梅毒螺旋體四種血清學(xué)檢測(cè)方法比較及檢測(cè)模式初探

曹龍古，歐陽丹明，周志雄，陳蘇芳，張艷

(湘南學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，湖南 郴州423000)

梅毒(Syphilis)是一種全球性分布、嚴(yán)重危害成人和新生兒健康的的性傳播疾病(STD)，由蒼白密螺旋體蒼白亞種(俗稱梅毒螺旋體)(Treponema pallidum,Tp)引起。盡管努力采取了一系列綜合防治措施，但近年來全球梅毒發(fā)病仍以20%速度增長(zhǎng)，每年新增病例數(shù)高達(dá)1500萬[1]，主要出現(xiàn)在發(fā)展中國(guó)家，在發(fā)達(dá)國(guó)家也死灰復(fù)燃，從2006年開始超過淋病發(fā)病數(shù)而位居STD首位[2]，梅毒的高發(fā)已成為我國(guó)乃至全球共同高度關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。

梅毒螺旋體的人工培養(yǎng)問題迄今仍未解決，直接顯微鏡檢查容易造成漏檢，因此血清學(xué)檢測(cè)梅毒抗體對(duì)于梅毒的輔助診斷及療效觀察尤為重要[3]。梅毒血清學(xué)試驗(yàn)分為兩大類：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，每一類檢測(cè)試驗(yàn)具體來說又包括多種試驗(yàn)方法，本研究通過對(duì)目前臨床上比較常用的四種血清學(xué)檢驗(yàn)方法在各期梅毒的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，以期探索出一種更加合適的檢測(cè)模式，為臨床準(zhǔn)確診斷梅毒提供直接的實(shí)驗(yàn)診斷依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來源 我校附屬醫(yī)院2014年4月至2015年3月的門診及住院梅毒患者共183例，男性82例，女性101例，年齡1天~82歲，經(jīng)臨床科室醫(yī)生確診：一期梅毒患者86例，二期梅毒患者53例，胎傳梅毒21例，隱性梅毒23例。梅毒臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)和臨床診斷分期依據(jù)參照衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》(WS273-2007)。217例正常對(duì)照血清標(biāo)本均來自我院同期健康體檢者，檢查梅毒、艾滋及乙肝均為陰性。

1.2 試劑和方法 梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)試劑購(gòu)自珠海麗珠試劑公司生產(chǎn)的試劑盒；甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)試劑購(gòu)自上海榮盛生物公司生產(chǎn)的試劑盒；梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)試劑購(gòu)自日本富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)的試劑盒；梅毒膠體金試驗(yàn)(SYP)試劑購(gòu)自廈門英科新創(chuàng)科技公司生產(chǎn)的診斷試劑盒。四種檢測(cè)試驗(yàn)的具體操作方法均嚴(yán)格按照各自試劑盒的要求進(jìn)行，結(jié)果判斷亦依據(jù)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)判斷。儀器設(shè)備主要有DNM960Z-G酶標(biāo)儀，DEM-3自動(dòng)洗板機(jī)，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠產(chǎn)振蕩儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料以率表示，各方法的敏感性及特異性分析采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四種血清學(xué)檢驗(yàn)方法(TRUST、ELISA、TPPA和SYP)對(duì)400例血清標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果 見表1。

表1 四種檢驗(yàn)方法檢測(cè)結(jié)果[n(%)]

2.2 四種檢驗(yàn)方法特異性、敏感性比較 ELISA、TPPA和SYP三種方法的敏感性均很高，分別為96.7%、99.4%和98.9%，三者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)，ELISA、TPPA和SYP三種方法的敏感性均高于TRUST法(P＜0.05)；四種方法的特異性均很高，分別為97.7%、98.6%、99.5%和98.6%，四者之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 四種檢驗(yàn)方法特異性、敏感性(%)

3 討論

通常正常人體感染梅毒螺旋體后4~10周左右，血清中可產(chǎn)生一定量的抗類脂質(zhì)抗原的非特異性反應(yīng)素(抗脂質(zhì)抗體，臨床上習(xí)慣稱非特異性抗體)和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體[4]。

測(cè)定非特異性抗體的主要試驗(yàn)方法有性病研究所實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡試驗(yàn)(RPR)和TRUST三種，其中后兩種方法目前在臨床上應(yīng)用最多，我院目前采用TRUST法檢測(cè)非特異性抗體。由于非特異性抗體的出現(xiàn)時(shí)間晚于特異性抗體，而且晚期梅毒又可能轉(zhuǎn)陰，故該方法的敏感性有所欠缺 (本研究結(jié)果TRUST敏感性只有72.7%說明了此觀點(diǎn))，因此，TRUST不適合Ⅰ期梅毒早期以及Ⅲ期的診斷[5]，對(duì)潛伏期以及神經(jīng)梅毒也不敏感。此外，該方法易受風(fēng)疹、麻疹、麻風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及風(fēng)濕性心臟病等疾病干擾[6]，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。所以單獨(dú)TRUST陽性意義不大。但TRUST滴度變化與梅毒治療情況呈正相關(guān)，故該方法適宜臨床療效觀察、隨訪及梅毒復(fù)發(fā)的輔組診斷[7，8]。

測(cè)定特異性抗體的主要試驗(yàn)方法有熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS)、梅毒螺旋體熒光抗體雙染色試驗(yàn)(FTA-ABS-DS)、抗梅毒螺旋體抗體的微量血凝檢測(cè) (MHA-TP)、TP-ELISA、TPPA 和SYP等方法，其中后三種方法目前在我省臨床應(yīng)用最多。

47KD、45KD、17KD、15KD 等蛋白分子為梅毒螺旋體外膜的脂蛋白，具有較好免疫活性，國(guó)內(nèi)外梅毒TP-ELISA試劑盒主要是選用以上的分子為抗原[9]，可用于各期梅毒診斷，敏感性特異性均達(dá)96%以上，是梅毒血清學(xué)診斷試驗(yàn)的常用方法，加上全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)的廣泛應(yīng)用，大大減少了傳統(tǒng)手工操作的人為誤差，尤其適用于臨床大批量標(biāo)本的測(cè)定[10]。但本研究也發(fā)現(xiàn)，TP-ELISA在Ⅰ期梅毒的檢測(cè)中出現(xiàn)了6例假陰性結(jié)果，出現(xiàn)此種情況是由于標(biāo)本中過量特異性抗體分別與固相抗原及標(biāo)記抗原分別結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，顯色大大降低，此時(shí)正確的處理辦法是把標(biāo)本做系列稀釋[11]。同時(shí)TP-ELISA在健康對(duì)照組檢測(cè)中，出現(xiàn)了3例老年人假陽性病例，此種情況可能與老年人免疫功能異常，容易產(chǎn)生一些針對(duì)連接用的白蛋白抗體或者是一些異常蛋白質(zhì)干擾了ELISA反應(yīng)[12,13]，臨床檢驗(yàn)中應(yīng)注意。

SYP采用免疫層析式雙抗原夾心法原理，該法具有操作簡(jiǎn)單、結(jié)果觀察直觀快速、不需要特殊儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用到獻(xiàn)血員現(xiàn)場(chǎng)初篩、門診創(chuàng)傷性醫(yī)療設(shè)備檢查治療前傳染病快速篩查以及其它梅毒抗體定性試驗(yàn)及方法的比對(duì)中[14]。該方法同時(shí)也檢測(cè)出了1例假陰性結(jié)果，經(jīng)查證原因?yàn)闃?biāo)本是高血脂標(biāo)本，造成顯色不清晰而影響結(jié)果判斷。

TPPA法所檢測(cè)的抗體屬于特異性抗體，且結(jié)果與抗體的濃度呈正相關(guān)，不隨抗菌藥物的治療及病程的發(fā)展而改變。TPPA具有高敏感性、高特異性的特點(diǎn)(本研究結(jié)果在99.4%以上)，但由于操作較復(fù)雜，且試劑價(jià)格昂貴，因此該試驗(yàn)一般僅用于篩選試驗(yàn)陽性標(biāo)本的確診試驗(yàn)，目前絕大多數(shù)醫(yī)院檢驗(yàn)科均把該方法作為梅毒螺旋體特異性抗體診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[15]。

綜上所述，四種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，TRUST敏感性較差，適宜臨床療效觀察、隨訪及梅毒復(fù)發(fā)的輔組診斷；TP-ELISA敏感性特異性高，適用于臨床大批量標(biāo)本的測(cè)定；SYP敏感性特異性高，適用于其它梅毒抗體定性試驗(yàn)的比對(duì)；TPPA高敏感性、高特異性，可用作陽性標(biāo)本的確診試驗(yàn)。最后，結(jié)合各方法優(yōu)缺點(diǎn)，探索出梅毒螺旋體合理的檢測(cè)模式：先用TP-ELISA初篩→陽性標(biāo)本同時(shí)采用SYP比對(duì)→兩種定性方法結(jié)果不符→用TPPA確診→陽性TRUST非特異性抗性滴度。相信采用上述四種檢驗(yàn)方法對(duì)梅毒螺旋體抗體的全面檢測(cè)，肯定能夠得到正確結(jié)果，為臨床醫(yī)生對(duì)梅毒的診斷提供重要的參考依據(jù)。

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