1086例單采血小板細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果分析

何華慶，韓玲，涂娟，王健，尤榕，余航，歐陽(yáng)江，涂芬

(江西省血液中心，江西 南昌330077)

血小板在保存箱(22±2)℃振蕩保存,易于出現(xiàn)細(xì)菌大量繁殖,同時(shí)產(chǎn)生大量的內(nèi)毒素,在輸注后會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的敗血癥,甚至導(dǎo)致病人死亡[1-4]。為保證臨床輸注血小板制品的安全性和有效性，本中心引進(jìn)BacT/ALERT 3D 120全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)單采血小板進(jìn)行細(xì)菌篩查。自2012年9月至2013年10月對(duì)本中心1086例血小板的細(xì)菌污染情況進(jìn)行檢測(cè),具體情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源2012年9月至2013年10月本中心采集的單采血小板制品1086袋(10U/袋)。

1.2 材料與設(shè)備BacT/ALERT 3D 120全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)、恒溫培養(yǎng)箱(上海博訊)，超凈工作臺(tái)，血小板恒溫振蕩保存箱，Bacter/Alert BPA/BPN(需氧/厭氧培養(yǎng)瓶)(法國(guó)生物梅里埃公司)。改良馬丁/硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基(南京普朗)。

1.3 取樣1086份單采血小板均在采集后置血小板培養(yǎng)箱振蕩保存24h后通過無(wú)菌接管儀接袋取樣取樣。

1.4 樣本接種在百級(jí)的無(wú)菌操作臺(tái)上接種，用一次性無(wú)菌注射器抽取留樣標(biāo)本各接種5~8ml至需氧/厭氧培養(yǎng)瓶中。硫乙醇酸鹽/改良馬丁法對(duì)照試驗(yàn)嚴(yán)格按照文獻(xiàn)[5]操作。

1.5 結(jié)果判斷及處理 BacT/ALERT 3D 120通過軟件判讀，培養(yǎng)至7d未出現(xiàn)陽(yáng)性報(bào)告則取出按“無(wú)菌生長(zhǎng)”報(bào)結(jié)果。培養(yǎng)期內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性報(bào)告則取出培養(yǎng)瓶進(jìn)行轉(zhuǎn)種及涂片，轉(zhuǎn)種及涂片均為陽(yáng)性的進(jìn)行菌種鑒定；硫乙醇酸鹽/改良馬丁培養(yǎng)瓶在恒溫培養(yǎng)箱中35℃孵育培養(yǎng)，從接種后到14d內(nèi)每天從培養(yǎng)瓶中取樣進(jìn)行革蘭染色和轉(zhuǎn)種，直到出現(xiàn)陽(yáng)性培養(yǎng)。

1.6 菌種鑒定 用全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行菌種鑒定。

2 結(jié)果

血小板的細(xì)菌篩檢篩檢了1086袋單采血小板,其中為硫乙醇酸鹽/改良馬丁法檢測(cè)結(jié)果均為陰性，BacT/ALERT 3D 120全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)初篩為陽(yáng)性的6袋(0.55%)，經(jīng)復(fù)查確認(rèn)均為陰性,見表1。

表1 Bac T/ALERT 3D 120全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)初篩陽(yáng)性細(xì)菌分析

3 討論

歐洲部分國(guó)家和美國(guó)分別于2001年和2004年規(guī)定將血液細(xì)菌篩檢作為血小板常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目[3]。加強(qiáng)采血前對(duì)獻(xiàn)血者的問詢,規(guī)范采血前的皮膚消毒和采血過程的無(wú)菌操作可以顯著有效地減少細(xì)菌污染血液的發(fā)生，但是卻不能杜絕血液的細(xì)菌污染,因此對(duì)血小板進(jìn)行細(xì)菌篩查成為可以采取的進(jìn)一步減少血液細(xì)菌污染危險(xiǎn)的措施。

我們?cè)?012年9月至2013年10月期間分2組對(duì)機(jī)采血小板產(chǎn)品進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),結(jié)果顯示BacT/ALERT 3D 120系統(tǒng)陽(yáng)性結(jié)果檢出的時(shí)間早于硫乙醇酸鹽/改良馬丁法，與國(guó)內(nèi)報(bào)道一致[6,7]。本組研究BacT/ALERT 3D 120全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)初篩細(xì)菌陽(yáng)性6例經(jīng)復(fù)查確證無(wú)1例確證陽(yáng)性，分析原因可能是從實(shí)驗(yàn)人員操作不當(dāng)或環(huán)境等因素引起的二次污染?？赡芤?yàn)檎n題組試驗(yàn)操作人員缺乏經(jīng)驗(yàn),剛開始做的細(xì)菌培養(yǎng)不規(guī)范,造成血小板細(xì)菌污染從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。從鑒定初篩陽(yáng)性的細(xì)菌菌種看，6例假陽(yáng)性的菌種中有4例為為霉菌 (比例為67%)，1例溶血葡萄球菌和1例表皮葡萄球菌，時(shí)間上看初篩細(xì)菌陽(yáng)性出現(xiàn)的月份集中在2013年4-6月份,這段時(shí)期南昌地區(qū)空氣濕度大，溫度高的環(huán)境適宜各類細(xì)菌繁殖，霉菌等不易殺滅,我們將在以后研究工作中繼續(xù)關(guān)注這類問題。此次試驗(yàn)我們采用兩種方法對(duì)單采血小板產(chǎn)品進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),結(jié)果均為陰性,與國(guó)內(nèi)外報(bào)道不同[8-15]。分析原因如下:(1)本項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)時(shí)間不夠長(zhǎng)、檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量不夠大，試驗(yàn)數(shù)據(jù)相對(duì)較少,未發(fā)現(xiàn)國(guó)外報(bào)道的細(xì)菌污染問題。(2)無(wú)償獻(xiàn)血制度的規(guī)范嚴(yán)格執(zhí)行,保障了采血環(huán)境的衛(wèi)生要求和工作人員的無(wú)菌操作意識(shí)的提高,從而保證了血小板制品的質(zhì)量,降低了細(xì)菌污染率。 BacT/ALERT 3D 120全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)具有使用方便,可以連續(xù)讀取標(biāo)本管,自動(dòng)打印結(jié)果,靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),而被越來(lái)越多的血站作為常規(guī)血小板篩檢使用，為臨床輸注單采血小板進(jìn)一步提供了安全保障。

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