尿液自動(dòng)化分析復(fù)檢規(guī)則的驗(yàn)證

陸清蘭

(武夷山市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 武夷山354300)

尿液分析是對(duì)尿液中的某些化學(xué)和有形成分進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，有助于泌尿系統(tǒng)疾病的診斷和病情監(jiān)測(cè)[1，2]。隨著自動(dòng)化尿液檢測(cè)技術(shù)的不斷更新，尿液分析的參數(shù)也越來(lái)越多，如化學(xué)成分參數(shù)、有形成分參數(shù)等[3，4]，由于尿液標(biāo)本的復(fù)雜性和自動(dòng)化分析方法學(xué)的局限性，目前臨床實(shí)驗(yàn)室使用的尿液自動(dòng)化分析存在很多影響因素，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，必須用人工顯微鏡進(jìn)行復(fù)檢，并應(yīng)該建立聯(lián)合鏡檢規(guī)則[5]，以提高尿檢結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)減少?gòu)?fù)檢率，提高工作效率。本實(shí)驗(yàn)室制定了適合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況的尿常規(guī)分析的復(fù)檢規(guī)則，并對(duì)該復(fù)檢規(guī)則的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料 隨機(jī)收集2014年6-7月本院門診標(biāo)本943例，住院標(biāo)本708例，共1651例。所有標(biāo)本均在2h內(nèi)按標(biāo)準(zhǔn)化操作完成檢測(cè)。

1.2 儀器和試劑日本愛(ài)科來(lái)AX-4280干化學(xué)分析儀和Sysmex公司UF-500i尿沉渣分析儀及配套的試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品；奧林巴斯CX21光學(xué)顯微鏡。

1.3 方法

1.3.1 儀器法 分別用AX-4280干化學(xué)分析儀和UF-500i尿沉渣分析儀對(duì)尿液進(jìn)行分析。儀器法的操作步驟嚴(yán)格按照AX-4280干化學(xué)分析儀和UF-500i尿沉渣分析儀的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

1.3.2 顯微鏡檢查 按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版[6]推薦的尿沉渣離心沉淀檢查法，取10ml新鮮尿液加于離心管中，以400G相對(duì)離心力離心5min，取0.2ml尿沉渣，輕搖離心管，使尿沉渣有形成分充分混勻，取尿沉渣0.02ml滴在載玻片上，用18×18mm的蓋玻片覆蓋，所有標(biāo)本均在2h內(nèi)檢查完畢，顯微鏡檢查由經(jīng)驗(yàn)豐富的技師分析。

1.3.3 復(fù)檢規(guī)則的建立的原則 按CNAS-CL41要求假陰性率<5%的標(biāo)準(zhǔn)；且能夠符合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，復(fù)檢率控制在30%左右；并參考其他實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)制定標(biāo)準(zhǔn)，制定本實(shí)驗(yàn)室的復(fù)檢規(guī)則如下：(1)規(guī)則一：當(dāng)尿沉渣中WBC、RBC、分別與尿干化學(xué)LEU、BLD出現(xiàn)陰陽(yáng)性不一致或且散點(diǎn)圖異常時(shí)；(2)規(guī)則二：尿沉渣中出現(xiàn)管型、真菌、結(jié)晶、小圓上皮細(xì)胞中任一項(xiàng)出現(xiàn)陽(yáng)性時(shí)；(3)規(guī)則三：臨床醫(yī)生提出要求者需鏡檢時(shí)。其他則為陰性標(biāo)本無(wú)需鏡檢。

1.3.4 復(fù)檢規(guī)則的驗(yàn)證 按照《臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第2版[7]規(guī)定的RBC≥3個(gè)/HP，WBC≥5個(gè)/HP，CAST≥1個(gè)/LP為對(duì)應(yīng)項(xiàng)目鏡檢陽(yáng)性標(biāo)本，真菌、結(jié)晶、小圓上皮細(xì)胞任一項(xiàng)出現(xiàn)陽(yáng)性即為該項(xiàng)目鏡檢陽(yáng)性標(biāo)本，若上述項(xiàng)目均為陰性，則為陰性標(biāo)本，以顯微鏡鏡檢結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)四格表法對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，評(píng)估復(fù)檢規(guī)則篩選的真陽(yáng)性率、假陽(yáng)性率、真陰性率、假陰性率和復(fù)檢率。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 共檢測(cè)尿液標(biāo)本1651例，無(wú)需復(fù)檢標(biāo)本共1169例，其中WBC符合率為91.02%，RBC符合率為83.07%，CAST符合率為99.49%，具體統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表1。需復(fù)檢標(biāo)本共482例，復(fù)檢率為29.2%。

2.2 滿足復(fù)檢規(guī)則一 “WBC、RBC、分別與尿干化學(xué)LEU、BLD出現(xiàn)陰陽(yáng)性不一致或且散點(diǎn)圖異常時(shí)”的標(biāo)本共計(jì)95例，WBC符合率為40.74%，RBC符合率為6.49%，具體統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表2。

表1尿液分析無(wú)需復(fù)檢標(biāo)本統(tǒng)計(jì)(%)檢測(cè)項(xiàng)目真陽(yáng)性率假陽(yáng)性率真陰性率假陰性率 符合率WBC RBC CAST真菌結(jié)晶小圓上皮細(xì)胞19.08 15.83 8.21 16.76 71.94 67.24 99.49 0.77 0.17 0.51 0.43 4.36 1.03 91.02 83.07 99.49

表2 WBC、RBC、分別與尿干化學(xué)LEU、BLD出現(xiàn)陰陽(yáng)性不一致或且散點(diǎn)圖異常時(shí)統(tǒng)計(jì)(%)

2.3 滿足復(fù)檢規(guī)則二 “出現(xiàn)管型、結(jié)晶、真菌、小圓上皮細(xì)胞”共計(jì)標(biāo)本326例，WBC符合率為83.44%，RBC符合率為 61.96%，CAST符合率為66.56%，真菌符合率為29.27%，結(jié)晶符合率為95.95%，小圓上皮細(xì)胞符合率為14.71%，具體統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表3。

表3 出現(xiàn)管型、結(jié)晶、真菌、小圓上皮細(xì)胞標(biāo)本統(tǒng)計(jì)(%)

2.4 陰性標(biāo)本統(tǒng)計(jì) 所有陰性標(biāo)本共計(jì)487例，鏡檢假陰性6例，假陰性率為1.23%，其中WBC假陰性有5例，RBC假陰性有1例。

3 討論

尿常規(guī)分析對(duì)健康人群普查，泌尿系統(tǒng)及其相關(guān)疾病的診斷、定位、鑒別診斷及預(yù)后判斷均有重要意義。隨著自動(dòng)化分析儀的廣泛應(yīng)用，不僅提高檢驗(yàn)效率，還促進(jìn)了尿液常規(guī)分析走向自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化和定量分析。大量的臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，因尿液標(biāo)本自身的復(fù)雜性和自動(dòng)化分析方法學(xué)的局限性，工作中出現(xiàn)許多假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果，需要大量的人工進(jìn)行復(fù)檢。為此，許多學(xué)者對(duì)如何制定合理規(guī)范，假陰性率低，可操作性的復(fù)檢規(guī)則做了大量的探討。之前，馬駿龍等[8]研究的UF-1000i尿液分析流水線復(fù)檢規(guī)則只考慮到了干化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、蛋白和有形成分分析中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、管型這6個(gè)項(xiàng)目，經(jīng)臨床實(shí)際應(yīng)用還存在許多問(wèn)題。如真菌、結(jié)晶、小圓上皮細(xì)胞的漏檢等，自動(dòng)化分析結(jié)果顯示這些項(xiàng)目的假陽(yáng)性率較高，同時(shí)會(huì)對(duì)其他項(xiàng)目的分析產(chǎn)生干擾作用。為此，我們制定并修改了復(fù)檢規(guī)則，其中包括32條無(wú)需復(fù)檢和33條需要復(fù)檢的規(guī)則，同時(shí)特別強(qiáng)調(diào)當(dāng)WBC與LEU不符或RBC與BLD不符時(shí)，若散點(diǎn)圖異常，則可能為細(xì)菌、結(jié)晶等干擾引起的假陽(yáng)性，仍需人工鏡檢。

本研究用1651例標(biāo)本進(jìn)行上述復(fù)檢規(guī)則的臨床驗(yàn)證，結(jié)果顯示，無(wú)需鏡檢的標(biāo)本各項(xiàng)目符合率均大于83%，假陰性率均小于5%，滿足復(fù)檢規(guī)則評(píng)價(jià)假陰性率應(yīng)小于5%的標(biāo)準(zhǔn)[9]。尿干化學(xué)各項(xiàng)目符合率均大于83%，假陰性率均小于5%；尿沉渣各項(xiàng)目符合率均大于92%，假陰性率均小于5%。陰性標(biāo)本假陰性率為1.23%，與徐衛(wèi)益等[10]的1.5%相近，低于黃玉霞等[11]的4.7%和馬俊龍等[12]的2．43%。同時(shí)，我們的復(fù)檢率為29.2%，低于徐衛(wèi)益等[6]的58.8%和陳雨等[12]的53.74%，與黃玉霞等[11]的29.0%一致，高于馬俊龍等[8]的18.28%。提示如果未考慮尿液結(jié)晶、真菌、小圓上皮等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，其復(fù)檢規(guī)則將不夠完善，復(fù)檢率會(huì)相差很大。

本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)WBC與LEU不符或RBC與BLD不符且散點(diǎn)圖異常時(shí)，標(biāo)本W(wǎng)BC符合率為40.74%，RBC符合率為6.49%，其中尿干化學(xué)WBC符合率為59.26%，RBC符合率為92.21%，尿沉渣WBC符合率為40.74%，RBC符合率為7.79%?？梢?jiàn)當(dāng)WBC與LEU不符或RBC與BLD不符且散點(diǎn)圖異常時(shí)，WBC與RBC的符合率較低，尤其是紅細(xì)胞，相對(duì)而言，尿干化學(xué)紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性較高，而尿沉渣紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性率較高，主要是由于大量細(xì)菌、草酸鈣結(jié)晶、精子、真菌、破壞的白細(xì)胞或其他雜質(zhì)的干擾所致。CAST假陽(yáng)性較高，主要原因有(1)黏液絲形態(tài)與管型形態(tài)較相似，易被儀器誤認(rèn)為透明管型，當(dāng)其黏附細(xì)胞、細(xì)菌或其他雜質(zhì)時(shí)，儀器誤認(rèn)為病理管型。(2)大量細(xì)胞或非晶型結(jié)晶聚集，有時(shí)也呈管狀，也可導(dǎo)致假陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CAST真陽(yáng)性標(biāo)本大多為顆粒管型。流水線CAST陽(yáng)性標(biāo)本RBC假陽(yáng)性率偏高，大多是由于標(biāo)本中粘液絲黏附雜質(zhì)導(dǎo)致儀器誤認(rèn)為紅細(xì)胞。出現(xiàn)結(jié)晶，真菌，小圓上皮的標(biāo)本，各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目的假陰性率均小于5%，真菌符合率為29.27%，結(jié)晶符合率為95.95%，小圓上皮細(xì)胞符合率為14.71%，RBC符合率為61.96%，由于草酸鈣結(jié)晶和紅細(xì)胞具有相似的形狀、真菌孢子的體積與紅細(xì)胞差別不是很大，所以存在真菌、結(jié)晶的標(biāo)本易導(dǎo)致紅細(xì)胞的假陽(yáng)性[13-15]。因部分白細(xì)胞體積偏大，儀器敏感度較高，也易導(dǎo)致小圓上皮細(xì)胞假陽(yáng)性。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)室制定的尿常規(guī)復(fù)檢規(guī)則假陰性率<5%，復(fù)檢率控制在30%左右，可以適用于臨床。

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