江西地方品種雞禽白血病病毒感染狀況的研究

李海琴，劉林秀，季華員，武艷平，康昭風

(江西省農(nóng)業(yè)科學院 畜牧獸醫(yī)研究所，江西 南昌 330200)

禽白血病(avian leukosis，AL)是目前影響?zhàn)B禽業(yè)的主要疾病之一，其對生產(chǎn)的危害主要是發(fā)生腫瘤、生產(chǎn)性能下降和免疫抑制［1］。禽白血病病毒(ALV)是一種基因組為單股RNA的反轉(zhuǎn)錄病毒。根據(jù)病毒與宿主細胞特異性相關(guān)的囊膜蛋白的抗原性，ALV可分為A、B、C、D、E、F、G、H、I和J 10個亞群［2-4］。但自然感染雞群的只有A、B、C、D、E和J 6個亞群［5］。其中J亞群致病性和傳染性最強，而內(nèi)源性的E亞群表現(xiàn)為非致病性或者致病性很弱［6］。ALV特別是J亞群白血病病毒(ALV-J)誘發(fā)的雞白血病，給我國養(yǎng)雞業(yè)帶來了極大損失，更為嚴重的是ALV-J又進一步傳入我國固有的一些純地方品種雞群中［7］。到目前為止，還沒有有效藥物和疫苗用于禽白血病的治療與預(yù)防，控制禽白血病主要采用檢測加淘汰的凈化方法［8］。

禽白血病P27抗原檢出率與種雞群的發(fā)病狀況及其子代雞群的發(fā)病狀況密切相關(guān)，即種蛋中P27抗原檢出率越高，種雞群發(fā)病情況越嚴重，P27抗原可以作為開展禽白血病的流行病學調(diào)查和感染風險評估的重要指標，P27抗原檢測試劑盒可檢測到所有亞群ALV的P27抗原，因此不能區(qū)別外源性病毒和內(nèi)源性病毒;ALV-J亞型抗體檢測用于確定雞或雞群是否被外源性ALV-J感染過，通常代表ALV-J亞型外源病毒感染［9］。對禽白血病進行預(yù)防和控制，目前主要是通過對原種雞群開展外源性病毒的凈化工作，通過多次的抗原、抗體檢測，了解該原種雞群的流行亞群并淘汰陽性個體。一般需要經(jīng)過3～5個世代的凈化才有可能達到凈化［10］。本研究使用商業(yè)ELISA檢測試劑盒，通過P27抗原檢測結(jié)合ALV-J亞型抗體檢測，對江西地方品種雞群ALV感染情況進行了調(diào)查研究。

1 材料與方法

1．1 試驗材料

1．1．1 試驗動物 安義瓦灰雞(300日齡)、余干烏黑雞(280～320日齡)、寧都黃雞(120～300日齡)、泰和烏雞(210～350日齡)、東鄉(xiāng)綠殼蛋雞(280日齡)、崇仁麻雞(330日齡)6個江西省地方品種雞。禽白血病病毒(ALV)P27抗原ELISA檢測試劑盒及禽白血病病毒J(ALV-J)亞群抗體ELISA檢測試劑盒，均購自美國IDEXX公司。

1．1．2 樣品采集與處理 2014年4—6月，在江西省不同地區(qū)的12個雞場、6個不同地方品種雞雞群中共采集樣本690份。血清的采集方法是每只雞采集全血1 mL裝于1．5 mL滅菌離心管中，轉(zhuǎn)入37℃恒溫箱中存放30 min，再放入4℃冰箱中至少存放3～5 h。蛋清樣品的采集方法是每只蛋采0．3～0．4 mL的蛋清，加入滅菌離心管中，置－20℃凍存，反復(fù)凍融3次，每次解凍后用力搖勻，待測。

1．2 試驗方法

按常規(guī)方法分離所采集血液的血清以及種蛋的蛋清，然后按試劑盒的使用說明書進行樣品的處理及檢測，其中血清用于抗體的檢測，蛋清則用于P27抗原的檢測。

2 結(jié)果與分析

2．1 不同地方品種雞ALV感染情況

由表1可知，群特異性P27抗原總的陽性率為21．82%(72/330)。結(jié)果表明江西地方品種雞禽白血病病毒的感染十分普遍，調(diào)查還顯示地方品種雞不同品種之間禽白血病病毒陽性檢出率差異較大，JXDF4品種雞 P27抗原陽性率高達 36．67%，其次為 JXDF5、JXDF1、JXDF3、JXDF6、JXDF2 品種雞。ALV-J亞群抗體檢測結(jié)果顯示，ALV-J亞群抗體的總陽性率較高12．22%(44/360)，與P27抗原檢出情況類似，JXDF4、JXDF5抗體水平均相對較高(15%、30%)，而 JXDF1、JXDF2、JXDF3、JXDF6 4 個地方品種的雞群陽性率相對較低(≤10%)。

2．2 同一品種雞在不同種禽場感染情況

由表2可知，JXDF2、JXDF3品種雞在不同種禽場的P27抗原陽性檢出率相差不大，JXDF4品種雞在H、I、J場抗原陽性率相差較大，這可能與不同雞場的飼養(yǎng)管理水平以及生物安全措施不均有關(guān)。調(diào)查還顯示同一品種雞在不同種禽場的ALV-J感染陽性率相差較大。JXDF2品種雞在B場的ALV-J亞型陽性率是3．33%，而在D場的ALV-J亞型陽性率16．67%;JXDF3品種雞在F場的ALV-J感染陽性率為3．33%，而在G場的感染陽性率達23．33%;JXDF4品種雞在J場的感染率是3．33%，而在H、I場的感染率26．67%、16．67%。由于目前市面尚未有 ALV疫苗，所以這些雞只的抗體均是病毒感染后所產(chǎn)生［11］。生物安全是影響禽白血病的一個重要因素，提高種雞場飼養(yǎng)管理水平是禽白血病凈化的一個重要環(huán)節(jié)。

表1 不同品種雞ALV感染狀況的調(diào)查結(jié)果Tab．1 The results of ALV infection for different chicken breeds

表2 不同雞場ALV感染狀況的調(diào)查結(jié)果Tab．2 The results of ALV infection for chicken in different fields

3 討論與小結(jié)

本研究通過對江西省不同地區(qū)11個雞場、6個不同地方品種雞330份蛋清進行P27抗原檢測，陽性率達21．81%，這說明江西省地方品種雞感染禽白血病病毒已十分普遍。試驗通過對12個雞場360份血清樣本的ALV-J抗體檢測，發(fā)現(xiàn)被檢測雞場均存在ALV-J亞型的感染，被檢雞群ALV-J個體陽性率為12．22%，這比前期對江西省J-亞型白血病的血清學調(diào)查結(jié)果更高［12］，表明江西省地方品種雞ALVJ的感染已更嚴重。江西省地方品種雞ALV-J的普遍感染可能與外來品種雞的帶毒傳播有關(guān)，也可能是與使用污染了ALV的疫苗有關(guān)［13］。

試驗共調(diào)查了6個不同地方品種雞的血清樣本，發(fā)現(xiàn)各品種雞均有不同程度的ALV-J感染，且不同品種間陽性率差異較大。品種間的陽性率差異與飼養(yǎng)管理、疫苗使用、生物安全措施等多種因素有關(guān)，也可能與不同地方品種雞對ALV-J的抗性差異有關(guān)，不同ALV-J分離株在遺傳性及抗遺傳性上不同，各品系雞對其感染的免疫應(yīng)答也不相同，表現(xiàn)為 ALV-J免疫應(yīng)答的多樣性［13］。

本研究比較了JXDF2、JXDF3、JXDF4這3個江西地方品種雞分別在不同場的ALV-J感染陽性率，結(jié)果顯示同一品種雞在不同場的ALV-J亞型的感染率各不相同。ALV-J感染陽性率高低可能與祖代、父母代雞場使用非SPF疫苗、開放式養(yǎng)殖、飼料管理差、環(huán)境衛(wèi)生消毒不徹底等因素有關(guān)。ALV-J主要有垂直傳播和水平傳播兩種方式，大多數(shù)雞通過與先天性感染雞密切接觸而受到感染［14］。垂直傳播一般僅引起小部分雞感染，但由于在世代間持續(xù)不斷，因此在流行病學上是很重要的。而ALV-J發(fā)生在孵化期間的水平傳播在肉雞更為廣泛，它對保持足夠的垂直傳播率以使感染不消失也可能是必須的［15-16］。長期接觸糞便、污染的飼料、飼養(yǎng)器具及工作人員等是外源性ALV傳播的另一條主要途徑。目前尚無防制外源性ALV感染的疫苗，只能通過防止生物制品污染、垂直傳播和二次感染作為控制該病的主要手段。祖代和父母代種雞場必須加強外源性ALV凈化工作，提高飼養(yǎng)管理水平，并注意日常獸醫(yī)衛(wèi)生管理和消毒措施，控制其它病原的混合感染。

［1］王改利，劉貴華，初芹，等．北京地方品種雞禽白血病病毒的跟蹤檢測與PCR檢測方法的建立［J］．華北農(nóng)學報，2010，25(4):213-217．

［2］Fadly A M，Smith E J．Isolation and some characteristics ofa subgroup J-like avian leukosis virus associated withmyeloid leukosis in meat-type chickens in the United States［J］．Avian Dis，1999，43(2):391-400．

［3］Malkinson M，Banet-Noach C，Davidson I，et al．Comparison of serological and virological findings from subgroup Javian leukosis virus-infected neoplastic and non-neoplastic flocks in Israel［J］．Avian Pathol，2004，33(2):281-287．

［4］Gao Y L，Win L T，Pan W，et al．Subgroup Javian leukosis virus in layer flocks in China［J］．Emerg Infect Dis，2010，16(1):1637-1638．

［5］Simon P．fenton，Maddula R．Reddy，Trevor J．Bagust．Single and concurrent avian leukosis virus infections with avian leukosis virus-Jand avian leukosis virus-A in Australianmeat-type chickens［J］．Avia Pathology，2005，34(1):48-54．

［6］錢琨，沈海玉，金文杰，等．蘇皖地區(qū)規(guī)?；u場禽白血病凈化的初步研究［J］．中國家禽，2012，5(2):8-11．

［7］Zeng Xiangwei，Liu Lanlan，Hao Ruijun，et al．Detection and molecular characterization of J subgroup avian leukosis virus in wild ducks in China［J］．PLoSOne，2014，9(4):1-8．

［8］杭柏林，尹麗萍，孫薇薇，等．J亞群禽白血病病毒感染雞的抗原和血清抗體變化規(guī)律［J］．中國家禽，2013，2(1):15-18．

［9］崔治中，孫淑紅，趙鵬，等．對種雞場禽白血病凈化方案的建議［J］．中國家禽，2014，1(2):3-6．

［10］張勝斌，吳天威，韋平，等．地方優(yōu)良雞種禽白血病病毒感染調(diào)查及凈化［J］．中國家禽，2010，12(2):11-16．

［11］Furukawa S，Tsukamoto K，Mseda M．Multicentric histiocytosis related to avian leukosis virus subgroup J(ALV-J)infection inmeat-type local chickens［J］．Israel Journal of Veterinary Medicine，2014，76(1):89-92．

［12］康昭風，謝金防，韋啟鵬，等．江西省J-亞型白血病的血清學調(diào)查［J］．江西畜牧獸醫(yī)雜志，2010，5(1):21-22

［13］Payne L N，Gillespie A M，Howes K．Unsuitability of chicken sera for detection of exogenous ALV by the group-specific antigen ELISA［J］．Veterinary Record，1993，132(4):555-557．

［14］Cottral G E，Burmester B R，Waters N F．Egg transmission of avian lymphomatosis［J］．Poultry Science，1954，33(1):1174-1184．

［15］Fadly A M，Smith E J．Isolation and some characteristics of a subgroup J-like avian leukosis virus associated with myeloid leukosis in meat-type chickens in the United States［J］．Avian Diseases，1999，43(2):391-400．

［16］Witter R L，Bacon L D，Hunt H D，etal．Avian leukosis virus subgroup J infection profiles in broiler breeder chickens:Association with virus transmission to progeny［J］．Avian Diseases，2000，44(4):913-31．