5種不同種植密度蘄艾中桉油精的含量比較

朱祥松，王偉華（1.鄂州市食品藥品監(jiān)督檢驗所，湖北 鄂州 436000；.湖北李時珍醫(yī)藥集團有限公司，湖北 蘄春 435300）

艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi Levl.et Vant.的干燥葉，具有溫經(jīng)止血、散寒止痛、外用祛濕止癢的功能[1]。艾在我國各地均有分布?！侗静菥V目》中記載，艾葉本草“自成化以來則以蘄州者為勝，用充方物，天下重之，謂之蘄艾?！爆F(xiàn)代研究證明，蘄艾與普通艾葉相比，在揮發(fā)油、鞣酸、燃燒熱值與醇溶性浸出物、微量元素含量方面均有明顯優(yōu)勢[2]，彰顯了蘄艾藥材的道地性。揮發(fā)油為艾葉的重要化學(xué)成分，具有止咳、平喘、祛痰、消炎作用[3]。桉油精是蘄艾揮發(fā)油中含量較高的成分。因此，筆者以桉油精含量為指標(biāo)，利用氣相色譜（GC）法考察了蘄春縣擬建蘄艾良好農(nóng)業(yè)規(guī)范（Good Agricultural Practice，簡稱GAP）基地中不同種植密度對蘄艾桉油精含量的影響，以為規(guī)范蘄艾種植，保證蘄艾藥材質(zhì)量的穩(wěn)定、可控提供參考。

1 材料

6890N型GC儀，包括氫火焰離子化檢測器（美國Agilent公司）；SGD-300型氮氫空發(fā)生器（北京東方精華苑科技有限公司）；BS210S型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

桉油精對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:110788-201004）；5種不同種植密度的蘄艾15批（在同一GAP試驗基地，以分株繁殖方式分別按行距10 cm×20 cm、20 cm×30 cm、30 cm×40 cm、40 cm×50 cm、50 cm×60 cm種植五塊試驗區(qū)，進行相同的栽培管理，于2013年6月12日端午節(jié)中午，每一塊試驗區(qū)均勻采樣，陰干密封保存），經(jīng)鄂州市食品藥品監(jiān)督檢驗所肖文芳主任中藥師鑒定為菊科植物艾A.argyi Levl.et Vant.的干燥葉；正己烷為色譜純，環(huán)己酮為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.32mm，0.25 μm）；起始溫度:50℃，以4℃/min升至75℃，保持15min，以10℃/min升至220℃，保持3min；進樣口溫度:240℃；檢測器溫度:250℃；載氣:氮氣；流速:0.6ml/min；分流比:10∶1；進樣量:1μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液 稱取環(huán)己酮適量，加正己烷制成每1ml含2.84mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2 對照品溶液 稱取桉油精對照品適量，加正己烷溶解制成質(zhì)量濃度為2.102mg/ml的對照品貯備液；精密量取對照品貯備液2ml及內(nèi)標(biāo)溶液1ml，置于5ml量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液 將艾葉剪碎，精密稱取5 g，按2010年版《中國藥典》（一部）附錄ⅩD揮發(fā)油測定法連接裝置，精密吸取正己烷2ml，置于揮發(fā)油提取管中，加熱回流4 h，放冷，分取正己烷提取液置10ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液 精密量取內(nèi)標(biāo)溶液1ml，置于5ml量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

精密吸取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各1μl，注入GC儀中，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果，供試品溶液在與對照品溶液相同保留時間處有相應(yīng)吸收峰，桉油精及內(nèi)標(biāo)物峰分離度＞1.5，陰性樣品無干擾；理論板數(shù)按桉油精峰計＞3000。色譜見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.桉油精；2.環(huán)己酮Fig 1 GC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative sample；1.eucalyptol；2.cyclohexanone

2.4 線性關(guān)系考察

分別量取對照品貯備液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，置于5ml量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0ml，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，制成不同濃度的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別進樣1μl，記錄峰面積。以對照品質(zhì)量濃度（x，mg/ml）為橫坐標(biāo)、對照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值（y）為縱坐標(biāo)進行回歸分析，得回歸方程為y＝3.9725x+0.0121（r＝0.9999）。結(jié)果表明，桉油精質(zhì)量濃度在0.4204～1.2612mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液適量，連續(xù)重復(fù)進樣6次，每次1μl，計算對照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值。結(jié)果，RSD為0.07%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品（種植密度為30 cm×40 cm）溶液適量，室溫放置，分別于放置0、2、4、6、8、12、24h時進樣1μl，依“2.1”項下方法測定，計算桉油精與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值。結(jié)果，RSD為0.55%（n＝7），表明供試品溶液在室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取種植密度為30 cm×40 cm的蘄艾樣品6份，按“2.2.3”項下方法制備成供試品溶液，依“2.1”項下方法測定，計算桉油精與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值。結(jié)果，RSD為0.92%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取種植密度為30 cm×40 cm的蘄艾樣品6份，每份約2.5 g，分別精密加入“2.2.2”項下對照品貯備液2ml，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，分別吸取供試品溶液和對照品溶液1μl，依“2.1”項下方法測定桉油精含量，計算加樣回收率，結(jié)果詳見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1 Result of recovery tests（n＝6）

2.9 樣品含量測定

取不同種植密度的蘄艾樣品各適量，平行3份，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，依“2.1”項下方法測定，計算每種種植密度蘄艾的桉油精平均含量，結(jié)果詳見表2。

表2 不同種植密度蘄艾中桉油精含量的測定結(jié)果Tab 2 Result of content determination of eucalyptol in A.argyi of different planting densities

3 討論

艾葉藥理作用及應(yīng)用較廣泛[4-5]，而艾蒿的近緣種較多，藥材來源復(fù)雜，被作為艾葉使用的混偽品較多[6]。蘄艾為艾葉的優(yōu)質(zhì)道地藥材，其整體質(zhì)量穩(wěn)定[7]。目前，關(guān)于不同產(chǎn)地、不同采集期、不同年份等影響因素下艾葉化學(xué)成分的比較分析有文獻報道[8-9]，而尚未見對于蘄艾GAP基地中種植密度對蘄艾桉油精含量影響的報道。故本文通過考查不同種植密度下蘄艾中桉油精的含量變化，旨在為規(guī)范種植優(yōu)質(zhì)蘄艾藥材提供參考。

3.1 樣品制備方法的選擇

蘄艾中揮發(fā)油含量在端午節(jié)前后若干天達(dá)到最高峰[11]，因此該試驗選擇采樣時間為端午節(jié)。本研究采用2010年版《中國藥典》（一部）附錄[1]中揮發(fā)油測定法中裝置提取蘄艾揮發(fā)油，比較了1、2、3、4、5、6h的提取效果，結(jié)果4 h即可提取完全，故選擇提取時間為4 h。蘄艾揮發(fā)油中成分復(fù)雜，色譜峰多不易分離，本文采用了程序升溫的方法，在此色譜條件下分離效果可滿足系統(tǒng)適用性要求。

3.2 最佳種植密度的選擇

本文的試驗結(jié)果表明，在蘄春擬建蘄艾GAP基地中，相同的栽培管理措施下，蘄艾種植密度在行距30 cm×40 cm以上時，桉油精的含量最高；分析其原因，可能與行距過小影響植株光合作用及生長環(huán)境的養(yǎng)分吸收有關(guān)[10]?？紤]到種植基地單位面積蘄艾產(chǎn)量的因素，筆者建議蘄艾最佳種植密度為行距30 cm×40 cm。

綜上所述，本方法操作簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重復(fù)性良好，可用于蘄艾中桉油精含量的測定。通過考查不同種植密度下蘄艾中桉油精的含量變化，可為規(guī)范種植優(yōu)質(zhì)蘄艾藥材提供參考。

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