì)兩種分子的檢測對(duì)評(píng)估病人的病情進(jìn)展有著一定的參考價(jià)值。

由于腫瘤免疫的復(fù)雜性，有關(guān)胃癌及結(jié)直腸癌病人外周血中T細(xì)胞亞群CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞表面CD45RA及CD45RO的表達(dá)情況的報(bào)道研究亦不多見，是否與T細(xì)胞總體表達(dá)情況相同，結(jié)論亦不統(tǒng)一。在下一步的研究中，將繼續(xù)觀察胃癌及結(jié)直腸癌病人術(shù)后外周血中T細(xì)胞表面CD45RA及CD45RO表達(dá)情況的變化趨勢。

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