麝香保心丸對(duì)一次性力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌損傷標(biāo)記物和C反應(yīng)蛋白的影響

陳金良，劉征，張晶，車鵬程，李海軍，李芳，盧凡，程慶強(qiáng)

（1.中國人民解放軍第281醫(yī)院，河北 秦皇島 066100；2.秦皇島市第一醫(yī)院，河北秦皇島 066101；3.河北聯(lián)合大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000）

研究報(bào)告

麝香保心丸對(duì)一次性力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌損傷標(biāo)記物和C反應(yīng)蛋白的影響

陳金良1*，劉征1，張晶2，車鵬程3，李海軍1，李芳1，盧凡1，程慶強(qiáng)1

（1.中國人民解放軍第281醫(yī)院，河北 秦皇島 066100；2.秦皇島市第一醫(yī)院，河北秦皇島 066101；3.河北聯(lián)合大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河北唐山 063000）

目的探討麝香保心丸對(duì)一次性力竭運(yùn)動(dòng)大鼠心肌損傷標(biāo)記物和C反應(yīng)蛋白的影響。方法選擇雄性Wistar大鼠52只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組26只。兩組大鼠每天自由進(jìn)食飲水相同，實(shí)驗(yàn)組大鼠每天麝香保心丸2粒（每粒22.5 mg）分2次灌胃，共兩周。兩組均接受力竭游泳運(yùn)動(dòng)，制成力竭運(yùn)動(dòng)動(dòng)物模型，分別測定和比較兩組大鼠血清和心肌組織肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白T（TnT）、B型腦鈉肽（BNP）和C反應(yīng)蛋白（CRP）水平。結(jié)果大鼠平均力竭運(yùn)動(dòng)游泳時(shí)間實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯延長（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)組血清和心肌組織CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）。結(jié)論麝香保心丸可顯著降低力竭運(yùn)動(dòng)大鼠血清和心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平，能夠減輕力竭運(yùn)動(dòng)后心肌損傷。

大鼠；力竭運(yùn)動(dòng)；麝香保心丸；心肌損傷標(biāo)記物；C反應(yīng)蛋白

力竭運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可通過引起心肌代謝和心肌細(xì)胞通透性異常，導(dǎo)致心肌損傷壞死，從而對(duì)心肌產(chǎn)生不利影響［1］。因此，如何防治力竭運(yùn)動(dòng)對(duì)心肌造成的損傷，保護(hù)心肌功能和增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)能力，成為新的研究熱點(diǎn)。本研究通過觀察中成藥麝香保心丸對(duì)一次性力竭游泳運(yùn)動(dòng)大鼠心肌損傷標(biāo)記物和炎癥因子的影響，探討其對(duì)心肌損傷的防治作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇11～12周齡清潔級(jí)雄性Wistar大鼠52只，體重（200±15）g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［SCXK（冀）2003-1-003］，實(shí)驗(yàn)在河北聯(lián)合大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成［SYXK（冀）2010-0038］。同次實(shí)驗(yàn)的各組大鼠均為同窩大鼠，分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，飼養(yǎng)室環(huán)境溫度（21±4）℃，相對(duì)濕度48%～56%，光照時(shí)間每天12 h。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組

隨機(jī)分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組26只。兩組大鼠每天自由進(jìn)食飲水相同，實(shí)驗(yàn)組大鼠給予麝香保心丸（上海和黃藥業(yè)生產(chǎn)，批號(hào)140314；每粒22.5 mg）灌胃，每次1粒，每天2次，共兩周。兩組均接受一次性力竭運(yùn)動(dòng)游泳。

1.2.2 動(dòng)物模型制備

兩組大鼠分別在長100 cm、寬50 cm、高50 cm的玻璃游泳槽中游泳，水深40 cm，水溫（31±1）℃。正式實(shí)驗(yàn)前1 d進(jìn)行1次適應(yīng)性游泳運(yùn)動(dòng)10 min。后將各組大鼠投入游泳槽中，自入水至游泳力竭的時(shí)間即游泳持續(xù)時(shí)間（短于2 h的大鼠除外）。游泳時(shí)尾部負(fù)重自身體重2%的負(fù)荷，力竭標(biāo)準(zhǔn)按Thomas報(bào)道的文獻(xiàn)［2］：大鼠游泳動(dòng)作明顯失調(diào)，且不能再堅(jiān)持，沉入水下10 s不能自主上浮。短時(shí)間內(nèi)力竭的大鼠，撈出休息5 min，繼續(xù)游泳，運(yùn)動(dòng)時(shí)間不少于2 h。

1.2.3 樣本采集

兩組動(dòng)物力竭性游泳后即刻，分離穿刺右頸靜脈采血4mL，以3000 r/min離心15min后取上清液ˉ70℃保存?zhèn)錂z。然后將大鼠脫頸椎處死，迅速切取心臟，生理鹽水洗去心腔內(nèi)血液，剔除多余脂肪，剪下左心室肌20 mg剪碎，加2 mL生理鹽水，放入玻璃勻漿管進(jìn)行勻漿、離心，取上清液ˉ70℃保存?zhèn)錂z。

1.2.4 血清和心肌組織實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測方法

以下列方法檢測兩組大鼠血清和心肌組織的肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白T（troponin T，TnT）、腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）和 C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）。CK、CK-MB用免疫抑制法檢測，TnT應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（Cusabio型酶聯(lián)免疫測定儀），BNP由Triage快速定量監(jiān)測儀測定，CRP應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法（羅氏601測定儀）測定。試劑盒由南京建成生物工程公司提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠力竭游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)間

兩組大鼠均完成力竭游泳運(yùn)動(dòng)，對(duì)照組大鼠平均力竭游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)間為（4.16±1.04）h，實(shí)驗(yàn)組為（5.26±1.12）h，兩組在運(yùn)動(dòng)時(shí)間方面差異有顯著性（P＜0.05）。游泳運(yùn)動(dòng)前喂養(yǎng)麝香保心丸的大鼠耐受游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)間相對(duì)延長，運(yùn)動(dòng)耐力增強(qiáng)。

2.2 兩組大鼠血清中CK、CK-M B、TnT、BNP和CRP水平

表1顯示，實(shí)驗(yàn)組力竭運(yùn)動(dòng)心肌損傷各項(xiàng)指標(biāo)和CRP水平均低于對(duì)照組（P均＜0.05），說明麝香保心丸能夠有效地減輕力竭運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠心肌造成的損傷。

表1 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組力竭運(yùn)動(dòng)后血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.1 The changes of serum CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

表1 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組力竭運(yùn)動(dòng)后血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.1 The changes of serum CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

注：*P＜0.05，與對(duì)照組比較。Note.*P＜0.05，compared with the control group.

2.3 兩組大鼠心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平

表2顯示，實(shí)驗(yàn)組大鼠在力竭運(yùn)動(dòng)后心肌組織中CK等各項(xiàng)指標(biāo)和CRP的活性均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05，P＜0.05）。由于力竭運(yùn)動(dòng)可造成心肌損傷，心肌細(xì)胞內(nèi)這些酶大量釋放，致使心肌中酶的活性升高，而應(yīng)用麝香保心丸后可使心肌細(xì)胞內(nèi)心肌酶和CRP釋放減少，進(jìn)一步說明其可減輕力竭運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠心肌造成的損傷，對(duì)心肌可以起到保護(hù)作用。

表2 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組力竭運(yùn)動(dòng)后心肌組織CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.2 The changes ofmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

表2 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組力竭運(yùn)動(dòng)后心肌組織CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平（±s，n=26）Tab.2 The changes ofmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after exhaustive exercise in the rats

注：*P＜0.05，與對(duì)照組比較。Note.*P＜0.05，compared with the control group.

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3 討論

已有研究［3ˉ5］證明，力竭運(yùn)動(dòng)或強(qiáng)負(fù)荷軍事訓(xùn)練后可導(dǎo)致機(jī)體血清CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP水平增高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表明［6，7］，大鼠力竭游泳運(yùn)動(dòng)后血CK及CK-MB增高，心肌細(xì)胞凋亡增多，血CK及CK-MB與心肌細(xì)胞凋亡呈平行的動(dòng)態(tài)變化，可以反映早期心肌細(xì)胞凋亡情況。臨床上也已應(yīng)用CK、CK-MB、肌鈣蛋白（T和I）H和BNP做為判定心肌損傷的特異性指標(biāo)，近年來發(fā)現(xiàn)CRP與心肌損傷有關(guān)［4，5］。因此可以將血CK、CK-MB、TnT、BNP做為心肌損傷標(biāo)記物和CRP做為間接反應(yīng)或幫助觀察藥物防治心肌損傷的效果指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，應(yīng)用麝香保心丸的大鼠一次性力竭游泳運(yùn)動(dòng)后血清和心肌組織中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP等濃度明顯低于對(duì)照組的大鼠。就力竭運(yùn)動(dòng)引起血清和心肌CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP活性增高的機(jī)制而言，可能系力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物的積累和滲透壓增高，激素分泌加強(qiáng)；長時(shí)間運(yùn)動(dòng)使心肌缺氧，致使心肌細(xì)胞能量代謝障礙，導(dǎo)致亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)對(duì)高能磷酸化合物的競爭，使心肌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)變化造成心肌細(xì)胞膜通透性損傷性改變，最終出現(xiàn)心肌細(xì)胞內(nèi)酶釋放入血液增多［6ˉ8］。許思毛等［9］應(yīng)用電鏡觀察了大負(fù)荷跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜Na+-K+泵、Ca2+泵與肌質(zhì)網(wǎng)Ca2+泵活性的影響及其與心肌超微結(jié)構(gòu)變化的關(guān)系。結(jié)果顯示，運(yùn)動(dòng)后24 h肌質(zhì)網(wǎng)Ca2+泵活性顯著減低，線粒體和肌原纖維結(jié)構(gòu)明顯損傷，肌細(xì)胞及肌質(zhì)網(wǎng)腫脹，說明高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可導(dǎo)致心肌微結(jié)構(gòu)損傷。Smith研究［10］發(fā)現(xiàn)，力竭運(yùn)動(dòng)后即刻和24 h，心肌由于缺血缺氧致使與心肌損傷的相關(guān)炎性因子分泌增多，與本實(shí)驗(yàn)中大鼠力竭運(yùn)動(dòng)后CRP顯著升高意義相似。

本研究中，在力竭游泳運(yùn)動(dòng)前喂養(yǎng)麝香保心丸的大鼠，之后血液和心肌組織的酶學(xué)標(biāo)記物和炎性因子CRP明顯低于對(duì)照組（P均＜0.05），說明麝香保心丸可減低力竭運(yùn)動(dòng)大鼠的心肌酶和炎性因子活性。麝香保心丸由人工麝香、人參提取物、肉桂、蘇和香、蟾酥、冰片、人工牛黃組成，藥理作用是多方面的［11］：①麝香具有強(qiáng)心作用，能夠?qū)巩惐I上腺素興奮心臟的作用，通過抑制心肌細(xì)胞的自律性使心率減慢，因而減少心肌氧耗；②人參提取物人參莖葉總皂甙對(duì)心肌有直接保護(hù)作用，并具有保護(hù)心肌毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及減輕線粒體損傷的作用；③肉桂有擴(kuò)張冠脈、降低血管阻力，其成分桂皮醛具有抗血小板藥和抗凝血酶作用，因此可促進(jìn)心肌微循環(huán)，保障心肌血供；④動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蘇合香有增強(qiáng)心肌耐缺氧能力的作用，對(duì)狗實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞有減慢心率、增加冠脈血流和降低心肌耗氧作用，對(duì)兔、大鼠血小板聚集有顯著抑制作用；⑤蟾酥成分蟾毒配基類通過抑制心肌細(xì)胞膜上的Na+-K+-ATP酶，使心肌細(xì)胞內(nèi)Na+增高，Ga2+通過Na+-Ca2+交換進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而使心肌收縮力增強(qiáng)；⑥另外兩種成分牛黃具有強(qiáng)心和鎮(zhèn)靜作用；冰片可防止冠脈痙攣，能夠減輕缺血所致的心肌損傷。中醫(yī)認(rèn)為此組方具有補(bǔ)氣、芳香開竅、益氣溫陽和理氣止痛功效，對(duì)應(yīng)西醫(yī)為擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈改善冠脈供血，增加心輸出量；改善缺血心肌的代謝，減慢心率降低心肌耗氧；抑制心肌纖維化，減輕心肌和血管炎性反應(yīng)［12］；在改善心功能同時(shí)，降低血漿BNP濃度。麝香保心丸還可通過抑制纖維蛋白原，有效抑制動(dòng)脈壁炎癥反應(yīng)，使CRP及P-選擇素水平降低，降低冠狀動(dòng)脈的炎癥損害進(jìn)而保護(hù)血管內(nèi)皮功能［13，14］，減少心血管事件發(fā)生。許多基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究證明麝香保心丸是安全有效的［15］。

總之，本研究結(jié)果進(jìn)一步表明，麝香保心丸可明顯降低大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)血清和心肌中CK、CK-MB、TnT、BNP和CRP的水平，對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)具有防治心肌損傷和保護(hù)心臟功能作用。

［1］ 王曉偉，曹雪濱.力竭性運(yùn)動(dòng)對(duì)心臟影響的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)研究與教育，2012，29（2）：60ˉ63.

［2］ Thomas DP，Marshall KI.Effects of repeated exhaustive exercises on myocardial subcellularmembrane structure［J］.JSports Med，1988，9（4）：257ˉ264.

［3］ Tian Y，Nie J，Tong TK，et al.Changes in serum cardiac troponins following a 21-km run in junior male runners［J］.J Sports Med Phys Fitness，2006，46（3）：481ˉ488.

［4］ 陳金良，張晶，樊欣娜，等.新兵強(qiáng)負(fù)荷訓(xùn)練后血清心肌損傷標(biāo)記物和C反應(yīng)蛋白的變化［J］.解放軍醫(yī)藥雜志.2014，26（4）：103ˉ105.

［5］ Reichlin T，HochholzerW，Bassetti S，et al.Early diagnosis of myocardial infarction with sensitive cardiac troponin assays［J］. N Engl JMed，2009，361（9）：858ˉ867.

［6］ 吳廣禮，容俊芳，溫進(jìn)坤，等.過度訓(xùn)練致大鼠心肌和腎組織細(xì)胞凋亡及山莨菪堿干預(yù)的影響［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2007，32（1）：68ˉ71.

［7］ 黃潑潑，劉江偉，張波，等.沙漠干熱環(huán)境下中暑大鼠的心肌酶及心肌組織形態(tài)學(xué)改變［J］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2014（2）：11ˉ15.

［8］ 王福文，胡志力，趙敬國，等.反復(fù)力竭性運(yùn)動(dòng)后大鼠血清cTn I和心肌組織形態(tài)學(xué)的改變［J］.心臟雜志，2011，23（2）：197ˉ199.

［9］ 許思毛，劉濤波，蘇全生.大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠心肌細(xì)胞膜鈉鉀泵、鈣泵與肌漿網(wǎng)鈣泵活性的影響［J］.體育科學(xué)，2010，30（12）：82ˉ86.

［10］ Smith LL.Cytokine hypothesis of overtraining：a physiological adaptation to excessive stress［J］.Med Sci Sports Exerc，2000，32（2）：317ˉ331.

［11］ 王仙，徐傳新，朱慧娟.麝香保心丸的心血管系統(tǒng)藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2012，23（43）：4114ˉ4115.

［12］ 韓凌，陳金良，周文燕，等.麝香保心丸聯(lián)合曲美他嗪對(duì)冠心病心力衰竭患者血管內(nèi)皮功能及血漿腦鈉肽影響臨床研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010，8（12）：1431ˉ 1433.

［13］ 張武寧，彭雪梅，高曉東，等.麝香保心丸對(duì)2型糖尿病合并慢性心力衰竭患者心功能及BNP的影響［J］.中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2012，4（3）：234ˉ236.

［14］ 張勇，唐海沁，李瑾.麝香保心丸治療冠心病的Meta分析［J］.中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2012，4（1）：13ˉ17.

［15］ 魏姍姍，詹常森，鄧中平.麝香保心丸安全性研究概述［J］.中成藥，2015，37（5）：1080ˉ1082.

Influence of Shexiangbaoxinwan on m yocardial injury markers and C-reactive protein after a single bout of exhaustive exercise in rats

CHEN Jin-liang1，LIU Zheng1，ZHANG Jing2，CHE Peng-cheng3，LIHai-jun1，LIFang1，LU Fan1，CHENG Qing-qiang1
（1.Department of Cardiology，No.281 Hospital of PLA，Qinhuangdao 066100，China；2.Department of Cardiology，People’s Hospital of Qinhuangdao City，Qinhuangdao，Hebei066000；3.Hebei University School of Medicine，Tangshan City，Hebei063000）

ObjectiveTo observe the influence of a Chinese traditionalmedicine，Shexiangbaoxinwan，on myocardial injurymarkers and C-reactive protein in exhaustively exercised rats.M ethodsA total of 52 male 11-12 week old Wistar ratswere divided randomly into two groups：the experimental（n=26）and controlgroups（n=26）.The two groups of rats took food and water freely.The experimental group of rats was given Shexiangbaoxinwan（2 capsules per day）for twoweeks.Following a single boutofexhaustive swimming（≥2 hrs），the serum andmyocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP in both groups were determined and compared.ResultsCompared with the control group，the exhaustive swimming time of the experimental group was significantly prolonged（P＜0.01）.The levels of serum andmyocardial CK，CKMB，TnT，BNP and CRP in the experimental group were significantly lower than those in the control group（P＜0.05 for all）.ConclusionsThe Chinese traditionalmedicine Shexiangbaoxinwan can significantly decrease the levels of rat serum and myocardial CK，CK-MB，TnT，BNP and CRP after a single boutof exhaustive swimming，and car alleviatemyocardial injury.

Chinese medicine，Shexiangbaoxinwan；Rat；Exhaustive swimming；Myocardium injury，markers；C-reactive protein

Q95-33

A

1005-4847（2015）05-0509-04

10.3969/j.issn.1005ˉ4847.2015.05.013

2015-04-13

河北省科學(xué)技術(shù)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：112761169）。

陳金良（1965ˉ），男，主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士。研究方向：冠心病治療。E-mail：cjl281yy@163.com