南京市2011-2014年度流感流行特征的分析*

王燕 石利民 何敏 王璇 喬夢(mèng)凱

流行性感冒簡(jiǎn)稱流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。流感病毒根據(jù)核蛋白（NP）和膜蛋白（MP）抗原特性和基因特征，分為甲（A）、乙（B）、丙（C）3型，病毒的分類反映其流行特征及對(duì)人類的危害程度，甲型流感病毒常引起世界性的大流行，乙型常引起局部暴發(fā)，丙型主要以散在形式出現(xiàn)[1]。流感因其傳染性、波及面廣，蔓延迅速，是第一個(gè)實(shí)行全球監(jiān)測(cè)性的傳染病[2]。加強(qiáng)流感監(jiān)測(cè)及時(shí)發(fā)現(xiàn)流感病毒優(yōu)勢(shì)毒株的變化及病毒的變異情況，為及時(shí)掌握流感的活動(dòng)情況，明確流行株并及早發(fā)現(xiàn)變異株，為季節(jié)性流感的流行及流感大流行的預(yù)警提供參考依據(jù)，是流感防控和流感大流行應(yīng)對(duì)的一項(xiàng)重要措施，還能夠?yàn)橥扑]流感疫苗組分提供科學(xué)依據(jù)[3]。

本文通過分析南京2011-2014年流感監(jiān)測(cè)資料，了解流感流行趨勢(shì)及其病毒株變化特點(diǎn)，為本地區(qū)的流行性感冒防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院及監(jiān)測(cè)對(duì)象為南京市兒童醫(yī)院、南京市鼓樓醫(yī)院及南京市第一人民醫(yī)院，其均為本市國(guó)家級(jí)流感監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院。哨點(diǎn)醫(yī)院對(duì)發(fā)熱38 ℃以上，伴咳嗽或咽痛之一，未服用過抗病毒藥物，發(fā)病3 d內(nèi)患者采集鼻咽拭子，48 h內(nèi)送至流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。

1.2 核酸提取 取200 μL鼻咽拭子標(biāo)本加入臺(tái)塑生醫(yī)全自動(dòng)提取試劑盒，按照臺(tái)塑生醫(yī)全自動(dòng)核酸抽提程序?qū)?biāo)本進(jìn)行RNA核酸提取。

1.3 PCR擴(kuò)增 按照試劑盒說明配置甲型流感病毒通用型、乙型流感病毒Victoria 系、乙型流感病毒Yamagata系、甲型流感病毒季節(jié)性H1、甲型流感病毒季節(jié)性H3、甲型流感病毒H1N1 PCR 擴(kuò)增體系，按照試劑說明設(shè)置擴(kuò)增條件，用ABI Prism7500型熒光定量PCR儀擴(kuò)增反應(yīng)。結(jié)果判斷和分析按照試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 病毒分離培養(yǎng)與鑒定 對(duì)流感病毒核酸檢測(cè)陽性的標(biāo)本進(jìn)行MDCK 細(xì)胞分離培養(yǎng)，MDCK細(xì)胞由國(guó)家流感中心提供。細(xì)胞培養(yǎng)收獲液用1%人紅細(xì)胞進(jìn)行紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，HA效價(jià)大于等于1∶16的陽性分離物采用流感病毒標(biāo)準(zhǔn)抗血清進(jìn)行血凝試驗(yàn)鑒定毒株型別，并提取核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用PEMS 3.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流感樣病例核酸檢測(cè)結(jié)果 2011-2014年本中心4個(gè)流感監(jiān)測(cè)年度共采集流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本9823例，報(bào)告流行性感冒病例1277份，陽性率13.00%。其中2011年共采集流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本1714份，陽性數(shù)195份，陽性率11.38%；2012年采集標(biāo)本1623份，報(bào)告陽性數(shù)病例332份，陽性率20.46%；2013年采集標(biāo)本3034份，報(bào)告陽性數(shù)211份，陽性率6.95%。2014年采集標(biāo)本3452份，報(bào)告陽性數(shù)539份，陽性率15.61%。其中2012年陽性率最高，為20.46%。2011年以B型和A型H1N1為主，2012年A型H3N2和B型為主要流行型別，2013年A型H3N2是優(yōu)勢(shì)株，有少量B型和混合感染病例，2014年A型H1N1和H3N2，以及B型的By均出現(xiàn)較多病例，見表1。

表1 2011-2014年度南京市流感病原學(xué)陽性檢出率及型別

2.2 季節(jié)流行特征 2011-2012流感樣病例數(shù)相當(dāng)，2013年4月-2014年哨點(diǎn)醫(yī)院采集到的流感樣病例數(shù)顯著增加（圖1）。2011-2014流感監(jiān)測(cè)年度流感病毒毒株以H1N1型、H3N2型、B型相互交替、混合流行為主。2011年監(jiān)測(cè)年度起始均以H1N1型流感為主，在2011年3月后B型逐漸取代H1N1型成為優(yōu)勢(shì)株，持續(xù)至年末。2012年始仍以B型為流行株，至3-5月出現(xiàn)B型和H3N2混合流行，從5月至年末均為H3N2型流行。次年出現(xiàn)B型、H1N1和H3N2混合流行狀態(tài)，至2014年夏季后又轉(zhuǎn)為H3N2為優(yōu)勢(shì)株（圖2）。

圖1 2011-2014年各月份流感樣病例監(jiān)測(cè)數(shù)

2.3 性別構(gòu)成 2011-2014年4個(gè)流感監(jiān)測(cè)年度共監(jiān)測(cè)流行性感冒病例男性5095例，女性4728例，男女比例1.08∶1。其中2011年男性853例、女性861例，2012年男性867例、女性756例，2013年男性1569例、女性1465例，2014年男性1806例、女性1646例。流感咽拭子陽性患者共1277例，其中男性686例，陽性率13.46%，女性591例，陽性率12.50%，男女比例 1.15∶1，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=1.72，P>0.05）。

圖2 2011-2014年各月份不同分型流感病例數(shù)

2.4 各年齡組流感病毒監(jiān)測(cè) 根據(jù)年齡的不同，流感樣病例被分成0歲~、5歲~、15歲~、25歲~以及≥60歲5個(gè)組，25歲~年齡組流感樣病例數(shù)最多，占總流感樣病例數(shù)的37.01%，其中2011年占36.64%，2012年占37.77%，2013年占 36.42%，2014年占37.35%。60歲~流感樣病例數(shù)最少，占總流感樣病例數(shù)的7.50%，其中2011年占5.95%，2012年 占6.47%，2013年 占8.24%，2014年 占8.09%。各組流感病毒的陽性分離率分別為2.84%、5.70%、2.76%、3.19%、4.21%。

2.5 MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)結(jié)果 將PCR陽性的標(biāo)本接種于MDCK 細(xì)胞，進(jìn)行流感病毒分離培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)收獲液用1%人紅細(xì)胞進(jìn)行紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，HA效價(jià)大于等于1∶16的陽性分離物用流感病毒標(biāo)準(zhǔn)抗血清進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)鑒定毒株型別，并提取核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增。2011年共分離鑒定陽性毒株33株，分別為H1N 11株、H3N 23株、 Bv 10株、 By 19株。2012共分離鑒定陽性毒株168株，分別為H3N2 88株、 Bv 5株、By 75株。2013年共分離鑒定陽性毒株45株，分別為H1N 14株、 H3N2 40株、 By 1株。2014共分離鑒定陽性毒株46株，分別為H3N 28株、 Bv 18株。

3 討論

流感病毒的活動(dòng)強(qiáng)度與季節(jié)關(guān)系密切，北方地區(qū)流感流行高峰主要在冬季，南方四季都有發(fā)生，夏季和冬季達(dá)到高峰。2011-2014年流感樣病例監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示， 南京市流感流行主要有以下特點(diǎn)：引起南京市2011年流感毒株的流行主要有新甲H1N1及B型，隨著時(shí)間變遷呈現(xiàn)不同的優(yōu)勢(shì)毒株趨勢(shì)，1月份，主要流行新甲H1N1，2月份B型和H1N1混合流行，5-12月流行的是B型；2012年優(yōu)勢(shì)株的主要是H3N2及B型，其中3-5月份，主要B和H3N2混合流行，6-11月份，優(yōu)勢(shì)株是H3N2；2013年出現(xiàn)H1N1、H3N2及B型混合流行狀態(tài)，不同時(shí)期呈現(xiàn)不同的優(yōu)勢(shì)毒株趨勢(shì)，直至2014年8月H3N2再次成為唯一的流行株，2014年年末又出現(xiàn)H3N2及B型混合流行狀態(tài)。圖2結(jié)果顯示流感病毒每年基本有2個(gè)流行高峰，即冬春季和夏季高峰，與文獻(xiàn)[4]報(bào)道我國(guó)南方地區(qū)流感全年流行情況相符合。一般來說，夏季主要為A型流行，2012年度和2014年表現(xiàn)尤為明顯，與文獻(xiàn)[5]報(bào)道在雨水豐沛的夏季適合甲型流感病毒的存活和傳播相符合。從病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果來看，南京市各年份流行的毒株型別及其流行的時(shí)間分布江蘇省基本一致[6-9]。

流感病毒常表現(xiàn)為交替或混合流行，2011年度從流感樣病例人群中同時(shí)分離到A型和B型流感病毒，有A型H1N1、H3N2及B型，流行優(yōu)勢(shì)毒株為B 型和H1N1。2012-2013年度從流感樣病例人群中也同時(shí)分離到A型和B型流感病毒，2012年的優(yōu)勢(shì)株為H3N2及B型，2013年則主要為H3N2。自2009年出現(xiàn)H1N1大流行，至2012-2013年年頭甲型H1N1毒株逐漸消失，分析原因可能與接種甲流疫苗及患者體內(nèi)產(chǎn)生甲型H1N1流感抗體有關(guān)。2014年出現(xiàn)H1N1、H3N2及B（Yamagata系）混合流行特征，3型均出現(xiàn)較多病例。2011年度有13例A型陽性未能分出亞型病例，原因可能為弱毒株或其他本實(shí)驗(yàn)室不具備檢測(cè)能力的亞型。2013-2014年度各出現(xiàn)7例混合感染病例，均為A型亞型混合感染病例，過去人群中流感病毒各亞型混合感染的報(bào)道較少，流感病毒的混合感染現(xiàn)象未引起足夠關(guān)注，而流感病毒尤其是甲型流感病毒易發(fā)生抗原變異，兩種或兩種以上甲型流感病毒同時(shí)感染同一細(xì)胞時(shí)易發(fā)生基因重組，形成新的亞型，由于人群缺乏免疫力引起流行或大流行，故近年來有較多關(guān)于流感病毒混合感染的研究[10-13]。

2011-2014年流感樣病例男女采樣比例相當(dāng)，除2011年女性略高于男性外，其他幾個(gè)年份均為男性采樣數(shù)高于女性。男女陽性標(biāo)本比例1.15∶1，兩者陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

本文對(duì)5個(gè)年齡段的流感樣病例數(shù)以及陽性數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示25歲~年齡段流感樣病例數(shù)最高，其次為0歲~年齡段，≥60歲年齡段病例數(shù)最低。25歲~年齡段流感樣病例數(shù)最高可能原因?yàn)槠浠顒?dòng)范圍廣，流感病毒流行期間有較多時(shí)間處于人群聚集的公共場(chǎng)所，出現(xiàn)癥狀后及時(shí)就診比例高。0歲~年齡段由于免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，體內(nèi)無抗體或抗體水平低以及出現(xiàn)癥狀后較高的就診率等原因，流感樣病例數(shù)居年齡組第2位。

流感病毒分離陽性率與樣本處理方法、 分離方法、細(xì)胞對(duì)病毒的敏感性、細(xì)胞狀態(tài)及標(biāo)本采集、保存及運(yùn)送各個(gè)環(huán)節(jié)密切相關(guān)，所以確保從標(biāo)本采集到病毒分離鑒定的每一個(gè)環(huán)節(jié)符合相關(guān)要求是分離鑒定成功的關(guān)鍵。在確保操作規(guī)范、培養(yǎng)條件良好以及細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和敏感性良好的前提下，病毒的分離效率與流感流行的強(qiáng)度相一致，流行強(qiáng)度增加時(shí)，毒株的分離率就增高，反之分離率則降低[14]。2011年本實(shí)驗(yàn)室共分離鑒定陽性毒株33株，分離率2.07%；2012共分離鑒定陽性毒株168株，分離率31.23%；2013年共分離鑒定陽性毒株45株，分離率10.67%；2014共分離鑒定陽性毒株46株，分離率8.53%。分別與當(dāng)年采樣陽性率和流行強(qiáng)度基本一致。

流感最有效的預(yù)防途徑就是接種疫苗，而流感抗原基因變異幅度大，由于人群缺乏對(duì)新病毒變異株的免疫力，從而引起流感流行，因此每年針對(duì)流感病毒都要接種新的流感疫苗，以獲得有效保護(hù)[15]，加強(qiáng)流感監(jiān)測(cè)、及早發(fā)現(xiàn)分析流感流行毒株變化，及時(shí)接種有針對(duì)性的流感疫苗是降低季節(jié)性流感發(fā)病率重要措施之一，對(duì)流感疫情的防控具有重要意義。

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