乳腺癌中MTDH的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

吳穎虹，王仁杰，朱少波，劉小景，張玨，江金梅

(景德鎮(zhèn)市第二人民醫(yī)院，江西 景德鎮(zhèn)333000)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率與病死率均較高[1]。而異黏蛋白(metadherin，MTDH)基因可激活多條刺激細(xì)胞增殖，侵襲，細(xì)胞生存和耐藥的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可直接影響c-myc、Ha-ras等相應(yīng)基因的表達(dá)水平[2]。本文重點(diǎn)研究了乳腺癌中MTDH的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移二者關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 從江西景德鎮(zhèn)市第二人民醫(yī)院2008年1月-2013年1月收治的乳腺癌患者中抽取樣本30例，其中24例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，6例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，本次所取的30例患者均分別取腫瘤處組織與癌旁的正常組織(大于5cm)，患者均為女性，年齡37~58歲，平均(30.21±1.8)歲，所選組織標(biāo)本均經(jīng)病理確認(rèn)。

1.2 材料 試劑需用型兔抗人MTDH單克隆抗體，兔抗人雌激素受體蛋白(ER)、HER-2單克隆抗體、兔抗人孕激素受體(PR)以及相應(yīng)的PV6000SP試劑盒，DAB顯色試劑盒等，所有試劑與材料均來自于北京中山金橋生物技術(shù)公司。

1.3 方法 所有免疫組化組織切片均進(jìn)行水化、脫蠟、加熱修復(fù)抗原處理，并使用3%的過氧化氫甲醇溶液來削弱內(nèi)源性氧化物酶活性，并在山羊血清封閉抗原內(nèi)，依次滴加抗ER、MTDH、HER-2、PR等抗體過夜，生物素化二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染后封片，結(jié)束后將其置于光鏡下觀察，用PBS緩沖液作陰性對(duì)照，用乳腺癌陽性標(biāo)準(zhǔn)作陽性對(duì)照，所有標(biāo)本均經(jīng)DAB染色后，可見細(xì)胞核、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)中有棕黃色顆粒沉著，從每例患者所選的標(biāo)準(zhǔn)的中選取5個(gè)高倍鏡視野，在依照細(xì)胞染色程度與陽性染色細(xì)胞本身所占比例來作評(píng)分[3]。可將染色程度評(píng)分情況如下：0分：不著色；1分：淡黃色；2分：黃色；3分：棕褐色；陽性染色細(xì)胞百分比評(píng)分情況如下：0分：陽性細(xì)胞低于25%；1分：陽性細(xì)胞在25%~50%之間；2分：陽性細(xì)胞在50%~75%之間；3分：陽性細(xì)胞超過75%。將染色程度與陽性染色細(xì)胞百分比評(píng)分相加后的最終結(jié)果相加，低于2分為陰性，高于2分為陽性。

2 結(jié)果

2.1乳腺癌及癌旁乳腺組織中MTDH蛋白的表達(dá)30例乳腺癌患者中23例的組織內(nèi)有檢測(cè)到MTDH蛋白的表達(dá)，表達(dá)率為76.67%，另有9例患者的癌旁乳腺組織中有檢測(cè)到MTDH蛋白的表達(dá)，表達(dá)率為30%。

2.2 陽性檢出率情況 MTDH基因在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者中的陽性檢出率高達(dá)87.50%，而無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中，MTDH陽性率為33.33%(P<0.05)。 見表 1。

表1 乳腺癌患者臨床資料與MTDH基因表達(dá)關(guān)系

2.3 MTDH、ER、PR及HER-2之間的關(guān)系 MTDH、ER、PR及HER-2在乳腺癌組織內(nèi)的表達(dá)為：在乳腺癌組織免疫組化檢測(cè)內(nèi)MTDH均表達(dá)在腫瘤細(xì)胞膜與細(xì)胞漿中(圖1)。僅有極少部分表達(dá)在細(xì)胞核中，陽性檢出率為76.67%；ER表達(dá)于癌細(xì)胞的細(xì)胞核與細(xì)胞漿，陽性率為91.67%(圖2)；PR表達(dá)于癌細(xì)胞核與細(xì)胞漿，陽性率為63.64%(圖3)；HER-2表達(dá)于細(xì)胞膜上，陽性率為83.33%(圖4)。

圖1 MTDH的表達(dá)

圖2 ER的表達(dá)

圖3 PR的表達(dá)

圖4 Her-2的表達(dá)

3 討論

最早發(fā)現(xiàn)MTDH是在人原始胚胎星形細(xì)胞中[4]，在人體的其它正常組織內(nèi)完全無表達(dá)，但在腫瘤病變區(qū)內(nèi)卻呈高表達(dá)，與腫瘤的生長(zhǎng)關(guān)系緊密[5]。此外，通過對(duì)小鼠體內(nèi)噬菌體進(jìn)行篩查，得知乳腺癌與MTDH之間關(guān)系緊密[6]。因MTDH重點(diǎn)定位在染色體8q22，齊全的MTDH基因有3611bp[7]，其中包括12個(gè)外顯子與11個(gè)內(nèi)含子，而第22與1968才是最主要的表達(dá)序列，最終編碼產(chǎn)物為異黏蛋白[8]，屬于高堿性Ib性跨膜蛋白，大部分均定位在51與72之間的氨基酸殘基上[9]。

而MTDH大多表達(dá)在腫瘤細(xì)胞內(nèi)胞膜與胞漿中，并與人體NF-κB內(nèi)的p56產(chǎn)生作用，將NF-kB信號(hào)通路完全激活，賦予了NF-κB調(diào)節(jié)人體免疫、炎癥反應(yīng)、凋亡等多種功能[10]。此外，MTDH表達(dá)位置多是由細(xì)胞漿向細(xì)胞核發(fā)生轉(zhuǎn)移，受TNF-α、HIF-1α等基因的影響較明顯，此種轉(zhuǎn)移與乳腺癌患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有緊密關(guān)聯(lián)[11]。同時(shí)細(xì)胞漿向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移后，還會(huì)與病變腫瘤細(xì)胞內(nèi)的P53基因產(chǎn)生作用，促使人體腫瘤細(xì)胞快速增殖[12]，使得乳腺癌疾病不斷惡化，降低了患者生存時(shí)間[13]。本文中重點(diǎn)對(duì)乳腺癌中MTDH的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系展開分析，結(jié)果表明，30例乳腺癌患者中23例的組織內(nèi)有檢測(cè)到MTDH蛋白的表達(dá)，表達(dá)率為76.67%，另有9例患者的癌旁乳腺組織中有檢測(cè)到MTDH蛋白的表達(dá)，表達(dá)率為30%，乳腺癌患者淋巴結(jié)快速轉(zhuǎn)移與體內(nèi)的MTDH關(guān)系緊密(P<0.05)，若患者體內(nèi)的MTDH基因檢出率越高，說明發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率越高，其可作為判斷乳腺癌患者有無發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。此外，MTDH不受ER、PR、HER-2等參數(shù)值的影響，ER在癌細(xì)胞中的陽性率為91.67%；PR在癌細(xì)胞中的陽性率為63.64%；HER-2在癌細(xì)胞中的陽性檢出率為83.33%?？梢?，MTDH不受乳腺癌患者的年齡、ER、PR、HER-2等影響，而乳腺癌)MTDH高表達(dá)者發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的幾率較大。這為臨床中乳腺癌疾病的治療和研究提供了更多的理論依據(jù)。

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