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    代謝綜合征患者血糖、血脂水平與HDL亞類組成的關(guān)系*

    2015-05-16 02:55:16仇夢霞龍石銀陳志軍陳浩陳武哲朱艷麻燕妮張彩平田英
    中國病理生理雜志 2015年2期
    關(guān)鍵詞:亞類載脂蛋白脂蛋白

    仇夢霞,龍石銀,陳志軍,陳浩,陳武哲,朱艷,麻燕妮,張彩平,田英

    (南華大學(xué)生物技術(shù)系,湖南 衡陽 421001)

    代謝綜合征患者血糖、血脂水平與HDL亞類組成的關(guān)系*

    仇夢霞,龍石銀,陳志軍,陳浩,陳武哲,朱艷,麻燕妮,張彩平,田英△

    (南華大學(xué)生物技術(shù)系,湖南 衡陽 421001)

    目的:探討代謝綜合征(MS)患者血糖、血脂對血漿高密度脂蛋白(HDL)亞類組成及含量的影響。方法:收集MS患者組220例和對照組86例的血漿,采用全自動生化分析儀測定血脂及載脂蛋白的濃度,雙向電泳-免疫印記檢測法測定受試者HDL亞類的相對含量。結(jié)果:(1)與對照組相比,MS患者空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、LDL-C/高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白B100(apoB100)、apoB100/載脂蛋白A-I(apoA-I)、收縮壓(SBP)、體重指數(shù)(BMI)與HDL3b含量均增加(P<0.05),而HDLC、apoA-I、preβ2-HDL、HDL2a和HDL2b含量均減少(P<0.01)。(2)隨著血糖濃度的升高,血漿中HDL2a與HDL2b含量減少(P<0.05),preβ1-HDL增加(P<0.05)。(3)MS患者隨著HDL-C含量的降低,HDL2b含量減少(P<0.01),preβ1-HDL增加(P<0.01)。(4)MS患者隨著TG水平的增加和HDL-C水平的降低,血漿中小顆粒的preβ1-HDL有增加的趨勢,而大顆粒的HDL2b有減少趨勢,HDL成熟代謝受阻。(5)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)FPG與大顆粒的HDL2a和HDL2b呈負相關(guān);HDL-C與HDL2b呈正相關(guān),而與preβ1-HDL呈負相關(guān);TG含量與preβ1-HDL、HDL3b呈正相關(guān)。結(jié)論:MS患者隨著血糖、TG含量的增加及HDL-C含量的減少,大顆粒的HDL2a和HDL2b含量減少,而小顆粒的preβ1-HDL含量增加,HDL顆粒有變小的趨勢,HDL顆粒的成熟代謝受阻。

    血糖;甘油三酯;高密度脂蛋白膽固醇;高密度脂蛋白亞類;代謝綜合征

    代謝綜合征(metabolic syndrome,MS)是以中心肥胖或超重、致動脈粥樣硬化性血脂紊亂、高血壓、糖尿病或糖耐量異常以及胰島素抵抗(insulin resistance,IR)為主要臨床表現(xiàn)的一組癥候群[1],與心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)和2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。MS的危險因子非常多,而血脂紊亂成為目前被國際所公認的MS主要危險因子[1]。高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)是顆粒大小、組成及功能極不均一的一類脂蛋白。采用雙相電泳-免疫印跡法可按HDL顆粒直徑大小分為小顆粒的preβ1-HDL、preβ2-HDL、HDL3c、HDL3b、HDL3a和大顆粒的HDL2a及HDL2b共7個亞類[3]。HDL主要通過膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(reverse cholesterol transport,RCT)而發(fā)揮抗動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)功能[4]。RCT過程是HDL由小顆粒轉(zhuǎn)變成大顆粒的成熟代謝過程,即preβ-HDL→HDL3→HDL2。在此過程中,HDL各亞類之間相互轉(zhuǎn)化,從而達到動態(tài)平衡[5]。血漿中HDL亞類組成和含量可作為評價AS和冠心病(coronary heart disease,CHD)危險性及嚴重程度的重要指標之一[6]。因此本研究旨在分析以血糖、血脂異常為主的代謝綜合征患者HDL亞類組成及含量變化特征,為探討MS的發(fā)病機制提供依據(jù)。

    材料和方法

    1 研究對象

    根據(jù)國際糖尿病學(xué)會對中國漢族人MS的定義標準[1],具備以下3項或更多入選為MS患者組: (1)中心性肥胖:男性腰圍>90 cm,女性腰圍>85 cm;(2)甘油三酯(triglyceride,TG)水平升高:TG≥1.7 mmol/L;(3)高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)降低:HDL-C<1.04 mmol/L;(4)血壓(blood pressure,BP)異常:BP≥130/85 mmHg;(5)空腹血糖(fasting plasma glucose,F(xiàn)PG)升高:FPG≥6.1 mmol/L,或糖負荷后2 h血糖≥7.8 mmol/L,或有糖尿病史。本研究收集在南華大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的MS患者血樣220例,其中男性101例,女性109例,并排除有膽、腎、肝、內(nèi)分泌疾病。對照組血樣86例,其中男性45例,女性41例,對照組均FPG<6.1 mmol/L,TG<1.7 mmol/L且HDL-C≥1.04 mmol/L。經(jīng)詢問病史及體檢,排除心、肺、肝、腎及其它脂質(zhì)代謝相關(guān)的疾病。2組受試者年齡、性別比、既往史、吸煙及飲酒情況無統(tǒng)計學(xué)意義。本研究獲得了南華大學(xué)倫理委員會批準,嚴格遵守中國臨床實驗注冊中心相關(guān)倫理學(xué)準則,與所有受試者簽訂知情同意書。

    2 血漿樣品

    受試者空腹12~14 h,取EDTA抗凝血,離心分離血漿,并將血漿樣品分為2份,1份用于血脂及載脂蛋白的測定;另外1份-80℃凍存,用于HDL亞類檢測。

    3 血糖、血脂及載脂蛋白的測定

    FPG、血漿總膽固醇(total cholesterol,TC)、HDLC、TG、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、載脂蛋白A-I(apolipoprotein AI,apoA-I)及載脂蛋白B100(apolipoprotein B100,apoB100)含量,采用Olympus AU 400全自動生化分析儀測定。

    4 HDL亞類免疫印跡實驗

    HDL亞類采用雙向電泳-免疫印跡檢測法[3]進行測定,將樣品中apoA-I含量和所測的HDL各亞類相對百分含量相乘即得到HDL亞類含量。

    5 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示,兩組樣本之間采用獨立樣本t檢驗,多組間差異采用單因素方差分析(one-way ANOVA),2個變量間相關(guān)關(guān)系采用偏相關(guān)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié)果

    1 MS患者血脂、載脂蛋白及HDL亞類的含量

    MS組總?cè)巳号c對照組總?cè)巳合啾?,收縮壓(systolic blood pressure,SBP)、體重指數(shù)(body mass index,BMI)、FPG、TC、TG、LDL-C、apoB100、HDL3b含量、LDLC/HDL-C和apoB100/apoA-I比值增加(P<0.05),而HDL-C、apoA-I、preβ2-HDL、HDL2a和HDL2b含量減少(P<0.01)。MS組中男性和女性與對照組的男性和女性相比,結(jié)果與MS組與對照組的總?cè)巳合啾鹊慕Y(jié)果一致。對照組和MS患者組各組間女性與男性相比,血脂與血漿載脂蛋白差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。以上結(jié)果提示MS患者脂質(zhì)代謝紊亂,并且血漿大顆粒的HDL2a和HDL2b含量減少,而小顆粒HDL3b含量呈現(xiàn)增加的趨勢,且均無性別差異,見表1。

    表1 MS患者血脂及HDL亞類的分布Table 1.The concentrations of plasma lipids and HDL subclasses in the controls and the MS patients(Mean±SD)

    2 MS患者在不同血糖水平下HDL亞類的含量

    隨著血糖濃度的升高,MS患者的HDL2a、HDL2b含量減少(P<0.05),preβ1-HDL含量增加(P<0.05)。以上結(jié)果表明,高血糖濃度的MS患者血漿中大顆粒HDL2a、HDL2b含量減少、小顆粒preβ1-HDL含量增加的趨勢更加明顯,見表2。

    3 MS患者在不同HDL-C水平下HDL亞類的含量

    隨著HDL-C含量的增加,MS患者組HDL2b含量降低(P<0.01),preβ1-HDL含量增加(P<0.01)。以上結(jié)果提示:低HDL-C濃度的MS患者血漿中大顆粒HDL2b含量減少、小顆粒preβ1-HDL含量增加的趨勢更加明顯,見表3。

    表2 MS患者血糖濃度與HDL亞類含量的比較Table 2.The concentrations of plasma glucose and HDL subclasses in the MS patients(Mean±SD)

    4 MS患者TG與HDL-C含量的變化對preβ1-HDL、HDL2b的影響

    在相同的HDL-C水平下,隨著TG水平的升高,MS患者的preβ1-HDL含量呈現(xiàn)增加的趨勢;在相同TG水平下,HDL-C<1.04 mmol/L組的MS患者的preβ1-HDL含量高于HDL-C含量正常者。與TG和HDL-C均正常(即TG<1.69 mmol/L、HDL-C≥1.04 mmol/L)的MS患者比較,TG和(或)HDL-C含量異常者的preβ1-HDL含量均有增加的趨勢,且TG和HDL-C含量均異常(TG>2.25 mmol/L、HDL-C<1.04 mmol/L)的MS患者的preβ1-HDL含量的增加具有顯著差異(P<0.01)。提示MS患者高水平的TG和低水平的HDL-C都能影響血漿preβ1-HDL的含量,并且當二者同時異常時,小顆粒的preβ1-HDL增加更加明顯,見圖1。

    表3 MS患者HDL-C濃度與HDL亞類分布的比較Table 3.The concentrations of HDL-C and HDL subclasses in the MS patients(Mean±SD)

    Figure 1.The content of preβ1-HDL in the MS patients grouped according to TG and HDL-C levels.Mean±SD.#P<0.05,##P<0.01 vs TG<1.69 mmol/L;*P<0.05 vs other TG groups with the same HDL-C level.圖1 MS患者TG與HDL-C含量變化對preβ1-HDL的影響

    MS患者在相同的HDL-C水平下,隨著TG水平的升高,大顆粒的HDL2b呈現(xiàn)降低的趨勢,與TG和HDL-C均正常(即TG<1.69 mmol/L、HDL-C≥1.04 mmol/L)的患者相比,TG和HDL-C均異常(即TG>2.25 mmol/L且HDL-C<1.04 mmol/L)的患者HDL2a含量減少的趨勢更顯著(P<0.01),見圖2。

    Figure 2.The content of HDL2bin the MS patients grouped according to TG and HDL-C levels.Mean±SD.#P<0.05,##P<0.01 vs TG<1.69 mmol/L;*P<0.05 vs other TG groups with the same HDL-C level.圖2 MS患者TG與HDL-C含量變化對HDL2b的影響

    5 MS患者HDL亞類與血脂及其它參數(shù)的相關(guān)性分析

    在控制性別、年齡和BMI的情況下,采用偏相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)FPG與大顆粒的HDL2a和HDL2b呈負相關(guān)(P<0.05);HDL-C與HDL2b呈正相關(guān)(P<0.01),而與preβ1-HDL呈負相關(guān)(P<0.05)。TG含量與preβ1-HDL和HDL3b呈正相關(guān)(P<0.01),TG含量與HDL2b呈負相關(guān)(P<0.01)。TC和LDL-C含量與HDL3b呈正相關(guān)(P<0.01)。apoA-I與HDL各亞類均呈正相關(guān)(P<0.01)。apoB100與preβ2-HDL、HDL2a和HDL2b均呈負相關(guān)(P<0.05)。SBP與HDL3c和HDL3b呈正相關(guān)(P<0.05)。以上結(jié)果分析表明,血糖、TG和HDL-C濃度都能影響血漿HDL亞類分布,并且血脂的影響比血糖更明顯,見表4。

    討論

    近年來的研究表明,在冠心病、糖尿病、高脂血癥及急性炎癥等病理狀態(tài)下,HDL亞類的結(jié)構(gòu)與功能都會發(fā)生改變,甚至表現(xiàn)出致動脈粥樣硬化的特性,稱為失功能性HDL[7-8],代謝綜合征是血糖、血脂等多種代謝成份異常的病理狀態(tài),與動脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)。為了明確代謝綜合征患者血糖、血脂對HDL亞類組成及含量變化的規(guī)律,本研究對220例MS患者進行了分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),MS患者血漿中FPG、TG、TC、LDL-C、LDL-C/HDL-C、apoB100、apoB100/apoA-I、SBP和BMI有增加的趨勢,而HDLC、apoAI卻存在減少的趨勢,表明MS患者存在明顯的血脂紊亂,且與Berthold等[9]的研究結(jié)果一致。雙向電泳-免疫印跡[3]分析發(fā)現(xiàn)MS患者血漿大顆粒的HDL2a和HDL2b有降低的趨勢,而小顆粒的HDL3b有增加的趨勢,其它亞類亦有不同程度的改變,HDL亞類的這些變化與Tian等[10]的研究結(jié)果一致。為了進一步明確血糖、血脂紊亂與HDL亞類含量變化的關(guān)系,按照ATP-Ⅲ[1]文件所述,將MS患者分為FPG<6.1 mmol/L與FPG≥6.1 mmol/L兩組,結(jié)果顯示FPG≥6.1 mmol/L組preβ1-HDL有增加趨勢,而HDL2b和HDL2a有減少趨勢,提示MS患者隨著血糖濃度的升高,血漿HDL亞類顆粒大小呈減少的趨勢。這可能是由于高血糖引起IR[11],而IR是高血糖和血脂代謝紊亂共同的代謝基礎(chǔ)。脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)是一種胰島素依賴酶,其活性受胰島素的刺激,當胰島素敏感性下降時導(dǎo)致LPL的活性降低,TG的分解速度減慢,TG的濃度升高。同時血糖升高也能促進肝臟合成TG,導(dǎo)致TG的濃度升高,高濃度TG是影響HDL亞類分布的一個重要因素。

    表4 MS患者HDL各亞類與血脂及其它參數(shù)的相關(guān)性分析Table 4.The correlation coefficients between HDL subclass and biochemical parameters in the MS patient

    大量文獻報道HDL-C的濃度是影響HDL亞類分布的一個重要因素,在抗AS過程中起了重要的作用[12-13]。HDL一方面能夠促進膽固醇的逆轉(zhuǎn)運,減少外周組織膽固醇的沉積,抑制LDL的化學(xué)修飾,減少了泡沫細胞的形成;另一方面通過降低黏附分子和巨噬細胞趨化蛋白的活性,從而抑制慢性炎癥。而當機體遭遇慢性炎癥如CHD、糖尿病等應(yīng)激時,HDL-C結(jié)構(gòu)會發(fā)生變化,此時的HDL-C中apoA-I含量減少,結(jié)構(gòu)功能受損,從而影響膽固醇的逆轉(zhuǎn)錄,從而失去抗AS功能。本研究結(jié)果也顯示HDL-C<1.04 mmol/L組preβ1-HDL有增加趨勢,而大顆粒的HDL2b卻呈減少趨勢。提示MS患者低濃度的HDLC與HDL亞類的異常分布有關(guān),并可能降低了HDLC的抗AS功能。

    在MS患者中,TG/HDL-C的比值比血糖水平更能預(yù)測動脈粥樣硬化與肥胖的發(fā)生發(fā)展[14]。因此,本研究進一步分析了MS患者TG和HDL-C含量變化對HDL亞類分布的影響結(jié)果提示,TG濃度升高與HDL-C濃度降低都能影響HDL亞類的分布。因為血漿TG含量升高時,膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白的活性也增強,促進HDL2的膽固醇酯轉(zhuǎn)移至VLDL-C和LDL-C中,導(dǎo)致富含膽固醇酯且與肝LDL受體結(jié)合力效率較低的VLDL和LDL產(chǎn)物增加并大量流至周圍細胞,促使AS的發(fā)生發(fā)展[15]。同時VLDL和LDL中的TG轉(zhuǎn)運至HDL2,產(chǎn)生富含TG的HDL作為肝脂酶(hepatic lipase,HL)的基質(zhì),水解形成可被肝攝取的游離膽固醇、膽固醇酯和不含脂質(zhì)的apoA-I,使得HDL3大量堆積,HDL2含量減少,并且促進新生preβ1-HDL的形成。另一方面,TG水平升高,卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(lecithin-cholesterol acyltransferase,LCAT)和LPL的活性降低,血漿LCAT活性降低會導(dǎo)致HDL成熟受阻,從而造成小顆粒的HDL水平升高[16]。血漿LPL活性的降低會促使富含TG的VLDL及CM分解代謝緩慢,從而造成其代謝產(chǎn)物apoAI及磷脂等減少,使得大顆粒的HDL2合成減少。而血漿HL活性的增加又可促使大顆粒的HDL2轉(zhuǎn)變?yōu)镠DL3,同時大顆粒的HDL2中的apoAI和磷脂從表面脫落形成小顆粒的preβ1-HDL[17]。綜上所述,血脂水平及參與HDL代謝的酶與蛋白的改變,會引起MS患者HDL亞類的分布異常,HDL抗AS功能也相應(yīng)地降低,并增加CHD的風險[18]。

    在控制年齡、性別、BMI情況下,相關(guān)性分析表明TG、HDL-C與小顆粒的preβ1-HDL和大顆粒的HDL2b有明顯相關(guān)性,血糖與大顆粒的HDL2a和HDL2b也存在一定的相關(guān)性,表明MS患者血糖與血脂紊亂均與HDL顆粒的異常分布存在關(guān)聯(lián),而且TG、HDL-C等血脂水平改變比血糖水平變化與HDL亞類分布異常的相關(guān)性更顯著。代謝綜合征是血糖、血脂、血壓等多因素異常的病理狀態(tài),并且存在HDL成熟代謝障礙,HDL各亞類分布異常,至于各種指標之間是否存在特征性的關(guān)聯(lián)還需進一步增大臨床樣本分析。

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    Relationship between HDL subclass distribution and plasma glucose and lipid levels in patients with metabolic syndrome

    QIU Meng-xia,LONG Shi-yin,CHEN Zhi-jun,CHEN Hao,CHEN Wu-zhe,
    ZHU Yan,MA Yan-ni,ZHANG Cai-ping,TIAN Ying

    (Department of Biotechnology,University of South China,Hengyang 421001,China.E-mail:uscty@163.com)

    AIM:To investigate high-density lipoprotein(HDL)subclass distribution and to analyze the relationship between HDL subclasses with plasma glucose and lipids in metabolic syndrome(MS).METHODS:Apolipoprotein A-I(apoA-I)contents of plasma HDL subclasses were determined by two-dimensional gel electrophoresis associated with immunodetection.The concentrations of lipids and apolipoproteins in the plasma were measured by an automated biochemical analyzer.RESULTS:Compared with the controls,the levels of fasting plasma glucose(FPG),total cholesterol (TC),triglyceride(TG),low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C),LDL-C/high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C),apolipoprotein B100(apoB100),apoB100/apoA-I,systolic blood pressure(SBP),body mass index(BMI)and HDL3bwere increased in the MS patients(P<0.05).Meanwhile,HDL-C,apoA-I and preβ2-HDL,HDL2aand HDL2bwere decreased in the MS patients(P<0.01).With the increase in the plasma glucose level,the contents of HDL2aand HDL2bwere decreased in the MS patients(P<0.05),while preβ1-HDL was increased(P<0.05).With the decrease in the HDL-C level,the content of HDL2bwas decreased in the MS patients(P<0.01),while preβ1-HDL was increased (P<0.01).With the increase in the TG level and the decrease in the HDL-C level,the content of HDL2bhad a decreasing trend and the content of small-particle preβ1-HDL had an increasing trend,indicating that HDL maturation metabolismwas disrupted.The correlation analysis showed that FPG was negatively correlated with the levels of HDL2aand HDL2b,HDL-C was negatively correlated with the level of preβ1-HDL and positively correlated with the level of HDL2b,and TG was positively correlated with the levels of preβ1-HDL and HDL3b.CONCLUSION:With the increases in the plasma glucose and TG,and the decrease in HDL-C in the MS patients,HDL particles have minifying tendency,and the maturation metabolism of HDL particles is disrupted.

    Plasma glucose;Triglyceride;High-density lipoprotein cholesterol;High-density lipoprotein subclasses;Metabolic syndrome

    R363

    A

    10.3969/j.issn.1000-4718.2015.02.023

    1000-4718(2015)02-319-06

    2014-10-08

    2014-12-03

    湖南省科技廳項目(No.2013SK3120);湖南省高層次衛(wèi)生人才“225”工程項目基金;湖南省教育廳項目(No.12C1246);衡陽市科技局項目(No.2013KJ05);南華大學(xué)研究生科研創(chuàng)新項目(No.2013XCX20);南華大學(xué)十二五科技創(chuàng)新

    團隊基金;南華大學(xué)留學(xué)歸國人員啟動基金資助項目。

    △通訊作者Tel:0734-8282847;E-mail:uscty@163.com

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