大蕁麻根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及不同采收期的考察

邱洪，代兵，潘永雪（.解放軍第44醫(yī)院藥劑科，貴陽(yáng) 550009；.解放軍第73醫(yī)院藥械科，新疆 庫(kù)爾勒 84000）

大蕁麻根為蕁麻科植物大蝎子草Girardinia suborbiculata C.J.Chen sub sp.triloba.的新鮮或干燥根。目前對(duì)大蝎子草的研究主要集中于其植物生態(tài)學(xué)[1]、藥效學(xué)及臨床等方面[2-7]，對(duì)其質(zhì)量的研究?jī)?nèi)容較少。大蝎子草含有總黃酮、東莨菪內(nèi)酯、芹菜素等[8-9]。陶玲等對(duì)大蝎子草進(jìn)行了全草的研究，在草根中分離鑒定出32個(gè)成分；草莖中分離鑒定出31個(gè)成分；草葉中分離鑒定出32個(gè)成分[10-13]。為了提高大蕁麻根質(zhì)量的可控性，筆者用薄層色譜（TLC）和浸出物的檢測(cè)方法對(duì)不同時(shí)期采收的大蕁麻根進(jìn)行了相關(guān)對(duì)比研究。

1 材料

1.1 儀器

QY-20型三用紫外分析儀（上海澳瑞德精密儀器有限公司）；AUW-220D型電子天平（日本島津公司）；CH-250型超聲波清洗器（北京創(chuàng)新德超聲電子研究所）；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）；101A-1型電熱恒溫干燥箱（上海浦鴻儀器廠）；TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 試劑

東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):110768-200504）；石油醚、甲酸、甲醇、磷酸、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和環(huán)己烷均為分析純，水為娃哈哈純化水。

1.3 藥材

大蕁麻根采集于貴陽(yáng)藥用植物園、貴州省龍里縣龍山鎮(zhèn)貴州同濟(jì)堂中藥材種植公司基地、貴陽(yáng)烏當(dāng)區(qū)，經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院何順志教授鑒定為蕁麻科蝎子草屬植物大蝎子草Girardinia suborbiculata C.J.Chen sub sp.triloba.的根。

2 方法與結(jié)果

2.1 大蕁麻根中東莨菪內(nèi)酯的TLC鑒別試驗(yàn)

分別取3批樣品粉末約4 g，置于索氏提取器中，加二氯甲烷加熱回流提取3 h，提取液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml溶解，作為供試品溶液。取東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按TLC法[14]試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，詳見圖1。經(jīng)3批樣品驗(yàn)證結(jié)果表明，此方法專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，故將此TLC鑒別方法收入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案正文。

2.2 浸出物測(cè)定

2.2.1 水溶性浸出物測(cè)定 測(cè)定用的供試品需粉碎，使能通過二號(hào)篩，并混合均勻。（1）冷浸法。取供試品約4 g，精密稱定，置于250ml錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6h內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18h，用干燥濾器迅速濾過；精密量取續(xù)濾液20ml，置于干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定質(zhì)量。以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量，結(jié)果詳見表1。（2）熱浸法。取供試品約2 g，精密稱定，置于100ml錐形瓶中，精密加水50ml，塞緊，稱定質(zhì)量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用干燥濾器濾過；精密量取濾液25ml，置于干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定質(zhì)量，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量，結(jié)果詳見表1。

2.2.2 醇溶性浸出物測(cè)定 按水溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定，以乙醇作溶劑，結(jié)果詳見表2。（1）冷浸法。取供試品約4 g，精密稱定，置于250ml錐形瓶中，精密加乙醇100ml，密塞，按“2.2.1”項(xiàng)下冷浸法試驗(yàn)，結(jié)果詳見表2。（2）熱浸法。取供試品約2 g，精密稱定，置于100ml錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，塞緊，按“2.2.1”項(xiàng)下熱浸法試驗(yàn)，結(jié)果詳見表2。

圖1 3批大蕁麻根中東莨菪內(nèi)酯薄層色譜圖1、2.貴陽(yáng)藥用植物園大蕁麻根；3、4.貴州省龍里縣龍山鎮(zhèn)貴州同濟(jì)堂中藥材種植公司基地大蕁麻根；5、6.貴陽(yáng)烏當(dāng)區(qū)大蕁麻根；7～9.東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品Fig 1 TLC diagrams of scopoletin in 3 batches of the root of U.dioica1，2.the root of U.dioica in Guiyang medicinal botanical garden；3，4.the root of U.dioica in Guizhou Tongjitang of Chinese herbal medicines planting base of Longshan Town，Longli County，Guizhou Province；5，6.the root of U.dioica in Wudang District，Guiyang City；7-9，reference substance of scopoletin

表1 3批大蕁麻根的水溶性浸出物含量（%）Tab 1 Contents of water-soluble extracts in 3 batches of theroot of U.dioica（%）

表2 3批大蕁麻根的醇溶性浸出物含量（%）Tab 2 Contents of alcohol-soluble extracts in 3 batches of the root of U.dioica（%）

比較表1、表2的測(cè)定結(jié)果，大蕁麻根藥材水溶性浸出物比醇溶性浸出物含量高，但參照相關(guān)文獻(xiàn)資料，大蕁麻根藥材中主要含有黃酮類、香豆素類等脂溶性成分，多數(shù)類似成分的水溶性差，易溶于甲醇或乙醇，所以選擇用醇溶性浸出物測(cè)定大蕁麻根藥材比較合理；而醇溶性浸出物中熱浸法測(cè)定結(jié)果比冷浸法含量高。因此，浸出物選擇用醇溶性熱浸法。

2.3 大蕁麻根采收期的考察

2.3.1 不同季節(jié)藥材的TLC鑒別對(duì)比試驗(yàn) 采收初春、夏季、初秋、立冬四個(gè)季節(jié)的樣品各一批進(jìn)行驗(yàn)證。分別取藥材粉末約4 g，按“2.1”項(xiàng)下方法試驗(yàn)。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，詳見圖2。經(jīng)4批樣品驗(yàn)證結(jié)果表明，初春和秋末采收的大蕁麻根含的東莨菪內(nèi)酯高，夏季和初秋采收的大蕁麻根含東莨菪內(nèi)酯較低，故將秋末至初春采挖作為大蕁麻根采收的最佳時(shí)節(jié)。

圖2 不同季節(jié)藥材TLC圖1.初春；2.夏季；3.東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品；4.初秋；5.立冬F(xiàn)ig 2 TLC identifications of samples in different seasons1.early spring；2.summer；3.reference substance of scopoletin；4.early autumn；5.beginning of winter

2.3.2 不同季節(jié)藥材的浸出物對(duì)比試驗(yàn) 采收初春、夏季、初秋、立冬四個(gè)季節(jié)的樣品（采自貴陽(yáng)藥用植物園）各一批，按浸出物測(cè)定法[14]項(xiàng)下方法測(cè)定。分別取供試品約2 g，精密稱定，置于100ml錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，塞緊，按“2.2.2”項(xiàng)下熱浸法試驗(yàn)，結(jié)果詳見表3。

表3 4批藥材醇溶性浸出物含量（%）Tab 3 Contents of 4 batches of alcohol soluble extracts（%）

表3結(jié)果表明，初春和立冬采收的大蕁麻根浸出物含量高，夏季和初秋采收的大蕁麻根浸出物含量較低，故將秋末至初春采挖作為大蕁麻根采收的最佳時(shí)節(jié)，即頭年11月至翌年3月間為適宜采挖期。結(jié)合實(shí)際情況，擬定本品的采收季節(jié)為秋末至初春。

3 討論

3.1 展開劑的選擇

筆者曾采用環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）、甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（5∶1∶1∶0.3，V/V/V/V）、三氯甲烷-甲醇-水（40∶10∶1，V/V/V）、石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（7∶3，V/V）、環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）為展開劑，結(jié)果只有環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）展開的熒光斑點(diǎn)明顯，干擾小，其他方法分離效果均不理想。

3.2 供試品溶液制備方法的選擇

提取溶劑分別采用70%乙醇、30%乙醇、三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇等溶劑對(duì)樣品進(jìn)行加熱回流提取。結(jié)果，二氯甲烷熒光斑點(diǎn)比較明顯，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，干擾小。

3.3 提取時(shí)間的選擇

取樣品4份，分別加入二氯甲烷回流提取1、2、3、4 h。結(jié)果，提取3 h的樣品與提取4 h的含量相近，故選用提取3 h為提取時(shí)間。

3.4 含量測(cè)定方法的選擇

曾采用高效液相色譜法測(cè)定大蕁麻根中的東莨菪內(nèi)酯、芹菜素、齊墩果酸和熊果酸等，但含量太低，以此作為指標(biāo)成分意義不大。

綜上所述，本試驗(yàn)所建立的用TLC定性鑒別東莨菪內(nèi)酯的方法，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，干擾小。用浸出物方法測(cè)定含量較為理想。不同采收期的考察有利于有效地控制大蕁麻根藥材的質(zhì)量。

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