慢性萎縮性胃炎中醫(yī)辨證分型與胃黏膜組織p53蛋白表達的相關(guān)性研究*

馬艷君，林壽寧，唐少波

1廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001；2廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院

慢性萎縮性胃炎中醫(yī)辨證分型與胃黏膜組織p53蛋白表達的相關(guān)性研究*

馬艷君1，林壽寧2，唐少波2

1廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001；2廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院

目的：觀察慢性萎縮性胃炎(簡稱CAG)中醫(yī)常見辨證分型中胃黏膜組織p53蛋白的表達水平，探討中醫(yī)各證型之間在細(xì)胞生物學(xué)水平上有無差異，探索其是否可以作為CAG中醫(yī)辨證分型的客觀指標(biāo)之一。方法：將CAG患者90例按照中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)進行分型，選擇其中病例數(shù)較多的3個證型共71例分為3組，胃鏡下采集3組患者病變胃黏膜組織，并記錄Hp感染情況，同時檢測胃黏膜組織p53蛋白的表達情況。結(jié)果：CAG 3個中醫(yī)證型組Hp陽性與Hp陰性組比較p53陽性表達情況均無顯著性差異(P＞0.05)；p53陽性表達率3個證型組間比較有顯著性差異(P＜0.05)，且陽性表達率在脾胃濕熱型、脾虛氣滯型、胃陰不足型3個證型中逐漸遞增。結(jié)論：檢測p 53的表達可作為中醫(yī)辨證分型的參考指標(biāo)，并能協(xié)助指導(dǎo)臨床診斷及治療。

慢性萎縮性胃炎；中醫(yī)證型；p53

慢性萎縮性胃炎是一種常見和難治的消化系統(tǒng)疾病，屬中醫(yī)“胃脘痛”“胃痞”等范疇，主要特征為胃黏膜腺體萎縮，腺體減少或消失［1-3］，在此基礎(chǔ)上伴發(fā)不完全型腸上皮化生和(或)中、重度異型增生則被視為癌前病變。p53是一種抑癌基因，p53的過表達參與了胃腸惡性腫瘤的細(xì)胞增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移，因此，阻斷并逆轉(zhuǎn)CAG的癌變成為中西醫(yī)研究的熱點。為探討CAG不同中醫(yī)證型與p53表達水平的關(guān)系，尋求CAG中醫(yī)辨證分型的客觀依據(jù)，本研究于2007年3月至2009年9月對71例CAG患者進行了臨床觀察，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將慢性萎縮性胃炎患者90例按照中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)進行分型，選擇其中病例數(shù)較多的3個證型共71例患者，將其分為3組，脾胃濕熱組25例，其中男14例，女11例；平均年齡(42.24±7.12)歲；平均病程(2.75±3.46)年；其中Hp陽性者13例，Hp陰性者12例。脾虛氣滯組22例，其中男12例，女10例；平均年齡(52.87± 8.93)歲；平均病程(5.03±6.24)年；其中Hp陽性者14例，Hp陰性者8例。胃陰不足組24例，其中男12例，女12例；平均年齡(58.47±8.23)歲；平均病程(8.13±7.54)年；其中Hp陽性者17例，Hp陰性者7例。3組一般臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照2000年中華消化學(xué)會井岡山“全國慢性胃炎研討會共識意見”分類

法：內(nèi)鏡下慢性胃炎分為淺表性胃炎(又稱非萎縮性胃炎)和萎縮性胃炎［4］。

1.2.2 中醫(yī)辨證分型 參照中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會消化系統(tǒng)疾病專業(yè)委員會于2003年制定的“慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案(草案)”提供的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。

1.2.2.1 脾胃濕熱證 主要癥候：1)胃脘灼熱脹痛；2)口苦口臭；3)脘腹痞悶，渴不欲飲；4)舌質(zhì)紅，邊尖深紅，苔黃厚或膩。次要癥候：1)胃黏膜急性活動性炎癥，充血糜爛明顯；2)小便黃；3)脈滑或濡數(shù)。證型確定：具備主癥2項加次癥1項。

1.2.2.2 胃陰不足證 主要癥候：1)胃脘灼熱疼痛；2)口干舌燥；3)大便干燥；4)舌紅少津無苔或剝苔或有裂紋。次要癥候：1)胃黏膜呈顆粒狀或血管顯露；2)胃黏膜干燥，黏液少或胃酸偏低；3)黏膜充血水腫或小糜爛；4)脈細(xì)數(shù)或弦細(xì)。證型確定：具備主證2項加次癥1項，或主癥1項加次證2項。

1.2.2.3 脾虛氣滯證：主要癥候：1)胃脘脹滿或脹痛，胃有沉重感；2)食欲不振，食后腹脹；3)噯氣頻發(fā)。次要癥候：1)大便時溏時結(jié)；2)面色萎黃；3)神疲乏力；4)舌體胖、質(zhì)淡紅、苔薄白；5)脈沉緩或沉細(xì)。證型確定：具備主癥2項加次癥1項，或主證第1項加次證2項。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 納入：1)所有病例均經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院電子胃鏡確診為慢性萎縮性胃炎者；2)年齡25～60歲之間；3)神志清楚，無嚴(yán)重視覺不良、聽力障礙，認(rèn)知理解功能正常；4)知情同意。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 排除：1)伴有胃腸道潰瘍及消化系統(tǒng)其他疾病者；2)有外科指征、嚴(yán)重心腦血管疾病者；3)肝、腎功能損害者；4)妊娠及哺乳期婦女。

1.5 方法 試劑盒購自北京中山生物技術(shù)開發(fā)公司。將全部胃鏡活檢組織進行勻漿，離心10分鐘，將離心后的上清液加至鏈霉親和素與生物素化抗p53抗體預(yù)先包被的微孔板；加入抗-p53-過氧化物酶(1∶15)室溫孵育2小時，用洗滌緩沖液洗板，加入過氧化物酶底物液，室溫孵育10～20分鐘，加入TMB終止液，室溫反應(yīng)1分鐘，測定450 nm吸光度(p53蛋白含量與顯色反應(yīng)的強度成正比)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS l l.O統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用方差分析，兩兩之間比較采用q檢驗，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 p53表達 3組中Hp陽性組與Hp陰性組的p53表達比較結(jié)果見表1。

表1 3個證型組中Hp陽性組與Hp陰性組p53表達情況 例

2.2 3個證型組中p53表達情況 3個證型組中P53的表達情況見表2。

表2 3個證型組中p53表達情況

3 討論

3.1 p53與CAG的關(guān)系 CAG可由淺表性胃炎進展而來，臨床表現(xiàn)病程較長、纏綿難愈。機械性、溫度、化學(xué)性、放射性等因素長期反復(fù)損傷胃黏膜，可造成炎癥持續(xù)不愈，治療棘手，給患者的生活和工作帶來諸多不便［6-7］。1978年世界衛(wèi)生組織將慢性萎縮列為胃癌的癌前狀態(tài)，尤其是伴有腸上皮化生或不典型增生者，癌變可能性較大。

p53是重要的抑癌基因，其轉(zhuǎn)錄翻譯出的蛋白分子p53通過與凋亡相關(guān)靶基因p21、mdm2、bax、PERP作用而使有潛在癌變傾向的細(xì)胞凋亡人類p53基因位于17號染色體的短臂上(17p 13.1)，有10個內(nèi)含子和11個外顯子。有研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中p53的轉(zhuǎn)錄水平過度表達明顯，與正常胃組織相比，有顯著性差異［8］。p53基因的突變或缺失是人類腫瘤的常見事件，一般認(rèn)為p53過表達與腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及不良預(yù)后相關(guān)。

胃癌與抑癌基因的關(guān)系至今尚無明確定論，有關(guān)胃癌p53基因突變和表達的研究已有較多報導(dǎo)。1992年Rugge等首次報告了在慢性萎縮性胃炎伴異型增生的胃黏膜中存在p53蛋白陽性表達，提示p53蛋白的異常表達在胃癌前病變的晚期階段及胃癌發(fā)展階段逐漸增強，導(dǎo)致了對細(xì)胞分裂過程抑制作用的失敗［7］。

3.2 中醫(yī)對CAG的認(rèn)識 慢性萎縮性胃炎的中醫(yī)病因病機主要有：外感寒邪或脘腹受涼，導(dǎo)致寒邪內(nèi)客于胃，氣機凝滯，胃氣失和而痛；飲食不節(jié)，暴飲暴食，損傷脾胃，中焦受阻，胃氣失和而痛；憂思惱怒，情志不遂，肝失疏泄，橫逆犯胃，濕熱內(nèi)生，胃失和降而痛；素體虛弱，或勞累過度，或久病耗傷等，導(dǎo)致脾胃虛弱，耗氣傷陽或傷陰，使胃失溫養(yǎng)而痛。

上述病因病機，或單獨出現(xiàn)，或合并出現(xiàn)，但此病的發(fā)生發(fā)展都容易出現(xiàn)證候轉(zhuǎn)變的過程。發(fā)病初期多有外邪、飲食、情志所累的實證；后期則為脾胃氣虛或虛寒，胃陰不足等正氣虛弱的虛證；實則邪擾胃腑，虛則胃失濡養(yǎng)，并出現(xiàn)由實轉(zhuǎn)虛，因虛致實，如脾胃虛弱，濕郁化熱，出現(xiàn)兼瘀、挾熱等虛實夾雜之證，“因邪致虛，因虛生邪”是病機轉(zhuǎn)化的主要特點。

3.3 CAG胃黏膜p53的表達與中醫(yī)證型及Hp的關(guān)系 目前一些研究發(fā)現(xiàn)CAG的不同中醫(yī)證型p53表達水平存在一定差異，但由于研究過程及探討角度的不同，辨證分型的標(biāo)準(zhǔn)不夠統(tǒng)一，因此兩者之間的主要關(guān)聯(lián)尚無定論。有學(xué)者在動物模型方面探討脾氣虛證與CAG癌前期病變癌基因異常表達的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)脾氣虛能加重慢性萎縮性胃炎的程度，胃黏膜癌前期病變中脾氣虛證有p53基因的較強表達，說明p53基因的異常表達與胃癌前病變辨證中脾氣虛證有一定的關(guān)系［9］。也有研究發(fā)現(xiàn)在慢性萎縮性胃炎伴異型增生中p53在轉(zhuǎn)錄水平上有過度表達，并隨病變的進展逐漸增高［10］。

本研究顯示，p53陽性表達率在CAG 3個證型組間呈顯著性差異(P＜0.05)，且陽性表達率在脾胃濕熱型、脾虛氣滯型、胃陰不足型3個證型中逐漸遞增。從中醫(yī)學(xué)角度分析，3個證型是CAG發(fā)生發(fā)展的由實轉(zhuǎn)為虛實夾雜并逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘撟C的過程，說明病情由輕到重逐漸加重。由于CAG本身屬癌前病變，因此，隨著證候的轉(zhuǎn)變，病情的加重，癌變的可能性就越大。從細(xì)胞生物學(xué)角度分析，p53是重要的抑癌基因，其陽性表達提示p53蛋白的異常表達在胃癌前病變的晚期階段逐漸增強導(dǎo)致了對細(xì)胞分裂過程抑制作用的失敗，說明隨著p53陽性表達的增強，疾病的癌變程度也逐漸加重。說明CAG不同中醫(yī)證型有一定的細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)，疾病初期處于實證階段的脾胃濕熱證p53表達相對較低，癌前病變程度輕；隨著病情的發(fā)展，由虛致實的虛實夾雜階段p53表達逐漸加強，說明此病的癌前病變程度加重；疾病后期處于胃陰不足階段，p53表達相對較強，說明疾病在此階段的癌變程度最重。本研究發(fā)現(xiàn)了CAG中醫(yī)證型與p53表達之間的相關(guān)性，初步證實p53可以作為診斷CAG中醫(yī)證型的一個客觀指標(biāo)，也可為CAG癌前病變的預(yù)防提供一定的輔助診療，為深入研究其病理實質(zhì)及臨床上的合理組方、提高臨床療效提供了必要的前提條件，對于指導(dǎo)中醫(yī)藥診治胃黏膜癌前期病變具有一定的意義。

此外本研究對CAG脾胃濕熱組、脾虛氣滯組、胃陰不足組各組中Hp陽性組與Hp陰性組p53表達進行了比較，發(fā)現(xiàn)均無顯著性差異(P＞0.05)，表明CAG的病情由輕到重的發(fā)展過程與是否感染Hp沒有直接相關(guān)性，也表明了其癌變程度的輕重與Hp感染沒有直接相關(guān)性。

［1］ 劉曉燕，王四兵，程秋實，等.中醫(yī)藥治療慢性萎縮性胃炎臨床研究進展［J］.西部中醫(yī)藥，2013，26(12):147-149.

［2］ 譚尕朵.中醫(yī)治療慢性萎縮性胃炎的療效觀察［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，7(27):79-80.

［3］ 杜明，張麗娟，張錦明，等.中醫(yī)藥治療慢性萎縮性胃炎近況［J］.河北中醫(yī)，2013，35(3):459-461.

［4］ 中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會消化系統(tǒng)疾病專業(yè)委員會.慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案(草案)［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，25(2)：172-175.

［5］ 鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2003：5.

［6］ 孟憲鏞，黃介飛，楊大明.實用消化病診療學(xué)［M］.上海：世界圖書出版公司，2001：1.

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The Correlated Research on the TCM Pattern and the Expression ofGastric Mucosa p53 of CAG Patients

MA Yanjun1,LIN Shouning2,TANG Shaobo2
1 GuangxiUniversity of Chinese Medicine,Nanning 530001,China; 2 Ruikang Hospital Affiliated to GuangxiUniversity of Chinese Medicine

Objective:To observe the expression levelof gastricmucosa p53 of different TCM patterns commonly seen from chronic atrophic gastritis(CAG)patients in clinic to investigatewhether therewere differences in the patterns from the perspective of cytobiology and whether the differences could be one of the objective indexes for classifying the CAG patterns.Methods:According to the classification standard,90 CAG patientswere classified into different TCM patterns,amongwhich 3 typesof patternsw ithmore cases(overall71 cases)were selected to be random ly divided into 3 groups.Gastricmucosa tissuesw ith pathological changeswere collected undergastroscope, Hp infectious conditionswere recorded and at the same time the expression levels of gastricmucosa p53 were detected.Results:Among the three groups,the positive expression levelof p53 in the comparison of Hp positive group and Hp negative group had no significantdifference(P＞0.05);the positive expression rates of p53 in three groups w ith three types of patterns had significant difference (P＜0.05)and the rates orderly increased in the pattern of dampness-heat accumulation in spleen and stomach,the spleen-deficiency and Qi-stagnation pattern aswell as the pattern of spleen-Yin deficiency.Results:The expression levels of p53 detected can be used as the indexes for the classification of CAG in TCM to assist the clinicaldiagnosisand treatment.

CAG;TCM patterns;p53

R242

A

1004-6852(2015)01-0060-03

2014-02-25

廣西中醫(yī)藥大學(xué)高層次人才科研啟動基金課題(編號G2006055)。

馬艷君(1979—)，女，碩士學(xué)位，講師。研究方向：中醫(yī)診斷學(xué)辨證規(guī)范化。