丹參多酚酸鹽聯(lián)合聚維酮碘預(yù)防大鼠術(shù)后腸粘連

劉國濤陳 巧金麗明張 勤

丹參多酚酸鹽聯(lián)合聚維酮碘預(yù)防大鼠術(shù)后腸粘連

劉國濤1陳 巧1金麗明1張 勤2

目的 觀察丹參多酚酸鹽聯(lián)合聚維酮碘對大鼠術(shù)后腸粘連的影響，探討其可能作用機制。方法 選用SD雄性大鼠50只，隨機分為對照組、模型組、丹參多酚酸鹽組、聚維酮碘組（PVP-I組）及丹參多酚酸鹽聯(lián)合PVP-I組（聯(lián)合組），每組10只。除對照組外，其余各組均制作腸粘連模型。對照組和模型組每天腹腔注射5%葡萄糖溶液；丹參多酚酸鹽組、PVP-I組和聯(lián)合組每天分別腹腔注射丹參多酚酸鹽、PVP-I和二者聯(lián)合，連續(xù)注射8天。大鼠于術(shù)后第7天開腹，肉眼觀察各組大鼠術(shù)后粘連分級情況；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測各組大鼠血清和粘連組織白細胞介素-1β（IL-1β）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）水平。結(jié)果 丹參多酚酸鹽組及聯(lián)合組腸粘連程度明顯低于模型組（P＜0.05）；丹參多酚酸鹽組、PVP-I組及聯(lián)合組血清和粘連組織IL-1β表達水平均顯著降低于模型組[（64.82±10.55）pg/mL、（70.93±16.06）pg/mL、（62.37±3.32）pg/mL vs（75.75±6.67）pg/mL，（178.90± 17.28）pg/mL、（190.76±34.16）pg/mL、（168.40±25.14）pg/mL vs（220.78±18.31）pg/mL，P＜0.05或P＜0.01）。丹參多酚酸鹽組、PVP-I組及聯(lián)合組血清和粘連組織TGF-β1表達水平均顯著降低于模型組[（36.77±5.25）pg/mL、（42.67±3.40）pg/mL、（21.90±1.15）pg/mL vs（54.93±4.75）pg/mL，（639.62± 118.31）pg/mL、（645.32±56.95）pg/mL、（609.87±64.88）pg/mL vs（759.87±178.42）pg/mL，P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論 丹參多酚酸鹽、PVP-I及二者聯(lián)合均能降低大鼠術(shù)后腸粘連程度，這可能與其降低血清和粘連組織中IL-1β和TGF-β1表達水平有關(guān)。

大鼠；腸粘連；丹參多酚酸鹽；聚維酮碘；白細胞介素-1β；轉(zhuǎn)化生長因子-β1

腸粘連是腹部手術(shù)后最常見的并發(fā)癥之一，文獻報道可高達60%～70%[1]，術(shù)后腸粘連已成為導(dǎo)致腸梗阻的首要原因[2]。目前，仍然沒有令人滿意藥物或方法預(yù)防術(shù)后腸粘連。丹參多酚酸鹽是活血化瘀中藥丹參主要有效活性成分之一；聚維酮碘（PVP-I）是一種消毒防腐的碘狀水溶液，是1-乙烯基-2吡咯烷酮均聚物與碘的復(fù)合物，兩者在防治腸粘連方面已有報道[3-4]。本實驗通過觀察丹參多酚酸鹽聯(lián)合PVP-I對大鼠術(shù)后腸粘連的預(yù)防作用及對血清和粘連組織中白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）含量的影響，探討其可能作用機制。

1 實驗材料

1.1 動 物 健康清潔級SD雄性大鼠50只，體質(zhì)量（220±50）g。由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。合格證號：SCXK（滬）2008-0016，購自上海山西普爾-必凱實驗動物有限公司。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 試 劑 注射用丹參多酚酸鹽由上海綠谷制藥股份有限公司提供（批號Z20050249）。PVP-I溶液由杭州民生藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)（批號51003022）。IL-1β、TGF-β1酶聯(lián)免疫試劑盒、抗原修復(fù)液、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒：均購于南京奧多福尼生物科技有限公司（批號20111124）。

2 實驗方法

2.1 分 組 50只SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為對照組、模型組、丹參多酚酸鹽組、PVP-I組及聯(lián)合組，每組10只。

2.2 動物模型制備 除正常對照組外，其余均制作成腸粘連模型。術(shù)前12h禁食不禁水，稱重，以3%戊巴比妥鈉按30mg/kg腹腔注射麻醉。腹部剃毛，用

5%PVP-I和75%乙醇分別消毒，在無菌操作下取下腹部正中切口約2cm，開腹后提出盲腸，置于無菌洞巾上約5min，充分使?jié){膜干燥。以解剖刀輕刮整個盲腸漿膜面10遍，形成約1.0cm×1.0cm大小損傷面。再滴2滴無水乙醇于創(chuàng)面上，夾住盲腸系膜動脈約2min，盲腸回納入腹腔原位，翻轉(zhuǎn)右側(cè)腹壁，在距切口旁約1cm處用解剖刀輕刮右側(cè)腹壁，形成約1.0cm×1.0cm大小的損傷面。將兩損傷面以5～0號醫(yī)用縫線固定，分兩層關(guān)閉腹腔。對照組開腹后提出盲析。計量資料用（±s）表示，多個樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）：若方差齊性，則采用LSD法；若方差不齊,則采用Tamhane，sT2法。計數(shù)資料的多個樣本均數(shù)比較采用非參數(shù)法（Nonparametric Tests-2 Independent Samples），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 大鼠腸粘連情況 與對照組比較，模型組動物均發(fā)生腸粘連（P＜0.01），且粘連程度較高。與模型組比較，丹參多酚酸鹽組、聯(lián)合組的腸粘連程度明顯減輕（P＜0.05）；但PVP-I組與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

3.2 血清IL-1β 模型組明顯高于對照組（P＜0.05）；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組及聯(lián)合組血清IL-1β含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），見表2。

3.3 血清TGF-β1 模型組明顯高于對照組（P＜0.01）；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組、PVP-I組及聯(lián)合組血清IL-1β含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），見表2。腸，翻轉(zhuǎn)右側(cè)腹壁，將盲腸與腹壁以5～0號醫(yī)用縫線固定回納入腹腔，分兩層關(guān)腹。術(shù)后各組動物單籠飼養(yǎng)。

2.3 給 藥 對照組和模型組腹腔內(nèi)注射5%葡萄糖注射液4mL/kg；PVP-I組腹腔注射0.625%PVP-I溶液4mL/kg，丹參組腹腔注射丹參多酚酸鹽溶液10.9mg/kg，聯(lián)合組分別注射PVP-I及丹參多酚酸鹽溶液。從手術(shù)當(dāng)日起連續(xù)8天，每天1次。

2.4 觀察指標(biāo)及檢測方法 于術(shù)后第7天以3%戊巴比妥鈉按30mg/kg腹腔注射麻醉,做倒“U”形切口打開腹腔。參照Nair分級標(biāo)準進行粘連等級評分[5]：0級，無粘連；Ⅰ級，僅一條粘連帶；Ⅱ級，兩條粘連帶；Ⅲ級，多于兩條粘連帶而內(nèi)臟未直接粘連到腹壁；Ⅳ級，不管有多少粘連帶，內(nèi)臟直接粘連到腹壁。同時于下腔靜脈取血，以4000r/min離心20min，分離血清，置于超低溫冰箱中保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清IL-1β和TGF-β1含量；于粘連最嚴重處取粘連組織，采用酶聯(lián)免疫吸附測定粘連組織IL-1β及TGF-β1表達。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計分

表1 各組大鼠腸粘連肉眼分級（只）

表2 各組大鼠血清IL-1β和TGF-β1表達水平（pg/mL，±s）

表2 各組大鼠血清IL-1β和TGF-β1表達水平（pg/mL，±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組別對照組模型組丹參多酚酸鹽組PVP-I組聯(lián)合組只數(shù)10 10 10 10 10 IL-1β 62.45±7.94 75.75±6.67* 64.82±10.55△70.93±16.06 62.37±3.32△△TGF-β1 16.51±2.68 54.93±4.75** 36.77±5.25△42.67±3.40 21.90±1.15△△

3.4 粘連組織IL-1β 模型組明顯高于對照組（P＜0.01）；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組、PVP-I組及聯(lián)合組血清IL-1β含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），見表3。

3.5 粘連組織TGF-β1 模型組明顯高于對照組（P＜0.01）；與模型組比較，丹參多酚酸鹽組、PVP-I組及聯(lián)合組血清TGF-β1含量均降低（P＜0.05或P＜0.01）；見表3。

表3 各組大鼠粘連組織IL-1β和TGF-β1表達水平（pg/mL，±s）

表3 各組大鼠粘連組織IL-1β和TGF-β1表達水平（pg/mL，±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

對照組模型組丹參多酚酸鹽組PVP-I組聯(lián)合組10 10 10 10 10 155.59±24.15 220.78±18.31** 178.90±17.28△190.76±34.16△168.40±25.14△△593.42±131.51 759.87±178.42** 639.62±118.31△645.32±56.95△609.87±64.88△△

4 討 論

正常腹膜有一定的纖維蛋白溶解功能，這種功能是由巨噬細胞分泌的纖維蛋白溶解酶原激活物（t-PA）啟動，最終將腹膜間皮細胞釋放的纖維蛋白溶解酶原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白溶解酶。腹膜因機械損傷、組織缺血、異物刺激等引起炎癥時，t-PA活性降低，并進一步產(chǎn)生纖維蛋白溶解酶原激活物抑制物（PAI），影響纖維蛋白溶解酶原向纖維蛋白溶解酶轉(zhuǎn)變的過程，導(dǎo)致大量的纖維蛋白沉積，最終形成永久性粘連。在粘連形成的各個階段均有多種生長因子和細胞因子參與調(diào)控，其中IL-1和TGF-β影響較大。Kaidi等[6]報道在術(shù)前應(yīng)用IL-1抗體可明顯減輕試驗大鼠的腹膜粘連程度,認為在術(shù)后早期,血清中較高水平的IL-1與術(shù)后腹膜粘連形成呈顯著正相關(guān)，IL-1是術(shù)后腹膜粘連形成的重要短期介質(zhì)。TGF-β在損傷、炎癥及纖維化的過程中起著橋梁作用，是啟動和終止組織修復(fù)的一種主要肽類生長因子,其中TGF-β1起著關(guān)鍵性的作用[7]。TGF-β1是通過與靶細胞受體結(jié)合進而傳導(dǎo)細胞間信號，并參與細胞外基質(zhì)的合成和沉積，促進基質(zhì)中膠原蛋白、纖維蛋白和蛋白多糖的合成，抑制其降解，增加血管形成，趨化成纖維細胞、單核細胞及巨噬細胞，啟動一系列連鎖反應(yīng)，破壞纖維蛋白降解與生成之間的平衡，導(dǎo)致纖維蛋白沉積，進一步導(dǎo)致腹膜粘連的形成。本研究結(jié)果也表明，模型組大鼠術(shù)后血清和粘連組織IL-1β和TGF-β1水平較對照組明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），提示IL-1β和TGF-β1與粘連形成有密切聯(lián)系。

丹參是唇形科鼠尾草屬植物，具有“活血祛瘀、安神除煩、涼血消癰”之功效，研究[8-9]表明，丹參具有改善腹膜組織缺血程度、減少炎癥反應(yīng)、減少損傷腹膜處膠原過度合成等藥理作用，能有效防治粘連。丹參多酚酸鹽是丹參主要有效成分。本實驗研究中丹參多酚酸鹽組和聯(lián)合組腹腔內(nèi)注入的丹參多酚酸鹽被腹膜吸收，因其具有活血作用，可降低毛細血管的通透性，提高缺血部位組織細胞對氧的耐受性，使微循環(huán)得到改善，炎性物質(zhì)吸收加快，進一步調(diào)節(jié)受損腹膜處炎癥因子的表達水平，降低炎癥反應(yīng)的程度，從而減少纖維蛋白的滲出，發(fā)揮防治粘連的作用。

PVP-I溶液的有效碘含量為3～5g/L，揮發(fā)殘渣＜0.5%。由于載體PVP的作用，改變了碘的溶解性、穩(wěn)定性和刺激性，能有效控制術(shù)后炎癥的發(fā)生發(fā)展，是一種高效的殺菌消毒劑。臨床用于體腔沖洗或留置，預(yù)防和治療術(shù)后感染、粘連[10]。本實驗中PVP-I大鼠的粘連等級有所降低，IL-1β和TGF-β1水平低于模型組，這可能與PVP-I稀釋液能有效控制腹腔內(nèi)感染源，降低術(shù)后炎癥反應(yīng)有關(guān)。PVP可能還可以作為丹參的載體，使丹參的藥效更持久，從而減少術(shù)后腸粘連的可能。

本實驗結(jié)果顯示，丹參多酚酸鹽、PVP-I及兩者聯(lián)合，均能減輕術(shù)后粘連程度，并降低IL-1β和TGF-β1含量，兩者聯(lián)合效果更明顯。由此推斷，丹參多酚酸鹽聯(lián)合PVP-I防治大鼠術(shù)后腸粘連的作用機制可能與降低血清和粘連組織IL-1β和TGF-β1含量，降低炎癥反應(yīng)，減少纖維蛋白沉積有關(guān)。

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（收稿：2014-08-06 修回：2014-11-20）

Salvianolate Combined w ith Povidone-iodine in Prevention of Intestinal Adhesion in Rats

LIU Guotao1,CHEN Qiao1,JIN Liming1,ZHANG Qin2. 1Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medica University,Hangzhou(310006),China;2Department of Surgery,Zhejiang Provincial People's Hospital,Hangzhou(310014),China

Objective To investigate the effects of salvianolate and povidone-iodine on postoperative intestinal adhesion in rats.M ethods Fifty male SD rats were randomly divided into 5 groups:blank control group,model group,salvianolate group,povidone-iodine group and salvianolate combined with povidone-iodine group（combination group）,with 10 rats in each group.A intestinal adhesion modeling was established in rats,and then each group were given the corresponding drugs（intraperitoneal injection of 5%glucose solution,4mL/kg;salvianolate 10.9mg/kg; 0.625%povidone-iodine,4mL/kg)for 8d.On the 7th day,rats underwent open surgery in abdomen to observe and grade intestinal adhesion by macroscopy.The level of interleukin-1βand transform growth factor-β1 in blood samples and adhesive tissue samples was determined by ELISA.Results Compared with model group,the grade of intestinal adhesion in salvianolate group and combination group was significantly lower（P＜0.05）；the level of IL-1β in blood samples and tissue samples in salvianolate group,povidone-iodine group and combination group were lower（blood:75.75±6.67pg/mL vs 64.82±10.55pg/mL,70.93±16.06pg/mL,and 62.37±3.32pg/mL;tissue:220.78±18.31pg/ mL vs 178.90±17.28pg/mL,190.76±34.16pg/mL,168.40±25.14pg/mL;P＜0.05 or P＜0.01）;the level of TGF-β1 in blood samples and tissue samples in salvianolate group,povidone-iodine group and combination group were lower（blood:54.93±4.75pg/mL vs 36.77±5.25pg/mL,42.67±3.40pg/mL,and 21.90±1.15pg/mL;tissue:759.87±178.42pg/mL vs 639.62±118.31pg/mL,645.32±56.95pg/mL,609.87±64.88pg/mL;P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion Both of sal-vianolate and povidone-iodine and their combination can effectively prevent intestinal adhesion after abdominal operation in rats,which may be related to reduction of IL-1βand TGF-β1 in peripheral blood and tissues.

rats;intestinal adhesion;salvianolate;povidone-iodine;IL-1β;TGF-β1

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究基金計劃（No.2010KYA148）

1浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科（杭州 310006）；2浙江省人民醫(yī)院外科（杭州 310014）

張勤，E-mail：hz66cn@163.com